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根據(jù)烈冰多年單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)經(jīng)驗(yàn),為什么不建議您一味的追求高細(xì)胞數(shù)量的捕獲:?jiǎn)渭?xì)胞測(cè)序所有的分析都是基于細(xì)胞聚類(lèi)進(jìn)行,而細(xì)胞聚類(lèi)是在區(qū)分cell和non-cell后,獲得細(xì)胞基因表達(dá)譜,通過(guò)降維(pca),無(wú)監(jiān)督聚類(lèi)以及可視化(t-SNE)得到的。進(jìn)行細(xì)胞聚類(lèi)時(shí)需要考慮到每個(gè)細(xì)胞的基因表達(dá)模式,因此即使是相同的數(shù)據(jù),在剔除幾個(gè)細(xì)胞的情況下,前后獲得的聚類(lèi)圖也會(huì)出現(xiàn)明顯不同。而當(dāng)細(xì)胞捕獲數(shù)過(guò)多時(shí),無(wú)論是假陰性和假陽(yáng)性數(shù)據(jù)還是多細(xì)胞數(shù)據(jù),都會(huì)對(duì)正常細(xì)胞聚類(lèi)產(chǎn)生影響,造成聚類(lèi)結(jié)果失真。這也是很多文章,特別是很多高分文章,為什么單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個(gè)樣本捕獲細(xì)胞數(shù)在3000-5000個(gè)時(shí),數(shù)據(jù)量在100G左右時(shí),可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求?;凇办o態(tài)蜂巢”技術(shù),實(shí)現(xiàn)落孔細(xì)胞的物力分割和磁珠的一對(duì)一匹配。廣東BD VDJ單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)
您的珍貴樣本,可以放心依賴烈冰生物BDRhapsody單細(xì)胞捕獲系統(tǒng),首先,該系統(tǒng)的技術(shù)原理是基于cyto-seq的微孔技術(shù),因此不會(huì)因?yàn)闃颖炯?xì)胞體積太大或懸液背景太雜等問(wèn)題導(dǎo)致捕獲通道的堵塞進(jìn)而導(dǎo)致樣本的損失;其次,BDRhapsodyTM單細(xì)胞捕獲系統(tǒng)無(wú)電子元件,便于攜帶,當(dāng)您的樣本需及時(shí)實(shí)驗(yàn)時(shí),我們可以“拎包上門(mén)”,快速的完成細(xì)胞捕獲部分,不至于珍貴樣本因細(xì)胞活性快速下降帶來(lái)的損失;在這,BDRhapsody單細(xì)胞捕獲系統(tǒng)對(duì)細(xì)胞數(shù)量包容性較好,細(xì)胞懸液上樣量高達(dá)575ul,針對(duì)樣本中細(xì)胞數(shù)量較少的組織類(lèi)型,也能完成整個(gè)項(xiàng)目的細(xì)胞捕獲工作。廈門(mén)single cell 單細(xì)胞平臺(tái)截至2022年6月,烈冰助力發(fā)表單細(xì)胞測(cè)序文章30+篇。
從單細(xì)胞測(cè)序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細(xì)胞類(lèi)型的功能解析,越來(lái)越需要一種多組學(xué)的細(xì)胞生物學(xué)視角。通過(guò)單細(xì)胞多組學(xué)——即對(duì)不同組學(xué)的數(shù)據(jù)集進(jìn)行分析和整合——科學(xué)家能夠從同一個(gè)單細(xì)胞來(lái)源中檢測(cè)多種細(xì)胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)、細(xì)胞表面蛋白表達(dá)、免疫組庫(kù)序列(包括T細(xì)胞和B細(xì)胞受體)以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開(kāi)放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個(gè)實(shí)驗(yàn)可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),研究人員的獲益更多,包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯(cuò)誤,并節(jié)省更多的高科技資源(從資助基金到人員時(shí)間)。
針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié):主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測(cè)序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn):由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中,并且測(cè)序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞,導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此,我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)過(guò)濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10×Genomics為例,細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過(guò)分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn),當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候,結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過(guò)濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候,選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn);否則,選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù)。