山西dMMR抗體檢測試劑創(chuàng)新服務(wù)

    在臨床中，對(duì)于Ⅱ期結(jié)腸ai病人，考慮使用5-Fu單藥化療時(shí)，主要考慮因素是什么？可能有的醫(yī)生會(huì)說，「Soeasy！檢測下MMR啊，看看是dMMR還是pMMR」。來吧，我們看1個(gè)病例患者女，51歲，診斷為T3N0M0（伴有普危因素），免疫組化結(jié)果：HER2(1+)，GPC3(-)，MSH2(+)，MSH6(+)，PMS2(+)，MLH1(+)，CK19(-)，CK20(+)，Ki67(60%+)。這名患者該不該用單藥5-Fu進(jìn)行輔助化療？一拿到免疫組化結(jié)果，很多醫(yī)生的表情是這樣的：大家都知道，MSI-H/dMMR患者不能從單藥5-Fu的***中獲益。但問題是，面對(duì)由英文字母、數(shù)字、括號(hào)和加減號(hào)組成的免疫組化結(jié)果，如何確定是dMMR還是pMMR？到底怎樣算H-MSI，怎樣算L-MSI，怎樣又算MS-S？下面我們就來解決這個(gè)問題。MMR基因是DNA錯(cuò)配修復(fù)基因，它的表達(dá)缺失可引起DNA復(fù)制過程中錯(cuò)配的累積，導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）的發(fā)生，約15%的結(jié)直腸ai是經(jīng)由MSI途徑引發(fā)的。dMMR是MMR表達(dá)缺失，pMMR是MMR表達(dá)正常。dMMR表現(xiàn)為高頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-H），pMMR表現(xiàn)為低頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-L）或微衛(wèi)星穩(wěn)定（MS-S）。目前，**常用的篩查結(jié)直腸aiMMR表達(dá)有無缺失的方法有2種：免疫組化檢測MMR相關(guān)蛋白的表達(dá)，以及PCR檢測多個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)以判斷有否存在MSI。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)旨在發(fā)現(xiàn)或驗(yàn)證有臨床轉(zhuǎn)化價(jià)值的新靶點(diǎn)，揭示疾病發(fā)病，藥物作用，耐藥等新的生物學(xué)機(jī)制。山西dMMR抗體檢測試劑創(chuàng)新服務(wù)

    主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等，可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。2、按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與直接法相比，間接法的靈敏度提高了許多。3、按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合，如過氧化物酶-抗過氧化物酶(***)法和親和連接，如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等，其中SP法是*常用的方法。三、幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理1、免疫熒光方法是*早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先將已知抗體標(biāo)上熒光素，以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。2、免疫酶標(biāo)方法免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后，于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?；驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡。山西dMMR抗體檢測試劑創(chuàng)新服務(wù)邁杰擁有StarLIMS實(shí)驗(yàn)室信息化管理系統(tǒng)，中心實(shí)驗(yàn)室獲得了中國CNAS ISO 17025實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可、美國CAP認(rèn)證。

    免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白(keratin)顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2、敏感性高在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的。

    對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前*常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法、ABC法、SP法等。3、免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。四、免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)1、特異性強(qiáng)免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此。邁杰基于基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)及病理組學(xué)等綜合性轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺(tái)，豐富的伴隨診斷開發(fā)經(jīng)驗(yàn)。

    篩選出分泌特定單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株abm58060-20a2-pu。將此細(xì)胞株轉(zhuǎn)入t-75培養(yǎng)瓶中擴(kuò)增至對(duì)數(shù)生長期保種或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例3腹水誘生法制備單克隆抗體一、腹水制備對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基洗滌并懸起，計(jì)數(shù)～5×105，1ml。懸浮的細(xì)胞腹腔注射事先用石蠟油致敏的小鼠。7天后開始收集腹水。取出的腹水于4℃離心4000rpm，10min。小心吸出中間的腹水收集于離心管中，4℃或-20℃保存。二、單克隆抗體的純化用hitraprproteinaff(ge公司)親和層析法按說明書從腹水中純化抗體。sds-page膠鑒定純度，bradford法測定濃度。純化的抗體保存于-20℃。實(shí)施例4單克隆抗體特性鑒定一、亞型鑒定用100mmpbs()稀釋包被羊抗鼠igg(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，過夜。傾空液體，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封閉液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。傾空液體用pbs-t清洗3次。用封閉液1：1000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(κ,λ)抗體或1：2000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗體，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次?！具~杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)】開發(fā)的dMMR抗體檢測試劑,檢測費(fèi)用低,技術(shù)成熟,臨床易開展。寧夏專注dMMR抗體檢測試劑口碑推薦

邁杰與大學(xué)，研究院所，醫(yī)院的科研人員進(jìn)行科研轉(zhuǎn)化研究合作,包括基礎(chǔ)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究等。山西dMMR抗體檢測試劑創(chuàng)新服務(wù)

    還應(yīng)重視對(duì)有血緣關(guān)系親屬的結(jié)直腸ai篩查。詳盡的篩查建議見《中國結(jié)直腸liu篩查、早診早治和綜合預(yù)防共識(shí)意見》。4.炎癥性腸病相關(guān)結(jié)直腸ai的篩查：炎癥性腸病是結(jié)直腸ai發(fā)生的高危因素。其中潰瘍性結(jié)腸炎ai變的主要危險(xiǎn)因素包括全結(jié)腸病變及病程>10年，對(duì)此類患者應(yīng)更重視結(jié)腸鏡檢查。根據(jù)潰瘍性結(jié)腸炎ai變的不同危險(xiǎn)度分級(jí)，決定全結(jié)腸鏡篩查的時(shí)間間隔。潰瘍性結(jié)腸炎患者全結(jié)腸鏡篩查的主要目的是早期發(fā)現(xiàn)黏膜上皮內(nèi)瘤變及相關(guān)病灶，因此需要進(jìn)行多段多點(diǎn)活組織病理學(xué)檢查以提高檢出率?？肆_恩病的ai變率接近潰瘍性結(jié)腸炎，長期活動(dòng)***程是ai變發(fā)生的高危因素，累及結(jié)直腸的克羅恩病患者篩查方案與潰瘍性結(jié)腸炎相似。四、結(jié)直腸ai的化學(xué)預(yù)防結(jié)直腸ai的一級(jí)預(yù)防包括結(jié)直腸ai的化學(xué)預(yù)防和對(duì)結(jié)直腸腺瘤的處理。通過改善飲食等生活習(xí)慣，應(yīng)用藥物預(yù)防腺瘤的發(fā)生或切除后再發(fā)或ai變，以及預(yù)防炎癥性腸病ai變，均屬于廣義的化學(xué)預(yù)防。對(duì)結(jié)直腸腺瘤的處理包括：一級(jí)預(yù)防即降低結(jié)直腸腺瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。具體的措施包括：(1)改善飲食結(jié)構(gòu)，增加膳食纖維的攝取。(2)適當(dāng)補(bǔ)充鈣劑和維生素D。(3)對(duì)葉酸水平較低者，可適當(dāng)補(bǔ)充葉酸。(4)戒煙。對(duì)于罹患結(jié)直腸ai高危人群年齡>。山西dMMR抗體檢測試劑創(chuàng)新服務(wù)