其中擴(kuò)增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取標(biāo)準(zhǔn)品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液。3、以標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液為模板，分別采用引物混合物1和引物混合物2進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。每條引物在反應(yīng)體系的濃度均為μm。4、同實(shí)施例2步驟一中3。5、同實(shí)施例2步驟一中4。6、同實(shí)施例2步驟一中5。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明，實(shí)施例1制備的試劑盒中的引物被替換后，部分基因座被抑制且引物混...

二代測(cè)序是一個(gè)強(qiáng)大的功能平臺(tái)，它可以同時(shí)給數(shù)以萬(wàn)計(jì)的DNA分子進(jìn)行測(cè)序。由于這種可以多個(gè)樣本同時(shí)測(cè)序的能力，在個(gè)性化醫(yī)療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測(cè)序也就是高通量測(cè)序開(kāi)創(chuàng)了**性的領(lǐng)域。早在1900年代就發(fā)明的Sanger測(cè)序法，成為了DNA測(cè)序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來(lái)進(jìn)行常規(guī)測(cè)序和NGS數(shù)據(jù)的驗(yàn)證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補(bǔ)的拷貝。在每個(gè)反應(yīng)中，一個(gè)可以特異性識(shí)別模版的單鏈引物，可以從3端開(kāi)始啟動(dòng)DNA合成，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，脫氧核糖核苷酸或簡(jiǎn)單的核苷酸是一個(gè)接一個(gè)的與模版配對(duì)。NGS平臺(tái)自身的軟件大多是做分析及報(bào)告的，樣本管理或...

既節(jié)約時(shí)間又降低測(cè)序成本。目前，基于法庭科學(xué)領(lǐng)域運(yùn)用**多的ngs系統(tǒng)為illumina公司的miseqfgxtm系統(tǒng)和thermofisher公司的iontorrentpgmtm系統(tǒng)，但針對(duì)以上平臺(tái)的二代測(cè)序商業(yè)化str分型試劑盒的研發(fā)尚處于起步階段，主要有powerseqautosystem(promega，madison，wi,usa)、forenseqtmdnasignatureprepkit(illumina，sandiego，ca，usa)和precisionidglobalfilerngsstrkit(termofisher，waltham，ma，usa)。但以上試劑...

其中擴(kuò)增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取標(biāo)準(zhǔn)品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液。3、以標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液為模板，分別采用引物混合物1和引物混合物2進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。每條引物在反應(yīng)體系的濃度均為μm。4、同實(shí)施例2步驟一中3。5、同實(shí)施例2步驟一中4。6、同實(shí)施例2步驟一中5。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明，實(shí)施例1制備的試劑盒中的引物被替換后，部分基因座被抑制且引物混...

1977年，WalterGilbert和FrederickSanger發(fā)明了***臺(tái)測(cè)序儀，并應(yīng)用其測(cè)定了***個(gè)基因組序列，噬菌體X174，全長(zhǎng)5375個(gè)堿基。由此開(kāi)始，人類獲得了探索生命遺傳本質(zhì)的能力，生命科學(xué)的研究進(jìn)入了基因組學(xué)的時(shí)代，到至今為止的四十年時(shí)間內(nèi)，測(cè)序技術(shù)已取得了相當(dāng)大的發(fā)展，從***代發(fā)展到了第三代測(cè)序技術(shù)。Sanger所發(fā)明的測(cè)序方法被稱為***代測(cè)序技術(shù)，該技術(shù)直到現(xiàn)在依然被***使用，但是其一次只能獲得一條長(zhǎng)度在700～1000個(gè)堿基的序列，無(wú)法滿足現(xiàn)代科學(xué)發(fā)展對(duì)生物基因序列獲取的迫切需求。高通量測(cè)序(High-ThroughputSequencing,...

