湖南標(biāo)準(zhǔn)dMMR抗體檢測試劑共同合作

    發(fā)明人還提供上述任一所述的抗msh6蛋白單克隆抗體，在msh6蛋白免疫檢測中的用途。進(jìn)一步地，所述免疫檢測包括免疫組織化學(xué)法，免疫印跡法和酶聯(lián)免疫法。區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)，上述技術(shù)方案依據(jù)msh6蛋白、抗原性、組成氨基酸的親疏水性以及二級(jí)結(jié)構(gòu)，選擇msh6蛋白第1-100位氨基酸序列與gst蛋白融合表達(dá),其dna編碼序列為seqid**,用大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)，得到免疫原。對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，經(jīng)細(xì)胞融合、篩選和亞克隆，獲得高效分泌抗msh6蛋白單克隆抗體的單克隆細(xì)胞系abm58060-20a2-pu,以及由該細(xì)胞系所分泌的抗msh6蛋白單克隆抗體。本方案得到的抗體具有高特異性、敏感性，可以特異性識(shí)別表達(dá)msh6蛋白的細(xì)胞，適用于免疫學(xué)檢測，特別是免疫組化檢測?；旧Y(jié)果圖(左為abm58060-20a2-pu分泌的msh6，右為市售msh6)。具體實(shí)施方式實(shí)施例1重組msh6蛋白片段的制備一、抗原片段選擇依據(jù)uniprot中登錄號(hào)為p52701的蛋白質(zhì)序列進(jìn)行序列和二級(jí)結(jié)構(gòu)分析，全長為1360個(gè)氨基酸長度的msh6蛋白含有muts超家族區(qū)域，其分子量約為152kda左右，依據(jù)通過在線服務(wù)器測的蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)(secondarystructure)和表面可及性(surfaceaccessibility)參數(shù)，并通過對(duì)其抗原性指數(shù)(jamesonba,:(1):181-6.)的分析結(jié)果。MSH2抗體試劑 蘇蘇械備20180568號(hào).湖南標(biāo)準(zhǔn)dMMR抗體檢測試劑共同合作

    在臨床中，對(duì)于Ⅱ期結(jié)腸ai病人，考慮使用5-Fu單藥化療時(shí)，主要考慮因素是什么？可能有的醫(yī)生會(huì)說，「Soeasy！檢測下MMR啊，看看是dMMR還是pMMR」。來吧，我們看1個(gè)病例患者女，51歲，診斷為T3N0M0（伴有普危因素），免疫組化結(jié)果：HER2(1+)，GPC3(-)，MSH2(+)，MSH6(+)，PMS2(+)，MLH1(+)，CK19(-)，CK20(+)，Ki67(60%+)。這名患者該不該用單藥5-Fu進(jìn)行輔助化療？一拿到免疫組化結(jié)果，很多醫(yī)生的表情是這樣的：大家都知道，MSI-H/dMMR患者不能從單藥5-Fu的***中獲益。但問題是，面對(duì)由英文字母、數(shù)字、括號(hào)和加減號(hào)組成的免疫組化結(jié)果，如何確定是dMMR還是pMMR？到底怎樣算H-MSI，怎樣算L-MSI，怎樣又算MS-S？下面我們就來解決這個(gè)問題。MMR基因是DNA錯(cuò)配修復(fù)基因，它的表達(dá)缺失可引起DNA復(fù)制過程中錯(cuò)配的累積，導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）的發(fā)生，約15%的結(jié)直腸ai是經(jīng)由MSI途徑引發(fā)的。云南dMMR抗體檢測試劑創(chuàng)新服務(wù)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)具體包括全套的Leica組織樣本制備系統(tǒng)，Ventana、Leica、DAKO等全自動(dòng)免疫組化儀。

