河北多靶點邁杰轉化醫(yī)學NGS平臺值得推薦

    測序成本的變化除了測序通量和讀長的進步之外，測序技術的大范圍應用**主要應該歸功于成本的下降，在早期只有***代測序技術之時，人類基因組計劃耗資30億美元才獲得了大部分的人類基因組信息，這樣高昂的成本顯然不是常規(guī)科學研究者能夠承受的?；驕y序技術成本變化新一代測序技術的發(fā)明和應用**降低了獲取核酸序列所需的成本，其打破了摩爾定律的限制，使得獲得基因序列所需的金錢出現(xiàn)了斷崖式的下降，在2008年，全基因組測序的成本降至20萬美元，到2010年，該費用已經(jīng)可以控制在10000美元以內(nèi)，目前，測定一個人類的全基因組只需要不到1000美元即可完成。測序技術的發(fā)展方向目前，基因測序技術已經(jīng)在眾多領域得到廣泛應用，包括生物的基因組圖譜繪制、環(huán)境基因組學和微生物多樣性、轉錄水平動態(tài)響應及其調(diào)控機制，疾病相關基因的確定和診斷、表觀遺傳學和考古學、物種進化演替過程等等。就當前市場形勢看來第二代短讀長測序技術在全球測序市場上仍然占有著***的優(yōu)勢地位，但第三代測序技術的應用也已在近幾年實驗了快速發(fā)展。未來基因測序技術發(fā)展方向：更快的序列獲取速度；更準確的堿基識別方式；更長的單條測序序列長度；更輕便的測序儀器平臺；更簡便的操作過程。 邁杰中心實驗室設有SLAN 96P、Rotor-Gene Q、ABI 7500、ABI ViiA7、Roche z480等實時熒光定量PCR儀及數(shù)字PCR儀！河北多靶點邁杰轉化醫(yī)學NGS平臺值得推薦

    第三代測序技術以PacBio公司的SMRT技術和OxfordNanoporeTechnologies公司的納米孔單分子技術為**的新一代測序技術被稱為第三代測序技術，與前兩代測序技術相比，其比較大的特點就是單分子測序，測序過程無需進行PCR擴增，并且理論上可以測定無限長度的核酸序列。PacBio技術平臺SMRT芯片是一種帶有很多ZMW孔的厚度為100nm的金屬片，將DNA聚合酶、待測序列和不同熒光標記的dNTP放入ZMW孔的底部。熒光標記的位置是磷酸基團，當一個dNTP被添加到合成鏈上的同時，它會進入ZMW孔的熒光信號檢測區(qū)，根據(jù)熒光的種類就可以判定dNTP的種類，從而獲得核酸的堿基序列信息。ZMW孔PacBio平臺測序原理每個ZWM孔只允許一條DNA模板進入，DNA模板進入后，DNA聚合酶與模板結合，加入4種不同顏色熒光標記4種dNTP，其通過布朗運動隨機進入檢測區(qū)域并與聚合酶結合從而延伸模板，與模板匹配的堿基生成化學鍵的時間遠遠長于其他堿基停留的時間，因此統(tǒng)計熒光信號存在時間的長短，可區(qū)分匹配的堿基與游離堿基。通過統(tǒng)計4種熒光信號與時間的關系，即可測定DNA模板序列。 河北多靶點邁杰轉化醫(yī)學NGS平臺值得推薦MSH6抗體試劑 蘇蘇械備20180569號.

    二代測序是一個強大的功能平臺，它可以同時給數(shù)以萬計的DNA分子進行測序。由于這種可以多個樣本同時測序的能力，在個性化醫(yī)療、遺傳疾病和臨床診斷等方面，二代測序也就是高通量測序開創(chuàng)了**性的領域。早在1900年代就發(fā)明的Sanger測序法，成為了DNA測序的黃金法則，即便到了***它仍被***用來進行常規(guī)測序和NGS數(shù)據(jù)的驗證。它利用高保真DNA聚合酶生成與單鏈DNA模版互補的拷貝。在每個反應中，一個可以特異性識別模版的單鏈引物，可以從3端開始啟動DNA合成，根據(jù)堿基互補配對原則，脫氧核糖核苷酸或簡單的核苷酸是一個接一個的與模版配對。每個反應還包含四種雙脫氧核糖核苷酸的混合物，每一種對應一個DNA堿基。這些雙脫氧核糖核苷酸與DNA單體十分類似，因此可以參與DNA鏈的增長，但是他們和天然的脫氧核糖核苷酸有兩點不同：（1）他們?nèi)鄙僖粋€會影響DNA鏈進一步衍生的3’羥基。在DNA延伸過程中，這個3’羥基一旦加入DNA分子中就會導致鏈的終止；（2）每個雙脫氧核糖核苷酸都有獨特的熒光染料吸附，使得DNA測序的自動檢測得以進行。