本發(fā)明屬于法醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)68個(gè)基因座的試劑盒及其使用的引物組合，尤其涉及基于二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)67個(gè)y-str基因座和amelogenin基因座的試劑盒及其使用的引物組合。背景技術(shù)：短串聯(lián)重復(fù)(shorttandemrepeat，str)是由2～6bp重復(fù)單位串聯(lián)組成且***存在于人類基因組中的一類具有長(zhǎng)度多態(tài)性的dna序列，是目前法醫(yī)個(gè)體識(shí)別和親子鑒定應(yīng)用*****的遺傳標(biāo)記。人類y染色體短串聯(lián)重復(fù)(y-chromosomeshorttandemrepeats，y-str)具有父系遺傳、缺乏重組、分型簡(jiǎn)單、信息量大、多態(tài)性高等特點(diǎn)，是研究人類的起源進(jìn)化、民...

本發(fā)明屬于法醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)68個(gè)基因座的試劑盒及其使用的引物組合，尤其涉及基于二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)67個(gè)y-str基因座和amelogenin基因座的試劑盒及其使用的引物組合。背景技術(shù)：短串聯(lián)重復(fù)(shorttandemrepeat，str)是由2～6bp重復(fù)單位串聯(lián)組成且***存在于人類基因組中的一類具有長(zhǎng)度多態(tài)性的dna序列，是目前法醫(yī)個(gè)體識(shí)別和親子鑒定應(yīng)用*****的遺傳標(biāo)記。人類y染色體短串聯(lián)重復(fù)(y-chromosomeshorttandemrepeats，y-str)具有父系遺傳、缺乏重組、分型簡(jiǎn)單、信息量大、多態(tài)性高等特點(diǎn)，是研究人類的起源進(jìn)化、民...

測(cè)序成本的變化除了測(cè)序通量和讀長(zhǎng)的進(jìn)步之外，測(cè)序技術(shù)的大范圍應(yīng)用**主要應(yīng)該歸功于成本的下降，在早期只有***代測(cè)序技術(shù)之時(shí)，人類基因組計(jì)劃耗資30億美元才獲得了大部分的人類基因組信息，這樣高昂的成本顯然不是常規(guī)科學(xué)研究者能夠承受的?；驕y(cè)序技術(shù)成本變化新一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用**降低了獲取核酸序列所需的成本，其打破了摩爾定律的限制，使得獲得基因序列所需的金錢出現(xiàn)了斷崖式的下降，在2008年，全基因組測(cè)序的成本降至20萬(wàn)美元，到2010年，該費(fèi)用已經(jīng)可以控制在10000美元以內(nèi)，目前，測(cè)定一個(gè)人類的全基因組只需要不到1000美元即可完成。測(cè)序技術(shù)的發(fā)展方向目前，基因測(cè)序技術(shù)已經(jīng)在...

⑦側(cè)翼序列堿基數(shù)，各部分之間用tab鍵隔開(kāi)。按照這種格式依次對(duì)68個(gè)基因座進(jìn)行錄入。68個(gè)基因座基因配置文件錄入完成后，運(yùn)行***。該文件給出了①基因座名稱，②基因分型，③擴(kuò)增子堿基數(shù)，④擴(kuò)增子序列信息，⑤測(cè)序深度五個(gè)部分。根據(jù)國(guó)際法醫(yī)遺傳學(xué)會(huì)(internationalsocietyforforensicgenetics，isfg)發(fā)表的關(guān)于y-str基因座的str序列指南()和niststr數(shù)據(jù)庫(kù)(strbase.)y染色體str情況說(shuō)明對(duì)67個(gè)y-str基因座的序列構(gòu)建**重復(fù)結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)品2800m得到了完整的str分型，完全能夠滿足法醫(yī)str檢驗(yàn)的...

實(shí)施例3、實(shí)施例1制備的試劑盒的準(zhǔn)確性驗(yàn)證1、取1ng標(biāo)準(zhǔn)品2800m、樣本一、樣本二或樣本三(見(jiàn)實(shí)施例2中步驟二)，按照yfilerpluspcramplifcationkit(thermofisherscientific)的說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行毛細(xì)管電泳檢測(cè)，得到各個(gè)基因座的等位基因基因型。分型結(jié)果見(jiàn)表4。表4注：m為毛細(xì)管電泳檢測(cè)技術(shù)的分型結(jié)果，e為二代測(cè)序技術(shù)的分型結(jié)果。2、按照實(shí)施例2中步驟一的方法檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品2800m、樣本一、樣本二或樣本三，得到各個(gè)基因座的等位基因基因型。分型結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果表明，實(shí)施例1制備的試劑盒與yfilerpluspcramplifcationkit重合...