    除非整個(gè)家族的結(jié)直腸ai發(fā)病率明顯上升，否則很難發(fā)現(xiàn)單個(gè)個(gè)體攜帶者。因此，從MSI-H結(jié)直腸ai中篩選出可疑的Lynch綜合征患者，不*有利于患者本人的liu***和預(yù)防篩查策略的制定，而且有利于發(fā)現(xiàn)Lynch綜合征家系，為患者家族成員的liu預(yù)防提供重要信息。與以往以家系調(diào)查和臨床信息為主導(dǎo)的篩查方法比，采用分子檢測等輔助手段對(duì)本病進(jìn)行篩查不*準(zhǔn)確且更高效和可行。研究表明，如果嚴(yán)格按照修訂的Bethesda指南進(jìn)行MSI檢測，將遺漏％的MSI結(jié)直腸ai和％的Lynch綜合征。因此，E***P工作組(EvaluationofGenomicApplicationsinPracticeandPreventionWorkingGroup)推薦對(duì)所有(或<70歲)的新診斷所有(或<70歲)的新診斷結(jié)直腸ai結(jié)直腸ai進(jìn)行MSI檢測(圖4)。五、小結(jié)與展望MSI結(jié)直腸ai占結(jié)直腸ai的15％，因其具有獨(dú)特的發(fā)生機(jī)制、預(yù)后、***方案以及與Lynch綜合征的密切關(guān)系而日益得到重視。目前，國際上很多大型醫(yī)院和liu***中心均已開始采取對(duì)所有新診斷的結(jié)直腸ai進(jìn)行MSI和／或免疫組織化學(xué)檢測的策略，有的機(jī)構(gòu)甚至開始對(duì)所有新診斷的子宮內(nèi)膜ai也進(jìn)行***檢測。我國結(jié)直腸發(fā)病率持續(xù)上升，但對(duì)MSIliu和Lynch綜合征進(jìn)行篩查的觀念尚待普及。分子機(jī)制的研究進(jìn)展和檢測手段的進(jìn)步。

    選擇靠近n末端的氨基酸區(qū)域1-100位氨基酸序列與gst蛋白融合表達(dá)為抗原片段，抗原片段的dna編碼序列為seqid**。二.重組msh6蛋白片段的表達(dá)和純化將seqid**的dna序列直接合成并克隆進(jìn)克隆載體質(zhì)粒puc57(南京金斯瑞生物科技有限公司)。該dn**段5’端和3’端分別帶有ecori和xhoi酶切位點(diǎn)，取5μl(約1微克)帶有msh6片段的質(zhì)粒puc57-msh6和用作載體的pet30a-gst(merck)5μl(約1微克)分別進(jìn)行雙酶切，酶切體系為：ecori(takara)1μl，xhoi(takara)1μl，5μl10×bufferh，38μlddh2o，37℃酶切三小時(shí)。酶切產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖電泳，柱離心式dna回收試劑盒(北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司)切膠回收基因和載體片段。取2μl回收的線性化載體，3μl酶切回收的msh6基因片段，5μl2×ez-ligt4dna快連試劑(北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司)，混勻，室溫連接三十分鐘。取出-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞(bl21)，解凍后加入連接產(chǎn)物，冰上放置30min。42℃熱激90秒后冰浴2min后，加入800μl無抗性的lb培養(yǎng)基。37℃復(fù)蘇培養(yǎng)20min，涂板。從轉(zhuǎn)化的平板挑單克隆到，37℃，200rpm培養(yǎng)，dna測序(北京華大基因)。將測序正確的克隆菌液2ul活化的菌液到5mllb液體培養(yǎng)基中，37℃，200rpm，培養(yǎng)。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)有多年的藥企服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，緊跟藥物研發(fā)趨勢，熟悉新藥研發(fā)動(dòng)向。

