其中擴增dys19、dys388、dys389i、dys389ii、dys392、dys449、dys459a/b、dys485、dys504、dys531、dys626和dys627的引物不同。表52、取標(biāo)準(zhǔn)品2800m，用超純水稀釋，獲得濃度為1ng/μl的標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液。3、以標(biāo)準(zhǔn)品2800m水溶液為模板，分別采用引物混合物1和引物混合物2進(jìn)行pcr擴增，得到pcr擴增產(chǎn)物。每條引物在反應(yīng)體系的濃度均為μm。4、同實施例2步驟一中3。5、同實施例2步驟一中4。6、同實施例2步驟一中5。檢測結(jié)果見表6。結(jié)果表明，實施例1制備的試劑盒中的引物被替換后，部分基因座被抑制且引物混合物1和引物混合物2的抑制情況不同。表6注：n與其后數(shù)字表示一段堿基序列，其后數(shù)字表示序列的堿基數(shù)目；“-”表示未獲得基因型。上述結(jié)果表明，實施例1制備的試劑盒中引物具有不可替換性，本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)過大量實驗摸索，才獲得了試劑盒中的引物組合及引物濃度。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)為生物標(biāo)志物研究和伴隨診斷開發(fā)提供科學(xué)支持，多層面助力新藥研發(fā)臨床試驗。吉林多組學(xué)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺創(chuàng)新服務(wù)
1、文庫把DNA樣本片段化或篩分成指定長度的目標(biāo)序列，再加上寡核苷酸接頭（和條形碼DN**段的大小是NGS文庫構(gòu)建的主要因素。片段化可以通過不同的方法，比如PCR擴增法。（NGS實驗流程相對復(fù)雜，在過程中會應(yīng)用到PCR擴增技術(shù)）），用于后續(xù)測序上機。2、讀長被片段化后的DNA鏈長度，二代測序通常是100-200bp（bp是雙鏈DNA堿基對單位）。3、通量一次測序上機可以運行的樣本（基因）數(shù)量。4、測序深度一個基因片段被掃描的次數(shù)，測序深度深可提高低頻突變檢出率和檢測準(zhǔn)確率。5、全基因組測序一種生物的全部基因序列的測序，人的基因組序列約3G，基因組是一個細(xì)胞或者生物體所攜帶的全部遺傳信息。作者：心平氣和鏈接：源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請注明出處。 四川個性化邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺創(chuàng)新服務(wù)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)圍繞生物標(biāo)志物研究、伴隨診斷開發(fā)，建立了完善的核酸組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)技術(shù)平臺。
h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個體識別；(h4)親權(quán)鑒定；(h5)種族推斷。本發(fā)明還保護(hù)上述任一所述引物組合或上述任一所述復(fù)合擴增體系的應(yīng)用，可為(h1)-(h5)中的至少一種：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個體識別；(h4)親權(quán)鑒定；(h5)種族推斷。上述任一所述68個基因座具體可由amelogenin、dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10和y-gata-h4組成。其中，amelogenin為性別決定基因座。dyf399s1包含三個分型片段。dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b和dys527a/b均包含兩個分型片段。本發(fā)明提供的試劑盒可以檢測68個基因座。
pcrpurificationkit為德國qiagen公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為y5-28006。。qubittmdsdnahsassaykit為thermofisher公司的產(chǎn)品，貨號為q32854。truseqdnapcr-freehtlibraryprepkit為illumina公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為fc-121-3003。kapalibraryquantificationkit為kapa公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為kk4824。miseqreagentkitv3-600cycles測序試劑為illumina公司的產(chǎn)品，貨號為ms-102-3003。miseqfgx二代測序儀為illumina公司的產(chǎn)品。實施例1、基于二代測序技術(shù)檢測68個基因座的試劑盒的制備一、68個基因座的篩選本發(fā)明的發(fā)明人通過查閱文獻(xiàn)和現(xiàn)有二代測序str分型產(chǎn)品獲得大量候選的y-str基因座，然后根據(jù)中國人群str群體遺傳多態(tài)性分析結(jié)果，**終篩選獲得68個基因座，包括67個y-str基因座和1個性別決定amelogenin基因座。 方法簡單易行，醫(yī)保覆蓋，適于臨床推廣。