下游的引物IP用于第二輪多重PCR。具體的建庫(kù)過(guò)程是：步驟1，將樣本DNA進(jìn)行片段化處理，隨后每個(gè)片段兩端加上特殊的接頭；步驟2，加入***輪擴(kuò)增的上游引物混合池，與特殊接頭互補(bǔ)的通用引物，配制成PCR總體系，進(jìn)行***輪擴(kuò)增；步驟3，將***輪PCR產(chǎn)物純化后，加入第二輪擴(kuò)增的下游引物混合池，與第二步中使用過(guò)的特殊接頭互補(bǔ)的通用引物配制成PCR總體系，進(jìn)行第二輪擴(kuò)增；步驟4，將第二輪PCR產(chǎn)物純化后，配置反應(yīng)總體系，進(jìn)行Q-PCR定量，稀釋到合適的濃度，即可用于二代測(cè)序。上述技術(shù)方案中，作為推薦，步驟2中，***輪特異性引物是普通的PCR擴(kuò)增引物，共20個(gè)左右的堿基，Tm值設(shè)定在60...

測(cè)序成本的變化除了測(cè)序通量和讀長(zhǎng)的進(jìn)步之外，測(cè)序技術(shù)的大范圍應(yīng)用**主要應(yīng)該歸功于成本的下降，在早期只有***代測(cè)序技術(shù)之時(shí)，人類基因組計(jì)劃耗資30億美元才獲得了大部分的人類基因組信息，這樣高昂的成本顯然不是常規(guī)科學(xué)研究者能夠承受的?；驕y(cè)序技術(shù)成本變化新一代測(cè)序技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用**降低了獲取核酸序列所需的成本，其打破了摩爾定律的限制，使得獲得基因序列所需的金錢出現(xiàn)了斷崖式的下降，在2008年，全基因組測(cè)序的成本降至20萬(wàn)美元，到2010年，該費(fèi)用已經(jīng)可以控制在10000美元以內(nèi)，目前，測(cè)定一個(gè)人類的全基因組只需要不到1000美元即可完成。測(cè)序技術(shù)的發(fā)展方向目前，基因測(cè)序技術(shù)已經(jīng)在...

***代測(cè)序技術(shù)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法樣品測(cè)序無(wú)信號(hào)此時(shí)測(cè)序完全失敗，**可能的原因是待測(cè)樣品出現(xiàn)了降解或引物失效，從而導(dǎo)致測(cè)序引物與待測(cè)樣品無(wú)法結(jié)合。此時(shí)探索造成測(cè)序失敗的具體原因并無(wú)實(shí)際意義，**快速、簡(jiǎn)便的辦法是重新提供質(zhì)量合格的引物和樣品再次進(jìn)行測(cè)序。樣品測(cè)序信號(hào)差此種情況可能是引物或模板的質(zhì)量不高或是引物和模板的匹配性不好引起的，但**有可能的原因是待測(cè)樣品濃度偏低。待測(cè)樣品濃度偏低可能是由于PCR效率較低，也可能是PCR與測(cè)序間隔時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致PCR產(chǎn)物降解。建議PCR完成后盡快進(jìn)行測(cè)序，如果PCR產(chǎn)物濃度本身較低，可以使用PCR產(chǎn)物作為模板進(jìn)行二次PCR，也可以對(duì)PCR產(chǎn)...

1977年，WalterGilbert和FrederickSanger發(fā)明了***臺(tái)測(cè)序儀，并應(yīng)用其測(cè)定了***個(gè)基因組序列，噬菌體X174，全長(zhǎng)5375個(gè)堿基。由此開(kāi)始，人類獲得了探索生命遺傳本質(zhì)的能力，生命科學(xué)的研究進(jìn)入了基因組學(xué)的時(shí)代，到至今為止的四十年時(shí)間內(nèi)，測(cè)序技術(shù)已取得了相當(dāng)大的發(fā)展，從***代發(fā)展到了第三代測(cè)序技術(shù)。Sanger所發(fā)明的測(cè)序方法被稱為***代測(cè)序技術(shù)，該技術(shù)直到現(xiàn)在依然被***使用，但是其一次只能獲得一條長(zhǎng)度在700～1000個(gè)堿基的序列，無(wú)法滿足現(xiàn)代科學(xué)發(fā)展對(duì)生物基因序列獲取的迫切需求。高通量測(cè)序(High-ThroughputSequencing,...

