北京scRNA單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)公司

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-08-31

多樣本數(shù)據(jù)合并:FractionofReadsKept:合并樣本時(shí),各樣本根據(jù)MappedBarcodedReadsperCell數(shù)量計(jì)算出來(lái)的數(shù)據(jù)利用率。如果各樣本間該參數(shù)值相差很大,需要進(jìn)行Downsample處理,以數(shù)據(jù)量少的樣本為基準(zhǔn)將不同樣本中細(xì)胞測(cè)序深度標(biāo)化到同一水平,從而避免因測(cè)序深度差異導(dǎo)致的基因檢測(cè)數(shù)量、基因表達(dá)水平的差異。烈冰科技自主研發(fā)的單細(xì)胞云平臺(tái)致力于幫助每一位客戶(hù)定制化分析數(shù)據(jù),深度解讀數(shù)據(jù)分析結(jié)果,深入挖掘其背后的生物學(xué)意義;從操作便捷、結(jié)果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細(xì)胞研究,加速科研進(jìn)程!對(duì)于消化背景雜,樣本初始數(shù)量少,關(guān)注粒細(xì)胞的項(xiàng)目,推薦您使用烈冰BD 單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)。北京scRNA單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)公司

針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析時(shí)的reads數(shù)、基因表達(dá)量及細(xì)胞數(shù)量判定過(guò)程中:以捕獲5000個(gè)細(xì)胞、100G的測(cè)序量為標(biāo)準(zhǔn),每個(gè)細(xì)胞的reads數(shù)大約在50k左右;每個(gè)細(xì)胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細(xì)胞類(lèi)型,例如成熟的B,T,粒細(xì)胞數(shù)量較多的組織中,由于該類(lèi)型細(xì)胞表達(dá)的基因數(shù)普遍較少,導(dǎo)致基因中位數(shù)下降。而某些疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細(xì)胞等,他們的基因表達(dá)數(shù)較高,甚至可以超過(guò)1W,這就導(dǎo)致該類(lèi)樣本基因中位數(shù)非常高。因此,我們對(duì)細(xì)胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認(rèn)時(shí),需要考察實(shí)際組織的細(xì)胞組成。成都scRNA單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序可識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤。

SingleCellSequencing技術(shù),即利用優(yōu)化后的高通量測(cè)序技術(shù)(NGS,NextGenerationSequencing)分析每一個(gè)單個(gè)細(xì)胞的序列信息,從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問(wèn)題來(lái)了,如何獲得單個(gè)細(xì)胞?如果無(wú)法獲得單個(gè)細(xì)胞這一切都是不成立的;如何獲得大批量的單個(gè)細(xì)胞?單個(gè)組織細(xì)胞群體通常在百萬(wàn)級(jí)別以上,如果被檢測(cè)的測(cè)序細(xì)胞數(shù)量過(guò)小精確度不足;如何低成本地獲得大批量單個(gè)細(xì)胞?單細(xì)胞測(cè)序成本非常高,尤其是需要測(cè)2000~3000個(gè)以上的細(xì)胞的時(shí)候,如果單個(gè)細(xì)胞的分選成本也很高,技術(shù)根本無(wú)法普及。所以,正因?yàn)檫@些問(wèn)題的存在使得高通量測(cè)序在單個(gè)細(xì)胞測(cè)序應(yīng)用中的普及度一直不足,直到幾個(gè)單細(xì)胞測(cè)序突破性技術(shù)的誕生。

