遼寧專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)鄭重承諾

    細(xì)胞鑒定：表面標(biāo)志物鑒定（流式細(xì)胞術(shù)），分化能力鑒定（間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化、間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化、間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化），核型分析；細(xì)胞轉(zhuǎn)染：慢病毒、腺相關(guān)病毒、腺病毒、質(zhì)粒、microRNA、lncRNA等轉(zhuǎn)染服務(wù)；免疫學(xué)分析：免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、激光共聚焦、westernblot、Co-IP、ELISA等；分子技術(shù)：qPCR、PCR、***定量PCR等。關(guān)鍵詞：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞、人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞、人胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞、人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、犬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)、原代細(xì)胞弗元生物，中國(guó)自己的生物品牌。邁杰多平臺(tái)的研究?jī)?yōu)勢(shì)以及多組學(xué)數(shù)據(jù)的挖掘能力，促進(jìn)產(chǎn)學(xué)研醫(yī)結(jié)合，加速項(xiàng)目成果轉(zhuǎn)化，創(chuàng)新科技產(chǎn)品研發(fā)。遼寧專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)鄭重承諾

    67個(gè)y-str基因座分別為：dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10、y-gata-h4；其中，dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b、dys527a/b分別包含兩個(gè)分型片段，dyf399s1包含三個(gè)分型片段。二、引物組合的制備1、人工設(shè)計(jì)并合成用于擴(kuò)增每個(gè)基因座的引物(要求擴(kuò)增長(zhǎng)度**好300bp以下)，然后進(jìn)行pcr擴(kuò)增，獲得每個(gè)基因座的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。2、綜合單個(gè)基因座的擴(kuò)增條件，選擇適宜擴(kuò)增程序，進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增。由于復(fù)合的基因座數(shù)目較多，引物間相互抑制情況復(fù)雜，所以需要一一排除，找出這些基因座，重新設(shè)計(jì)并合成引物。此外，不同基因座的引物之間還會(huì)形成引物二聚體。湖南抗體全邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)創(chuàng)新服務(wù)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)目前已完成約30+靶點(diǎn)的方法學(xué)驗(yàn)證，50+靶點(diǎn)的方法學(xué)建立。

    降低引物的擴(kuò)增效率，也需要重新設(shè)計(jì)并合成引物。3、初次復(fù)合擴(kuò)增時(shí)，各個(gè)引物在反應(yīng)體系中的濃度均為μm；之后對(duì)引物濃度進(jìn)行調(diào)整，獲得進(jìn)行pcr擴(kuò)增時(shí)各個(gè)引物的**佳濃度。經(jīng)過(guò)上述步驟，獲得引物組合。引物組合由120條引物組成，用于檢測(cè)68個(gè)基因座。各個(gè)基因座的名稱、擴(kuò)增基因座對(duì)應(yīng)的引物名稱和引物的核苷酸序列依次見(jiàn)表1中第1列、第2列和第3列。進(jìn)行pcr擴(kuò)增時(shí)各個(gè)引物的**佳濃度見(jiàn)表1中第5列。表1各個(gè)基因座對(duì)應(yīng)的引物在hg38人類參考基因組(hg38人類基因組的信息見(jiàn)網(wǎng)址./goldenpath/hg38/bigzips/)中的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度和核苷酸序列詳見(jiàn)表2。各個(gè)str基因座的pcr擴(kuò)增產(chǎn)物的長(zhǎng)度范圍分布見(jiàn)圖1。表2三、基于二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)68個(gè)基因座的試劑盒的制備基于二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)68個(gè)基因座的試劑盒包括引物混合物；引物混合物由步驟二制備的120條引物混合而成。實(shí)施例2、實(shí)施例1制備的試劑盒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品2800m的str分型及其應(yīng)用一、實(shí)施例1制備的試劑盒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品2800m的str分型1、dna樣本準(zhǔn)備取標(biāo)準(zhǔn)品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液。2、pcr擴(kuò)增以標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液為模板，采用實(shí)施例1步驟三制備的引物混合物進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。