于是，每個(gè)反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生許多不同長(zhǎng)度的DN**段，并在模版的任一核苷酸位置上由其中一種雙脫氧核糖核苷酸終止鏈的延伸。反應(yīng)混合物可以通過(guò)手動(dòng)灌膠或自動(dòng)灌膠到用毛細(xì)管進(jìn)入測(cè)序機(jī)器，再根據(jù)DNA分子大小不同用電泳分離DNA。當(dāng)DNA流過(guò)凝膠后，DNA序列可以通過(guò)雙脫氧核糖核苷酸上發(fā)出的熒光來(lái)進(jìn)行分析。當(dāng)今的Sanger測(cè)序儀使用的是毛細(xì)管自動(dòng)上樣的凝膠電泳，一般可以同時(shí)分析8-96個(gè)系列反應(yīng)。二代測(cè)序系統(tǒng)在十年前就是因其可同時(shí)進(jìn)行大量平行測(cè)序反應(yīng)而廣為人知。這些系統(tǒng)可以同時(shí)分析百萬(wàn)甚至上億個(gè)序列反應(yīng)。雖然不同的機(jī)器生產(chǎn)時(shí)會(huì)在技術(shù)細(xì)節(jié)上有許多不同，但他們都有以下幾個(gè)共同點(diǎn)：1,文庫(kù)建立：所有二...

第三代測(cè)序技術(shù)以PacBio公司的SMRT技術(shù)和OxfordNanoporeTechnologies公司的納米孔單分子技術(shù)為**的新一代測(cè)序技術(shù)被稱為第三代測(cè)序技術(shù)，與前兩代測(cè)序技術(shù)相比，其比較大的特點(diǎn)就是單分子測(cè)序，測(cè)序過(guò)程無(wú)需進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并且理論上可以測(cè)定無(wú)限長(zhǎng)度的核酸序列。PacBio技術(shù)平臺(tái)SMRT芯片是一種帶有很多ZMW孔的厚度為100nm的金屬片，將DNA聚合酶、待測(cè)序列和不同熒光標(biāo)記的dNTP放入ZMW孔的底部。熒光標(biāo)記的位置是磷酸基團(tuán)，當(dāng)一個(gè)dNTP被添加到合成鏈上的同時(shí)，它會(huì)進(jìn)入ZMW孔的熒光信號(hào)檢測(cè)區(qū)，根據(jù)熒光的種類就可以判定dNTP的種類，從而獲得核酸的堿...

⑦側(cè)翼序列堿基數(shù)，各部分之間用tab鍵隔開(kāi)。按照這種格式依次對(duì)68個(gè)基因座進(jìn)行錄入。68個(gè)基因座基因配置文件錄入完成后，運(yùn)行***。該文件給出了①基因座名稱，②基因分型，③擴(kuò)增子堿基數(shù)，④擴(kuò)增子序列信息，⑤測(cè)序深度五個(gè)部分。根據(jù)國(guó)際法醫(yī)遺傳學(xué)會(huì)(internationalsocietyforforensicgenetics，isfg)發(fā)表的關(guān)于y-str基因座的str序列指南()和niststr數(shù)據(jù)庫(kù)(strbase.)y染色體str情況說(shuō)明對(duì)67個(gè)y-str基因座的序列構(gòu)建**重復(fù)結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)品2800m得到了完整的str分型，完全能夠滿足法醫(yī)str檢驗(yàn)的...