單細(xì)胞測(cè)序因其強(qiáng)大的探究疾病--細(xì)胞--基因的關(guān)系,一度成為高通量測(cè)序技術(shù)的“天花板”。
您的珍貴樣本,還可以放心依賴烈冰生物BDRhapsody單細(xì)胞捕獲系統(tǒng),BDRhapsodyTM單細(xì)胞捕獲系統(tǒng)采用微孔技術(shù),對(duì)細(xì)胞的捕獲沒(méi)有偏好性,實(shí)現(xiàn)高達(dá)80%的微孔板捕獲率,由于單個(gè)微孔板中容納了22萬(wàn)+個(gè)微孔,而現(xiàn)階段單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)技術(shù)通常要求單個(gè)樣本捕獲3000-5000,至高達(dá)10000個(gè)細(xì)胞,即可滿足科研探索需求,因此這種“泊松分布”的原理類(lèi)似于上樣細(xì)胞的無(wú)限稀釋過(guò)程,但22萬(wàn)+微孔的存在,也對(duì)大體量細(xì)胞數(shù)目的科學(xué)研究有很好的包容性,細(xì)胞通量分為可擴(kuò)展至100-40000個(gè)細(xì)胞的捕獲(單個(gè)微孔板),滿足您的多重需求。單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái),烈冰提供高性價(jià)比服務(wù)方案。BD VDJ單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)
BD Scanner,是您實(shí)驗(yàn)過(guò)程的又一雙眼睛,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),精細(xì)質(zhì)控。廣東BD VDJ單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)
關(guān)于單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)樣本制備,這與流式細(xì)胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致,也就是通過(guò)酶促或機(jī)械消化、細(xì)胞分選或其他細(xì)胞分離技術(shù)從整個(gè)樣本中制備生成活的單細(xì)胞懸液。隨后是細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量控制步驟,以確保您的樣本有適當(dāng)濃度的活細(xì)胞,并且不含細(xì)胞團(tuán)塊和死細(xì)胞碎片。如有必要,您還可以使用抗體對(duì)樣本進(jìn)行染色,標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通過(guò)FACS來(lái)富集感興趣的細(xì)胞類(lèi)型。解離樣本時(shí)采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)而定。也許需要額外的制備步驟,具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細(xì)胞大小,以及是否需要提取出細(xì)胞核進(jìn)行染色質(zhì)可接近性分析。無(wú)論具體的考慮因素如何,所有樣本類(lèi)型都遵循同一個(gè)基本原則,那就是生成高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液。廣東BD VDJ單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司是一家有著雄厚實(shí)力背景、信譽(yù)可靠、勵(lì)精圖治、展望未來(lái)、有夢(mèng)想有目標(biāo),有組織有體系的公司,堅(jiān)持于帶領(lǐng)員工在未來(lái)的道路上大放光明,攜手共畫(huà)藍(lán)圖,在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康行業(yè)中積累了大批忠誠(chéng)的客戶粉絲源,也收獲了良好的用戶口碑,為公司的發(fā)展奠定的良好的行業(yè)基礎(chǔ),也希望未來(lái)公司能成為*****,努力為行業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展奉獻(xiàn)出自己的一份力量,我們相信精益求精的工作態(tài)度和不斷的完善創(chuàng)新理念以及自強(qiáng)不息,斗志昂揚(yáng)的的企業(yè)精神將**上海烈冰生物醫(yī)藥科技供應(yīng)和您一起攜手步入輝煌,共創(chuàng)佳績(jī),一直以來(lái),公司貫徹執(zhí)行科學(xué)管理、創(chuàng)新發(fā)展、誠(chéng)實(shí)守信的方針,員工精誠(chéng)努力,協(xié)同奮取,以品質(zhì)、服務(wù)來(lái)贏得市場(chǎng),我們一直在路上!