    RAF***對(duì)多種**的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生重要影響，RAF突變以BRAF常見，BRAF是RAS-RAF-MAPK信號(hào)通路的重要基因，BRAF突變常見于V600E位點(diǎn)，其在結(jié)腸ai的突變率為。BRAF突變的ai癥患者中右半結(jié)腸ai占95%，在BRAF野生型的ai癥患者中右半結(jié)腸ai患者占48%。研究發(fā)現(xiàn)在右半結(jié)腸aiBRAF突變率為，左半結(jié)腸ai、直腸ai的突變率分別為、。BRAF突變與右半結(jié)腸ai相關(guān)，并且BRAF基因突變和位置有***的線性相關(guān)關(guān)系，隨著**位置由升結(jié)腸移至直腸，BRAF的突變率由40%降至不到。2.預(yù)測EGFR***作用NicolantonioF等人對(duì)113例Cetuximab耐藥的轉(zhuǎn)移性結(jié)腸ai患者進(jìn)行了檢測，發(fā)現(xiàn)對(duì)這兩種藥物耐受的患者，有30%~40%存在KRAS突變，而野生型的KRAS患者中有14%發(fā)生BRAFV600E突變。BRAF突變者對(duì)這兩種藥存在耐藥，且生存率較其它患者明顯降低。但一項(xiàng)關(guān)于CRYSTAL和OPUS試驗(yàn)的meta分析發(fā)現(xiàn)BRAF突變似乎不影響西妥昔單抗的療效，**是一個(gè)重要的預(yù)后指標(biāo)。3.預(yù)測預(yù)后無論是早期還是晚期轉(zhuǎn)移CRC，BRAF突變狀態(tài)都是較強(qiáng)的生存預(yù)測因素，與KRAS基因突變相比，BRAF基因突變常見于尚未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)腸ai，以Ⅱ、Ⅲ期CRC患者多見，BRAF突變型CRC的惡性程度高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和局部晚期發(fā)生率高。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)具備從樣本制備到H&E，IHC、FISH、RNAscope及多重免疫組化等全套組織病理和分子病理檢測能力。重慶提供dMMR抗體檢測試劑誠信合作

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)具有多年伴隨診斷服務(wù)經(jīng)驗(yàn),獲得CNAS國際實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,美國CAP認(rèn)證。湖南標(biāo)準(zhǔn)dMMR抗體檢測試劑共同合作

    MSI-H結(jié)直腸ai的比例(22％)高于Ⅲ期結(jié)直腸ai(12％)，而在Ⅳ期liu中*占％，提示MSI-H結(jié)直腸ai發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)較低。特別是在Ⅱ期結(jié)直腸ai患者中，MSI狀態(tài)是提示預(yù)后的**預(yù)測因子，MSI-Hliu預(yù)后好于MSSliu。Ⅱ期結(jié)直腸ai復(fù)發(fā)的高危因素包括：liu組織學(xué)類型為低分化ai、有脈管／神經(jīng)侵犯、淋巴結(jié)檢出數(shù)量不足12個(gè)、發(fā)生梗阻或穿孔以及切緣陽性，但如liu為MSI-H型，則低分化不屬高危因素。2．指導(dǎo)***：研究發(fā)現(xiàn)，MSI-H結(jié)直腸ai對(duì)5-氟尿嘧啶和順鉑等化療藥物不敏感，而對(duì)伊立替康等化療藥物敏感，同時(shí)MSI結(jié)直腸ai對(duì)放療比較敏感。美國國立綜合ai癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)的結(jié)直腸ai臨床實(shí)踐指南明確指出，對(duì)MSI-H結(jié)直腸ai不宜采用5-氟尿嘧啶和鉑類為主的***方案。3．Lynch綜合征患者篩查：Lynch綜合征患者較常見同時(shí)性或異時(shí)性多發(fā)結(jié)直腸ai，如果術(shù)前能明確Lynch綜合征的診斷，外科醫(yī)師有可能采取更為***的切除術(shù)式。Lynch綜合征患者不*發(fā)生結(jié)直腸ai的風(fēng)險(xiǎn)增高，而且可以發(fā)生子宮內(nèi)膜ai、卵巢ai、尿路上皮ai等多種腸外惡性liu，有研究表明，阿司匹林能夠預(yù)防Lynch綜合征相關(guān)結(jié)直腸ai及腸外liu的發(fā)生。由于Lynch綜合征與大家熟知的家族性腺瘤**肉病(FAP)不同。湖南標(biāo)準(zhǔn)dMMR抗體檢測試劑共同合作