室溫孵育1分鐘。e.孔板再次放上磁力架，等待2分鐘，溶液澄清后，轉(zhuǎn)移上清到新的孔板中。三、第二輪多重PCRa.第二輪特異性引物是普通的PCR擴(kuò)增引物，在其5’端加上測(cè)序接頭5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’共80個(gè)左右的堿基，其中根據(jù)目標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)得到的序列長(zhǎng)度是20個(gè)堿基左右，Tm值設(shè)定在60℃，多個(gè)引物混成一個(gè)IP引物池做為第二輪PCR的上游引物。P7的序列：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAG-3’。配置PCR總體系，按照理論值的125％配制，震蕩混勻，短時(shí)離心。b.孔板放入...

細(xì)胞鑒定：表面標(biāo)志物鑒定（流式細(xì)胞術(shù)），分化能力鑒定（間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化、間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化、間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化），核型分析；細(xì)胞轉(zhuǎn)染：慢病毒、腺相關(guān)病毒、腺病毒、質(zhì)粒、microRNA、lncRNA等轉(zhuǎn)染服務(wù)；免疫學(xué)分析：免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、激光共聚焦、westernblot、Co-IP、ELISA等；分子技術(shù)：qPCR、PCR、***定量PCR等。關(guān)鍵詞：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞、人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞、人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞、人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、兔骨髓間...

不同的二代測(cè)序平臺(tái)的區(qū)別主要體現(xiàn)在測(cè)序反應(yīng)的技術(shù)上，這些差別可以分為4類：焦磷酸測(cè)序，合成法測(cè)序，連接法測(cè)序和離子半導(dǎo)體測(cè)序。焦磷酸測(cè)序在焦磷酸測(cè)序中，測(cè)序反應(yīng)通過(guò)每個(gè)核苷酸結(jié)合過(guò)程中釋放的焦磷酸來(lái)調(diào)控。釋放的焦磷酸參與了一系列化學(xué)反應(yīng)從而導(dǎo)致鏈光的產(chǎn)***出的光由記錄基因蔟相應(yīng)序列的相機(jī)來(lái)檢測(cè)。測(cè)序反應(yīng)開(kāi)始后，先一次孵育一個(gè)堿基，測(cè)量光發(fā)射情況（如果有的話），在降解未參與反應(yīng)的堿基，***加入另一個(gè)堿基。這項(xiàng)技術(shù)能夠產(chǎn)生較大的讀取長(zhǎng)度，已經(jīng)可以與Sanger測(cè)序法得到的讀取長(zhǎng)度相比較。然而，高昂的試劑花費(fèi)，和有6個(gè)或以上的均聚物會(huì)產(chǎn)生的高錯(cuò)誤率阻礙了這個(gè)技術(shù)的應(yīng)用。合成法測(cè)序合成...

二代測(cè)序是一個(gè)強(qiáng)大的功能平臺(tái)，它可以同時(shí)給數(shù)以萬(wàn)計(jì)的DNA分子進(jìn)行測(cè)序。由于這種可以多個(gè)樣本同時(shí)測(cè)序的能力，在個(gè)性化醫(yī)療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測(cè)序也就是高通量測(cè)序開(kāi)創(chuàng)了**性的領(lǐng)域。早在1900年代就發(fā)明的Sanger測(cè)序法，成為了DNA測(cè)序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來(lái)進(jìn)行常規(guī)測(cè)序和NGS數(shù)據(jù)的驗(yàn)證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補(bǔ)的拷貝。在每個(gè)反應(yīng)中，一個(gè)可以特異性識(shí)別模版的單鏈引物，可以從3端開(kāi)始啟動(dòng)DNA合成，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，脫氧核糖核苷酸或簡(jiǎn)單的核苷酸是一個(gè)接一個(gè)的與模版配對(duì)。NGS平臺(tái)自身的軟件大多是做分析及報(bào)告的，樣本管理或...