    67個y-str基因座分別為：dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10、y-gata-h4；其中，dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b、dys527a/b分別包含兩個分型片段，dyf399s1包含三個分型片段。二、引物組合的制備1、人工設計并合成用于擴增每個基因座的引物(要求擴增長度**好300bp以下)，然后進行pcr擴增，獲得每個基因座的特異性擴增產(chǎn)物。2、綜合單個基因座的擴增條件，選擇適宜擴增程序，進行復合擴增。由于復合的基因座數(shù)目較多，引物間相互抑制情況復雜，所以需要一一排除，找出這些基因座，重新設計并合成引物。此外，不同基因座的引物之間還會形成引物二聚體。邁杰dMMR抗體檢測試劑采用免疫組織化學法（IHC）檢測組織中MLH1、MSH2、MSH6 和、PMS2 四種蛋白的表達。

    圖7IHC檢測FGF-19過表達（左：正常膽囊組織(陽性對照)；右：肝細胞*組織(弱陽性)）??方案4：RNAscope法評估FGFR1/2/3/4的mRNA表達水平此外，RNAscope在細胞原位評估m(xù)RNAs水平方面，能夠更直接精細地確定基因的擴增狀況。邁杰轉化醫(yī)學在數(shù)字病理平臺上已經(jīng)建立了檢測FGFR過表達的RNAscope的方法，可以原位檢測FGFR1-4mRNAs表達水平，為FGFR抑制劑的生物標志物檢測和研究提供了更多可能（圖8）。圖8RNAscope檢測肺*總FGFR1/2/3/4的mRNA表達水平除以上示范，邁杰轉化醫(yī)學還可提供其他類型（如PD/PK生物標志物）解決方案并已有相關經(jīng)驗（表7）。References:[1]HelstenT,ElkinS,ArthurE,[J].ClinicalCancerResearchAnOfficialJournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch,2016,22(1):259.[2]TurnerN,.[J].NatureReviewsCancer,2010,10(2):116-129.[3]PetersKG,MarieJ,WilsonE,[J].Nature,1992,358(6388):678-681.[4]KangS,ElfS,DongS,.[J].MolecularandCellularBiology,2009,29(8):2105-2117.[5]BabinaIS,[J].NatureReviewsCancer,2017,17(5):318.[6]NataliaPor?bska,Marta,.[J].JournalofClinicalMedicine。 【邁杰轉化醫(yī)學】一直以來致力于轉化醫(yī)學服務和伴隨診斷產(chǎn)品開發(fā)及商業(yè)化。廣東一體化邁杰轉化醫(yī)學NGS平臺鄭重承諾

邁杰轉化醫(yī)學目前已完成約30+靶點的方法學驗證，50+靶點的方法學建立。河北多靶點邁杰轉化醫(yī)學NGS平臺值得推薦

    第二代測序技術高通量測序技術(High-throughputsequencing,HTS)是對傳統(tǒng)Sanger測序技術**性的變革，可以一次對幾十萬到幾百萬條核酸分子進行序列測定，因此也稱其為下一代測序技術(NextGenerationSequencing,NGS)，高通量測序技術的出現(xiàn)使得對一個物種的轉錄組和基因組進行細致全貌的分析成為可能。技術平臺經(jīng)過科研人員的不斷開發(fā)和改進，目前成熟的第二代測序技術共有3種，分別為Roche公司的454技術、ABI公司的SOLiD技術和Illumina公司的Solexa技術。Roche/454該技術由JonathanRothberg于2005年發(fā)明，該技術是***個被發(fā)明的二代測序技術，該技術**生命科學的研究進入高通量測序時代。該技術的基本原理是：一個片段=一個磁珠=一條讀長，DN**段無需進行熒光標記，無需電泳，邊合成變測序，堿基在加入到序列中時，會脫掉一個焦磷酸，通過檢測焦磷酸識別堿基，因此也被稱為焦磷酸測序。 河北多靶點邁杰轉化醫(yī)學NGS平臺值得推薦