1977年，WalterGilbert和FrederickSanger發(fā)明了***臺測序儀，并應(yīng)用其測定了***個基因組序列，噬菌體X174，全長5375個堿基。由此開始，人類獲得了探索生命遺傳本質(zhì)的能力，生命科學(xué)的研究進(jìn)入了基因組學(xué)的時代，到至今為止的四十年時間內(nèi)，測序技術(shù)已取得了相當(dāng)大的發(fā)展，從***代發(fā)展到了第三代測序技術(shù)。Sanger所發(fā)明的測序方法被稱為***代測序技術(shù)，該技術(shù)直到現(xiàn)在依然被***使用，但是其一次只能獲得一條長度在700～1000個堿基的序列，無法滿足現(xiàn)代科學(xué)發(fā)展對生物基因序列獲取的迫切需求。高通量測序(High-ThroughputSequencing,HTS)是對傳統(tǒng)Sanger測序的**性變革，其解決了一代測序一次只能測定一條序列的限制，一次運行即可同時得到幾十萬到幾百萬條核酸分子的序列，因此也被稱為新一代測序(NextGenerationSequencing,NGS)或第二代測序。第二代測序技術(shù)雖然測序的通量**增加，但是其獲得單條序列長度很短，想要得到準(zhǔn)確的基因序列信息依賴于較高的測序覆蓋度和準(zhǔn)確的序列拼接技術(shù)，因此**終得到的結(jié)果中會存在一定的錯誤信息。因此，科研人員又發(fā)明了第三代測序技術(shù)也稱為單分子測序技術(shù)，該技術(shù)在保證測序通量的基礎(chǔ)上，對單條長序列進(jìn)行從頭測序。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)擁有豐富的伴隨診斷開發(fā)經(jīng)驗，高質(zhì)量的管理體系和高素質(zhì)的研發(fā)團隊。遼寧多基因聯(lián)合檢測邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺口碑推薦
覆蓋多個主流IHC自動染色平臺，適用范圍廣。吉林多組學(xué)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺創(chuàng)新服務(wù)
P7的序列：5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGAG3’。PCR總體系為：2倍PCRMix15uL，10umol/LP71uL，1umol/LOP1uL或OP2uL，DNA5uL，NFW5uL。上述技術(shù)方案中，作為推薦，所述步驟4中的PCR總體系10uL具體為：VAHTSSYBRqPCRMasterMix5uL，qPCRPrimerMix1uL，DNA2uL，ROXReferenceDye2，NFW5uL。上述技術(shù)方案中，作為推薦，所述的***輪PCR擴增循環(huán)數(shù)目為10-14。上述技術(shù)方案中，作為推薦，所述的第二輪PCR擴增循環(huán)數(shù)目為10-14。本發(fā)明的優(yōu)點和有益效果在于：提供一種基于多重PCR的二代測序建庫技術(shù)。在二代測序過程中采用該技術(shù)則不需要再購買商業(yè)的建庫試劑盒，所有反應(yīng)試劑都可以單獨購買組合，極大的降低了實驗成本。另外由于在PCR過程中固定了一端的通用引物，極大的降低了多重PCR反應(yīng)體系中的引物種類和數(shù)量，可以有效的抑制非特異性擴增和引物之間的相互干擾，也降低了不同引物間的擴增效率的差異。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖**是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動性的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。吉林多組學(xué)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺創(chuàng)新服務(wù)
公司擁有國際前列的產(chǎn)品開發(fā)團隊及完善的產(chǎn)品研發(fā)流程，與全球藥企展開伴隨診斷產(chǎn)品的開發(fā)合作，目前，公司已有多個診斷產(chǎn)品上市，另有數(shù)個伴隨診斷產(chǎn)品已進(jìn)入臨床試驗或申報階段。
邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)注重質(zhì)量體系的建立，擁有StarLIMS實驗室信息化管理系統(tǒng)，中心實驗室獲得了中國CNAS ISO 17025 國際實驗室認(rèn)可、美國CAP認(rèn)證。在產(chǎn)品研發(fā)及商業(yè)化上，公司擁有GSP證書、獲得了歐盟ISO 13485質(zhì)量認(rèn)證并通過了國家醫(yī)療器械GMP稽查。公司同時與國內(nèi)外藥企、診斷公司及檢測平臺公司等發(fā)起成立了中國醫(yī)療與伴隨診斷專業(yè)委員會（中國生物工程學(xué)會下屬），旨在推動中國醫(yī)療及伴隨診斷事業(yè)健康發(fā)展。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)已然成為中國醫(yī)療中診斷整體解決方案的開拓者。