于是，每個(gè)反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生許多不同長(zhǎng)度的DN**段，并在模版的任一核苷酸位置上由其中一種雙脫氧核糖核苷酸終止鏈的延伸。反應(yīng)混合物可以通過(guò)手動(dòng)灌膠或自動(dòng)灌膠到用毛細(xì)管進(jìn)入測(cè)序機(jī)器，再根據(jù)DNA分子大小不同用電泳分離DNA。當(dāng)DNA流過(guò)凝膠后，DNA序列可以通過(guò)雙脫氧核糖核苷酸上發(fā)出的熒光來(lái)進(jìn)行分析。當(dāng)今的Sanger測(cè)序儀使用的是毛細(xì)管自動(dòng)上樣的凝膠電泳，一般可以同時(shí)分析8-96個(gè)系列反應(yīng)。二代測(cè)序系統(tǒng)在十年前就是因其可同時(shí)進(jìn)行大量平行測(cè)序反應(yīng)而廣為人知。這些系統(tǒng)可以同時(shí)分析百萬(wàn)甚至上億個(gè)序列反應(yīng)。雖然不同的機(jī)器生產(chǎn)時(shí)會(huì)在技術(shù)細(xì)節(jié)上有許多不同，但他們都有以下幾個(gè)共同點(diǎn)：1,文庫(kù)建立：所有二...

01FGFR簡(jiǎn)介及信號(hào)通路成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(FGFR)是高度保守、***分布的跨膜酪氨酸激酶受體，包括FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4四種受體亞型。成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）與FGFR結(jié)合時(shí)，受體二聚化，從而引起受體激酶結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞內(nèi)磷酸化、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)和基因轉(zhuǎn)錄的級(jí)聯(lián)反應(yīng)[1]。由FGFR***的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路包括RAS–RAF–MAPK，PI3K–AKT，STAT和PLC途徑，它們參與調(diào)控多種生物學(xué)過(guò)程，如***發(fā)育、血管新生、細(xì)胞增殖、遷移、抗凋亡等（圖1）。圖1FGFR信號(hào)通路[2-4]當(dāng)FGFR發(fā)生突變或者過(guò)表達(dá)時(shí)，會(huì)引起四個(gè)關(guān)鍵的下游信號(hào)通路的過(guò)度...

panFGFxpanel的優(yōu)勢(shì)在于：針對(duì)性強(qiáng)——panel“小而精”，集中研究FGFR及上下游信號(hào)通路關(guān)鍵基因；應(yīng)用性廣——panel小，成本低；搭配酶切建庫(kù)法、快速雜交法，縮短TAT；靈活性強(qiáng)——探針可實(shí)現(xiàn)物理上模塊區(qū)分，隨時(shí)滿足伴隨診斷產(chǎn)品開(kāi)發(fā)需求。??方案3：IHC法檢測(cè)FGF-19過(guò)表達(dá)當(dāng)前針對(duì)肝*及乳腺*的FGFR4抑制劑開(kāi)發(fā)速度很快，多個(gè)藥物進(jìn)入臨床II期的研究。FGFR4-FGF19信號(hào)通路在肝細(xì)胞*（HCC）的發(fā)***展過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。有研究顯示，在骨骼肌中過(guò)表達(dá)FGF19的轉(zhuǎn)基因小鼠在其生命早期會(huì)發(fā)生多發(fā)性HCC，而其他組織則不會(huì)受到影響，初步推斷FGF19通過(guò)**...

于是，每個(gè)反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生許多不同長(zhǎng)度的DN**段，并在模版的任一核苷酸位置上由其中一種雙脫氧核糖核苷酸終止鏈的延伸。反應(yīng)混合物可以通過(guò)手動(dòng)灌膠或自動(dòng)灌膠到用毛細(xì)管進(jìn)入測(cè)序機(jī)器，再根據(jù)DNA分子大小不同用電泳分離DNA。當(dāng)DNA流過(guò)凝膠后，DNA序列可以通過(guò)雙脫氧核糖核苷酸上發(fā)出的熒光來(lái)進(jìn)行分析。當(dāng)今的Sanger測(cè)序儀使用的是毛細(xì)管自動(dòng)上樣的凝膠電泳，一般可以同時(shí)分析8-96個(gè)系列反應(yīng)。二代測(cè)序系統(tǒng)在十年前就是因其可同時(shí)進(jìn)行大量平行測(cè)序反應(yīng)而廣為人知。這些系統(tǒng)可以同時(shí)分析百萬(wàn)甚至上億個(gè)序列反應(yīng)。雖然不同的機(jī)器生產(chǎn)時(shí)會(huì)在技術(shù)細(xì)節(jié)上有許多不同，但他們都有以下幾個(gè)共同點(diǎn)：1,文庫(kù)建立：所有二...

h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個(gè)體識(shí)別；(h4)親權(quán)鑒定；(h5)種族推斷。本發(fā)明還保護(hù)上述任一所述引物組合或上述任一所述復(fù)合擴(kuò)增體系的應(yīng)用，可為(h1)-(h5)中的至少一種：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個(gè)體識(shí)別；(h4)親權(quán)鑒定；(h5)種族推斷。上述任一所述68個(gè)基因座具體可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dy...