細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力評(píng)估在評(píng)估樣本質(zhì)量時(shí),需要在細(xì)胞清洗和過(guò)濾之后測(cè)定細(xì)胞活力,這一點(diǎn)至關(guān)重要。測(cè)定細(xì)胞活力有許多種方法,烈冰多年單細(xì)胞測(cè)序經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)臺(tái)盼藍(lán)法在鑒定活細(xì)胞與死細(xì)胞的比例時(shí)效果很好。細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性以及目標(biāo)回收量和實(shí)際回收量之間的一致性,取決于我們了解樣本中有多少個(gè)細(xì)胞。一旦過(guò)濾和清洗完成,可采用細(xì)胞計(jì)數(shù)設(shè)備(如血球計(jì)數(shù)器或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀)進(jìn)行定量。這些設(shè)備不但能提供準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù),還能計(jì)算出向微流體芯片上樣適量細(xì)胞所需的細(xì)胞懸液體積。烈冰全線(xiàn)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)滿(mǎn)足超深度、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測(cè)序。

現(xiàn)有的單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)陣營(yíng)在幾個(gè)主要領(lǐng)域存在差別。一個(gè)是基于微流控通道的細(xì)胞與Beads的在通道內(nèi)的動(dòng)態(tài)結(jié)合,通過(guò)油相水相不相容的特點(diǎn)將結(jié)合了的細(xì)胞和Beads進(jìn)行分隔,在這個(gè)空間,單個(gè)細(xì)胞的內(nèi)容物釋放,轉(zhuǎn)錄本或其他生物分析物被標(biāo)記或添加索引,以便下游識(shí)別。BD Rhapsody單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)采用靜態(tài)微孔技術(shù)(Cyto-Seq具有類(lèi)似的技術(shù)原理)。通過(guò)微孔板的物理分隔,將一個(gè)個(gè)單個(gè)細(xì)胞和帶有標(biāo)簽的磁珠,一對(duì)一的“框”在微反應(yīng)的物理平臺(tái)中。這樣,每一個(gè)細(xì)胞都會(huì)結(jié)合一個(gè)磁珠,那么在每一個(gè)磁珠中上長(zhǎng)滿(mǎn)了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,這個(gè)抓手就會(huì)使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫(kù)。BD單細(xì)胞測(cè)序平臺(tái)同時(shí)兼容單細(xì)胞蛋白組測(cè)序(Ab-seq)和免疫組庫(kù)測(cè)序等工作。上海single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序

豐富的測(cè)序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗(yàn),烈冰配套全程個(gè)性化、定制化地?cái)?shù)據(jù)分析服務(wù)。北京scRNA單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)公司

烈冰生物BD Rhapsody平臺(tái),采用精簡(jiǎn)的工作流程助力您的實(shí)驗(yàn)成功: 1.制備單細(xì)胞懸液:可使用碧迪醫(yī)療單細(xì)胞多樣本分析試劑盒和 /或BD Ab-seq寡核苷酸偶聯(lián)抗體( Ab-Oligos)將細(xì)胞染色 2.微孔板預(yù)充和處理:使用自動(dòng)移液器進(jìn)行液體交換 3.單細(xì)胞捕獲工作流程: (1)細(xì)胞上樣:上樣 575微升細(xì)胞懸液;系統(tǒng)未采用微流體通道設(shè)計(jì),無(wú)需擔(dān)心通道堵寨;通過(guò)重力輕輕沉淀細(xì)胞,可捕獲脆弱細(xì)胞,BD Rhapsody微孔板包含大于220,000個(gè)分區(qū),可在低雙細(xì)胞率下捕獲多達(dá)40000個(gè)細(xì)胞 (2)細(xì)胞上樣掃描:估算捕獲的活細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞多態(tài)率 (3)磁珠上樣:微孔的正六邊形幾何形狀和尺寸可防止磁珠多重分配在微孔中 (4)磁珠上樣和磁珠洗滌掃描:估算包含活細(xì)胞和磁珠的微孔數(shù)量;測(cè)定細(xì)胞存留率,評(píng)估是否發(fā)生細(xì)胞損失 (5)細(xì)胞裂解:使用裂解緩沖液,確保細(xì)胞完全裂解 (6)磁珠回收:輕松、高效地磁性回收磁珠并采用Scanner掃描磁珠回收情況北京scRNA單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)公司

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