    吸棄上清。f.每孔加入100uL80％乙醇，靜置30秒，吸棄上清。重復(fù)一遍。短時(shí)離心，吸棄上清。g.晾干3-5分鐘，觀察磁珠表面不再潮濕反光，成霧面狀，可離開(kāi)磁力架，每孔加入30uLNFW，吹打混勻重懸磁珠，室溫孵育1分鐘。h.孔板再次放上磁力架，等待2分鐘，溶液澄清后，轉(zhuǎn)移上清到新的孔板中。實(shí)施例3.多重PCR一、***輪多重PCRa.按照QubitdsDNAHSAssayKit操作手冊(cè)檢測(cè)樣品濃度，根據(jù)Qubit檢測(cè)的樣本濃度，每個(gè)樣品取同樣的量(10ng)，每5～10個(gè)樣本混合在一起轉(zhuǎn)移到新的孔板中。b.***輪特異性引物是普通的PCR擴(kuò)增引物，共20個(gè)左右的堿基，Tm值設(shè)定在60℃，序列根據(jù)目標(biāo)區(qū)域設(shè)計(jì)得到，多個(gè)引物混成一個(gè)OP引物池做為***輪PCR的上游引物。配置PCR總體系,按照理論值的125％配，震蕩混勻，短時(shí)離心。c.孔板放入PCR儀中，選擇MAPlex-1st程序運(yùn)行2個(gè)小時(shí)。二、PCR產(chǎn)物純化，取下孔板，打開(kāi)蓋子，每孔加入60uL的磁珠，吹打混勻，室溫下孵育5分鐘。b.將孔板或八聯(lián)管放上磁力架，等待2分鐘，溶液澄清后，吸棄上清。c.每孔加入100uL80％乙醇，靜置30秒，吸棄上清。重復(fù)一遍。d.晾干3-5分鐘，觀察磁珠表面不再潮濕反光，成霧面狀，可離開(kāi)磁力架，每孔加入20uLNFW，吹打混勻重懸磁珠。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)為客戶提供生物標(biāo)記物發(fā)現(xiàn)、 靶點(diǎn)驗(yàn)證、伴隨診斷開(kāi)發(fā)與商業(yè)化、患者用藥指導(dǎo)等一體化解決方案。

    其中擴(kuò)增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取標(biāo)準(zhǔn)品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液。3、以標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液為模板，分別采用引物混合物1和引物混合物2進(jìn)行pcr擴(kuò)增，得到pcr擴(kuò)增產(chǎn)物。每條引物在反應(yīng)體系的濃度均為μm。4、同實(shí)施例2步驟一中3。5、同實(shí)施例2步驟一中4。6、同實(shí)施例2步驟一中5。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表6。結(jié)果表明，實(shí)施例1制備的試劑盒中的引物被替換后，部分基因座被抑制且引物混合物1和引物混合物2的抑制情況不同。表6注：n與其后數(shù)字表示一段堿基序列，其后數(shù)字表示序列的堿基數(shù)目；“-”表示未獲得基因型。上述結(jié)果表明，實(shí)施例1制備的試劑盒中引物具有不可替換性，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)摸索，才獲得了試劑盒中的引物組合及引物濃度。邁杰中心實(shí)驗(yàn)室設(shè)有SLAN 96P、Rotor-Gene Q、ABI 7500、ABI ViiA7、Roche z480等實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀及數(shù)字PCR儀！遼寧專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)鄭重承諾

PMS2抗體試劑 蘇蘇械備20180570號(hào).遼寧專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)鄭重承諾

    商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。3、LifeTechnologiesSOLID：ABI于2007年底推出SOLID系統(tǒng)，之后不斷升級(jí)至SOLID4。SOLID測(cè)序過(guò)程中以連接反應(yīng)取代聚合反應(yīng)。具體測(cè)序流程為：（1）文庫(kù)制備：將基因組DNA打斷，在其兩頭加上接頭，構(gòu)建成文庫(kù)；（2）乳液PCR／磁珠富集。此過(guò)程與454測(cè)序技術(shù)類似；（3）微珠沉積；（4）連接測(cè)序；（5）數(shù)據(jù)分析。454測(cè)序、Solexa、Solid均是邊合成邊測(cè)序原理，454和Solid均有乳液PCR過(guò)程。IonTorrent:2007年454技術(shù)創(chuàng)始人羅森伯格創(chuàng)辦IonTorrent。LifeTechnologies于2010年收購(gòu)了IonTorrent，同年推出個(gè)人化基因組測(cè)序儀PGM。2012年推出IonProton測(cè)序儀。Proton更側(cè)重人基因組、外顯子組、全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。PGM測(cè)序儀的設(shè)計(jì)是基于半導(dǎo)體芯片技術(shù)，在半導(dǎo)體芯片的微孔中固定DNA鏈，隨后依次摻入ACGT。隨著每個(gè)堿基的摻入，釋放出氫離子，在它們穿過(guò)每個(gè)孔底部時(shí)能被檢測(cè)到。不需要激光、照相機(jī)或標(biāo)記?，F(xiàn)有平臺(tái):Solid3,Solid4(100G),IonPGM和IonProton。 遼寧專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)鄭重承諾