2、IlluminaSolexa測(cè)序方法：由Solexa公司開(kāi)發(fā)，2006年發(fā)布，于2007年被Illumina收購(gòu)，并將測(cè)序儀命名商品化為IlluminaGenomeAnalyzer（簡(jiǎn)稱GA）；Illumina不斷升級(jí)GA，特別是HiSeq系列測(cè)序儀的研發(fā)完成，由此打破了***的“摩爾定律”。基本流程：（1）構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)。提取基因組DNA，隨機(jī)打斷成100-200bp片段，末端加上接頭；（2）橋式擴(kuò)增。解鏈后的單鏈DN**段兩端被分別固定于芯片上，形成橋狀結(jié)構(gòu)，進(jìn)行橋式PCR擴(kuò)增。經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增，產(chǎn)生數(shù)百萬(wàn)條待測(cè)的DN**段，隨后被線性化；（3）測(cè)序。將熒光標(biāo)記的dNTP、聚合...

二代測(cè)序是一個(gè)強(qiáng)大的功能平臺(tái)，它可以同時(shí)給數(shù)以萬(wàn)計(jì)的DNA分子進(jìn)行測(cè)序。由于這種可以多個(gè)樣本同時(shí)測(cè)序的能力，在個(gè)性化醫(yī)療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測(cè)序也就是高通量測(cè)序開(kāi)創(chuàng)了**性的領(lǐng)域。早在1900年代就發(fā)明的Sanger測(cè)序法，成為了DNA測(cè)序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來(lái)進(jìn)行常規(guī)測(cè)序和NGS數(shù)據(jù)的驗(yàn)證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補(bǔ)的拷貝。在每個(gè)反應(yīng)中，一個(gè)可以特異性識(shí)別模版的單鏈引物，可以從3端開(kāi)始啟動(dòng)DNA合成，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，脫氧核糖核苷酸或簡(jiǎn)單的核苷酸是一個(gè)接一個(gè)的與模版配對(duì)。每個(gè)反應(yīng)還包含四種雙脫氧核糖核苷酸的混合物，每一種對(duì)...

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及二代測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建技術(shù)。背景技術(shù)：二代測(cè)序由于其超高的測(cè)序能力在科研和臨床中具有極為重要的應(yīng)用。二代測(cè)序技術(shù)也稱深度測(cè)序、大規(guī)模平行測(cè)序，**思想是邊合成邊測(cè)序(SequencingbySynthesis)，即通過(guò)捕捉新合成的末端的標(biāo)記來(lái)確定DNA的序列，現(xiàn)有的技術(shù)平臺(tái)主要有Roche/454FLX、Illumina/SolexaGenomeAnalyzer和AppliedBiosystemsSOLIDsystem。這三個(gè)技術(shù)平臺(tái)各有優(yōu)點(diǎn)，454FLX的測(cè)序片段比較長(zhǎng)，高質(zhì)量的讀長(zhǎng)能達(dá)到400bp；Solexa測(cè)序性價(jià)比**高，不*機(jī)器的售價(jià)比其他兩種低，...

pcrpurificationkit為德國(guó)qiagen公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為y5-28006。。qubittmdsdnahsassaykit為thermofisher公司的產(chǎn)品，貨號(hào)為q32854。truseqdnapcr-freehtlibraryprepkit為illumina公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為fc-121-3003。kapalibraryquantificationkit為kapa公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為kk4824。miseqreagentkitv3-600cycles測(cè)序試劑為illumina公司的產(chǎn)品，貨號(hào)為ms-102-3003。miseqfgx二代測(cè)序儀為ill...