重慶組織標(biāo)本邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺鄭重承諾

    本發(fā)明屬于法醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于二代測序技術(shù)檢測68個基因座的試劑盒及其使用的引物組合，尤其涉及基于二代測序技術(shù)檢測67個y-str基因座和amelogenin基因座的試劑盒及其使用的引物組合。背景技術(shù)：短串聯(lián)重復(fù)(shorttandemrepeat，str)是由2～6bp重復(fù)單位串聯(lián)組成且***存在于人類基因組中的一類具有長度多態(tài)性的dna序列，是目前法醫(yī)個體識別和親子鑒定應(yīng)用*****的遺傳標(biāo)記。人類y染色體短串聯(lián)重復(fù)(y-chromosomeshorttandemrepeats，y-str)具有父系遺傳、缺乏重組、分型簡單、信息量大、多態(tài)性高等特點(diǎn)，是研究人類的起源進(jìn)化、民族差異、種族差異、群體及地區(qū)分布等的有力工具。因此，y染色體str基因座多態(tài)性研究可為法醫(yī)學(xué)個體識別和親權(quán)鑒定提供重要手段，在諸如父系家族的親權(quán)鑒定、混合斑男性成分的檢測、不同男性個體混合物的分析、追溯父系遷移歷史及重構(gòu)同一父系家族等方向都具有獨(dú)特的應(yīng)用價值。目前，熒光標(biāo)記多重擴(kuò)增結(jié)合毛細(xì)管電泳(fluorescentlabeledmultiplexpcr-capillaryelectrophoresis，pcr-ce)是str分型的主流技術(shù)；常用的商業(yè)化y-str分型試劑盒有y23(promega)、y(promega)、yfiler(thermofisherscientific)和yfilerplus。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)擁有全技術(shù)平臺及豐富的伴隨診斷開發(fā)經(jīng)驗，為藥企合作伙伴提供一體化開發(fā)服務(wù)。重慶組織標(biāo)本邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺鄭重承諾

    h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個體識別；(h4)親權(quán)鑒定；(h5)種族推斷。本發(fā)明還保護(hù)上述任一所述引物組合或上述任一所述復(fù)合擴(kuò)增體系的應(yīng)用，可為(h1)-(h5)中的至少一種：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個體識別；(h4)親權(quán)鑒定；(h5)種族推斷。上述任一所述68個基因座具體可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10和y-gata-h4組成。其中，amelogenin為性別決定基因座。dyf399s1包含三個分型片段。dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b和dys527a/b均包含兩個分型片段。本發(fā)明提供的試劑盒可以檢測68個基因座。 山西專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺值得推薦使用北歐免疫組化質(zhì)控中心NordiQC推薦的IHC抗體組合。

    2005年，羅氏推出了***款二代測序儀羅氏454，生命科學(xué)開始進(jìn)入高通量測序時代。后續(xù)隨著Illumina系列測序平臺的推出，極大降低了二代測序的價格，推動了高通量測序在生命科學(xué)各個研究領(lǐng)域的普及。目前，高通量測序已經(jīng)成為一種常規(guī)研究方法，大量科研工作中均會用到。然而，為什么二代測序能實現(xiàn)高通量？為什么二代測序讀長如此之短？為什么reads末端測序質(zhì)量會降低？應(yīng)該如何選擇測序讀長與打斷片段的長度？想要回答這些問題，都需要詳細(xì)了解二代測序的基本原理。本篇文章以典型的Illumina雙末端測序為例，詳細(xì)解析二代測序的原理。第二代測序（Next-generationsequencing，NGS）又稱為高通量測序（High-throughputsequencing），是基于PCR和基因芯片發(fā)展而來的DNA測序技術(shù)。我們都知道一代測序為合成終止測序，而二代測序開創(chuàng)性的引入了可逆終止末端，從而實現(xiàn)邊合成邊測序（SequencingbySynthesis）。二代測序在DNA復(fù)制過程中通過捕捉新添加的堿基所攜帶的特殊標(biāo)記（一般為熒光分子標(biāo)記）來確定DNA的序列，現(xiàn)有的技術(shù)平臺主要包括Roche的454FLX、Illumina的Miseq/Hiseq等。由于在二代測序中，單個DNA分子必須擴(kuò)增成由相同DNA組成的基因簇，然后進(jìn)行同步復(fù)制。

