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對于單細胞測序而言,常常需要先構(gòu)建細胞圖譜,在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項分析,并且數(shù)據(jù)分析時以細胞聚類(cellcluster)為討論對象,而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象,因此單細胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴格,但是單細胞測序,特別是目的為圖譜研究時,需要通過提高樣本復(fù)雜度(增加樣本數(shù)),盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細胞圖譜信息。因此,單細胞測序?qū)嶒炘O(shè)計時首先需要保證生物學重復(fù),不同樣本來源的樣本建議單獨進行細胞解離和捕獲、建庫、測序,以保證捕獲到足夠的細胞數(shù),單個樣本分別捕獲細胞時,后續(xù)分析除了整體分析以外,還可以做單樣本分析,保證分析的完備準確性?;凇办o態(tài)蜂巢”技術(shù),實現(xiàn)落孔細胞的物力分割和磁珠的一對一匹配。陜西BD單細胞平臺
多樣本數(shù)據(jù)合并:FractionofReadsKept:合并樣本時,各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計算出來的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大,需要進行Downsample處理,以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準將不同樣本中細胞測序深度標化到同一水平,從而避免因測序深度差異導(dǎo)致的基因檢測數(shù)量、基因表達水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數(shù)據(jù),深度解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果,深入挖掘其背后的生物學意義;從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細胞研究,加速科研進程!廣州BD Rhapsody單細胞平臺BD Scanner,是您實驗過程的又一雙眼睛,實時監(jiān)測,精細質(zhì)控。
據(jù)不完全統(tǒng)計,截至2022年6月,烈冰生物助力發(fā)表單細胞文章近40篇,從平臺應(yīng)用比例來看,應(yīng)用10XGenomics和BDRhapsody兩大平臺發(fā)文比例各占50%左右,研究類型涵蓋疾病發(fā)展,靶點探索,免疫研究,神經(jīng)發(fā)育,干細胞分化,植物發(fā)育,退行病變,糖尿病,COVID-19等等研究;從發(fā)表期刊水平來看,烈冰生物聯(lián)合發(fā)表的單細胞文章,CNS一區(qū)期刊占比在30%以上,其中包括immunity三篇,Nature子刊3篇(Naturecellbiology,NaturePlants,Naturecommunication),風濕類領(lǐng)域ARD期刊1篇,CUT1篇,AdvancedScience多篇,IF大于10分以上文章占比高達68.5%,烈冰專屬單細胞測序服務(wù)團隊,將與您攜手譜寫下一篇“高分”新文章。
對于稀有樣本,或細胞量比較少的稀有組織,樣本中每一粒細胞都很珍貴,BDRhapsody單細胞捕獲平臺對該種類型的樣本能實現(xiàn)友好包容,如果在實際實驗中,我們發(fā)現(xiàn)因為樣本類型和制備單細胞懸液方法的不同,容易出現(xiàn)單細胞懸液中死亡細胞的比例較高的情況。也會和您探討是否考慮去除單細胞懸液中的死細胞和其他污染物的操作,以獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)是至關(guān)重要的。這是因為,死亡的細胞易裂解導(dǎo)致其中的RNA釋放出來。這種cell-freeRNA會導(dǎo)致檢測的背景噪聲,并會影響單細胞數(shù)據(jù)的質(zhì)量。因此當樣本活性較差時,對細胞懸液中細胞活性檢測后,需要進行一般死細胞去除的工作(一般懸液活性小于70%時考慮此操作),以保證較高的上機捕獲細胞的質(zhì)量。單細胞測序平臺,烈冰提供高性價比服務(wù)方案。
烈冰生物BD Rhapsody平臺,采用精簡的工作流程助力您的實驗成功: 1.制備單細胞懸液:可使用碧迪醫(yī)療單細胞多樣本分析試劑盒和 /或BD Ab-seq寡核苷酸偶聯(lián)抗體( Ab-Oligos)將細胞染色 2.微孔板預(yù)充和處理:使用自動移液器進行液體交換 3.單細胞捕獲工作流程: (1)細胞上樣:上樣 575微升細胞懸液;系統(tǒng)未采用微流體通道設(shè)計,無需擔心通道堵寨;通過重力輕輕沉淀細胞,可捕獲脆弱細胞,BD Rhapsody微孔板包含大于220,000個分區(qū),可在低雙細胞率下捕獲多達40000個細胞 (2)細胞上樣掃描:估算捕獲的活細胞數(shù)量和細胞多態(tài)率 (3)磁珠上樣:微孔的正六邊形幾何形狀和尺寸可防止磁珠多重分配在微孔中 (4)磁珠上樣和磁珠洗滌掃描:估算包含活細胞和磁珠的微孔數(shù)量;測定細胞存留率,評估是否發(fā)生細胞損失 (5)細胞裂解:使用裂解緩沖液,確保細胞完全裂解 (6)磁珠回收:輕松、高效地磁性回收磁珠并采用Scanner掃描磁珠回收情況助力探索生命時空多維度的動態(tài)變化的生物學信息;助力醫(yī)療健康時代!杭州BD單細胞多組學測序
烈冰實驗室包含從樣本處理到測序下機的全套實驗平臺。陜西BD單細胞平臺
從單細胞測序描述性分析轉(zhuǎn)向復(fù)雜樣本中不同細胞類型的功能解析,越來越需要一種多組學的細胞生物學視角。通過單細胞多組學——即對不同組學的數(shù)據(jù)集進行分析和整合——科學家能夠從同一個單細胞來源中檢測多種細胞特征。這些特征包括全轉(zhuǎn)錄組基因表達、細胞表面蛋白表達、免疫組庫序列(包括T細胞和B細胞受體)以及用于了解表觀基因組調(diào)控的開放染色質(zhì)區(qū)域。隨著單個實驗可提供更多信息豐富的數(shù)據(jù),研究人員的獲益更多,包括保留珍貴樣本、提高生產(chǎn)力、減少因批次效應(yīng)引起的錯誤,并節(jié)省更多的高科技資源(從資助基金到人員時間)。陜西BD單細胞平臺
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