    染色體STR不屬于測序技術(shù)的，它是一類分子檢測技術(shù)，例如Y染色體-STR，一般通過PCR、電泳凝膠結(jié)合來分析這段串聯(lián)重復(fù)序列的存在或者多態(tài)性，常用來檢測性別或親子鑒定，而不能測出具體的DNA序列信息。測序技術(shù)是一代測序（sanger測序）、二代測序（高通量測序）、三代測序（單分子測序）為基礎(chǔ)的。二代測序的缺點(diǎn)主要是由其PCR邊復(fù)制邊讀取的原理決定的，測序時間長，讀長短，末端質(zhì)量差。三代測序中PacBio實際上就是針對這些缺點(diǎn)的升級，通過巧妙的微孔設(shè)計實現(xiàn)單分子讀取，而且可以屏蔽游離dNTP的信號，不用每讀取一次就要清洗—添加一次dNTP，所以讀長比較長，測序速度快。就是樣本—提DNA—打成小片段，然后就開始PCR啊末端修復(fù)啊加A啊片段選擇啊一系列，***得到片段大小為300-500bp的DNA，ok文庫搞定。雖然這行真的干的煩死了，不過離開了真的很想念。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)針對藥物研發(fā)過程中靶點(diǎn)、適應(yīng)癥及PD研究中生物標(biāo)志物等研究的進(jìn)行方案開發(fā)設(shè)計。

    染色體STR不屬于測序技術(shù)的，它是一類分子檢測技術(shù)，例如Y染色體-STR，一般通過PCR、電泳凝膠結(jié)合來分析這段串聯(lián)重復(fù)序列的存在或者多態(tài)性，常用來檢測性別或親子鑒定，而不能測出具體的DNA序列信息。測序技術(shù)是一代測序（sanger測序）、二代測序（高通量測序）、三代測序（單分子測序）為基礎(chǔ)的。二代測序的缺點(diǎn)主要是由其PCR邊復(fù)制邊讀取的原理決定的，測序時間長，讀長短，末端質(zhì)量差。三代測序中PacBio實際上就是針對這些缺點(diǎn)的升級，通過巧妙的微孔設(shè)計實現(xiàn)單分子讀取，而且可以屏蔽游離dNTP的信號，不用每讀取一次就要清洗—添加一次dNTP，所以讀長比較長，測序速度快。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)蛋白免疫產(chǎn)品開發(fā)平臺可提供基于IHC平臺的體外診斷試劑盒以及蛋白抗體原料一站式開發(fā)服務(wù)。黑龍江提供邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺口碑推薦

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)基于基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)及病理學(xué)等綜合性轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)全平臺。重慶組織標(biāo)本邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺鄭重承諾

    ，構(gòu)建單鏈DNA測序文庫。，固體支撐體的每一個單獨(dú)小空間中只包含一條DNA鏈，之后通過PCR特異性的將模板DNA進(jìn)行富集，從而達(dá)到測序所需的模板量。，反應(yīng)試劑清洗和成像捕捉，不斷反復(fù)進(jìn)行此三步循環(huán)，每一個循環(huán)按順序測定序列中的一個堿基。第二代測序技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)第二代測序技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：一次能夠同時得到大量的序列數(shù)據(jù)，相比于一代測序技術(shù)，通量提高了成千上萬倍；單條序列成本非常低廉。第二代測序技術(shù)的缺點(diǎn)：序列讀長較短，Illumina平臺**長為250-300bp，454平臺也只有500bp左右；由于建庫中利用了PCR富集序列，因此有一些含量較少的序列可能無法被大量擴(kuò)增，造成一些信息的丟失，且PCR過程中有一定概率會引入錯配堿基；想要得到準(zhǔn)確和長度較長的拼接結(jié)果，需要測序的覆蓋率較高，導(dǎo)致結(jié)果錯誤較多和成本增加。第二代測序技術(shù)的應(yīng)用二代測序是現(xiàn)階段科研市場的主力平臺，主要應(yīng)用包括：基因組測序、轉(zhuǎn)錄組測序、群體測序、擴(kuò)增子測序、宏基因組測序、重測序等。由于成本較低，二代測序在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用也十分***，主要包括：**基因組、遺傳病基因組、**與代謝疾病等。 重慶組織標(biāo)本邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺鄭重承諾