武漢single cell 單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)公司

隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)（scRNA-Seq）的蓬勃發(fā)展，其在在胚胎發(fā)育，腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性，免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)化等多方面屢建奇功，但是由于細(xì)胞形態(tài)的不同和單細(xì)胞制備中細(xì)胞敏感性的差異等因素影響，scRNA-Seq在數(shù)據(jù)分析時可能會出現(xiàn)細(xì)胞類型占比失真，個別細(xì)胞類型丟失等情況。為了克服單細(xì)胞測序技術(shù)的局限性，單細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)（snRNA-Seq）應(yīng)運(yùn)而生，snRNA-Seq可利用凍存組織直接制備單細(xì)胞核進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序，不僅克服了細(xì)胞形態(tài)差異致使的細(xì)胞捕獲差異，還克服了單細(xì)胞測序必須使用新鮮樣本的多個局限性。單細(xì)胞多組學(xué) 測序技術(shù)會轉(zhuǎn)向研發(fā)多組學(xué)測序分析和功能驗(yàn)證同時 進(jìn)行的方法。武漢single cell 單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)公司

基于橋式PCR技術(shù)的簇生成可以將模版鏈迅速擴(kuò)增成千上萬倍，保證過程中足夠的測序深度。測序時使用特殊標(biāo)記的dNTP：1）堿基上通過敏感鍵修飾上不同的熒光基團(tuán)，用于區(qū)分ATCG；2）3端使用疊氮基團(tuán)封閉，保證一次循環(huán)只上一個dNTP。每一輪循環(huán)結(jié)束時，會通過高速熒光顯微鏡記錄熒光圖像，再通入試劑除去熒光基團(tuán)和疊氮基團(tuán)，開啟下一循環(huán)。通過分析讀取同一位點(diǎn)的熒光，實(shí)時獲取模版鏈的堿基序列。由于過程中使用的化學(xué)反應(yīng)并不可控，隨著循環(huán)數(shù)的增大會出現(xiàn)不同步的情況，因此Illumina的讀長只能限制在200bp左右。廈門烈冰科技單細(xì)胞多組學(xué)平臺單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析，認(rèn)準(zhǔn)烈冰NovelBrain生物信息數(shù)據(jù)分析平臺。

當(dāng)蜂巢孔內(nèi)同時落入細(xì)胞和磁珠后，接下去可以往BDCartridge板中加入細(xì)胞裂解液對細(xì)胞進(jìn)行裂解，使細(xì)胞內(nèi)的RNA與磁珠上的標(biāo)簽進(jìn)行結(jié)合，完成每個細(xì)胞內(nèi)RNA的捕獲和標(biāo)記。這時，再將捕獲了RNA的磁珠進(jìn)行回收，待所有質(zhì)控結(jié)果確認(rèn)通過后就可以進(jìn)行后續(xù)的RNA反轉(zhuǎn)錄、cDNA第二鏈合成等實(shí)驗(yàn)操作。而BDCartridge板則需要再進(jìn)行一次成像，獲得磁珠收集后的掃描圖，判斷磁珠是否已經(jīng)被有效收集。根據(jù)每一步的質(zhì)控結(jié)果，烈冰科技（NovelBio）單細(xì)胞測序?qū)嶒?yàn)團(tuán)隊(duì)會根據(jù)單細(xì)胞分選的實(shí)驗(yàn)結(jié)果生成實(shí)驗(yàn)總結(jié)報(bào)告，判斷每一步驟是否通過質(zhì)控，并得到捕獲的單細(xì)胞數(shù)量以及雙細(xì)胞比例，對整個實(shí)驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)評估。若所有過程通過質(zhì)控，實(shí)驗(yàn)樣本即可進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。

分子檢測型單細(xì)胞多組學(xué)測序技術(shù)中也有一些集中于探究單細(xì)胞內(nèi)表觀遺傳組各層面的變化及關(guān)聯(lián)。功能研究型單細(xì)胞多組學(xué)測序技術(shù),結(jié)合了強(qiáng)大的CRISPR基因編輯技術(shù),從而可以深度挖掘基因表達(dá)調(diào)控與細(xì)胞功能以及命運(yùn)決定之間的因果關(guān)系。在未來,為了更系統(tǒng)地研究多層組學(xué)之間的互動關(guān)系對細(xì)胞命運(yùn)的影響,一方面,單細(xì)胞多組學(xué)測序技術(shù)的策略會繼續(xù)向轉(zhuǎn)錄組結(jié)合其他多個組學(xué)的三組學(xué)甚至四組學(xué)方向發(fā)展.另一方面,單細(xì)胞多組學(xué)測序技術(shù)會轉(zhuǎn)向研發(fā)多組學(xué)測序分析和功能驗(yàn)證同時進(jìn)行的方法,這種探究因果關(guān)系的策略對于揭示發(fā)育和疾病發(fā)展中的關(guān)鍵因子和分子網(wǎng)絡(luò)模塊十分重要。單細(xì)胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。

單細(xì)胞多組學(xué)測序技術(shù)的發(fā)展依賴于各種單一組學(xué)檢測技術(shù)的完善,但即使在單細(xì)胞測序技術(shù)迅速發(fā)展的情況下,在單細(xì)胞水平協(xié)同檢測多個不同的分子層面仍然非常具有挑戰(zhàn)性.每一種組學(xué)都有不同的特性和測量方法,這些方法在敏感性、特異性、通量和適用性上都有所不同.因此,在單細(xì)胞水平對多種組學(xué)方法進(jìn)行整合和應(yīng)用時,需要在策略上做出改進(jìn),以保證各組學(xué)間的上游建庫以及下游生物信息分析均能良好地兼容,同時也要明確技術(shù)的局限性及其對研究結(jié)果的潛在影響。單細(xì)胞多學(xué)可包括基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、影像組學(xué)。廣州single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)公司

單一的轉(zhuǎn)錄本研究不能體現(xiàn)生命進(jìn)程的變化，因此多組學(xué)聯(lián)合分析成為解析生命進(jìn)程的有力工具。武漢single cell 單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)公司

空間轉(zhuǎn)錄組測序與單細(xì)胞測序的結(jié)果不同，這里存在一個概念叫做NumberofSpotsundertissue，即，空間轉(zhuǎn)錄組片子上組織覆蓋的有效的spot位點(diǎn)。這個有效Spot的篩選標(biāo)準(zhǔn)是有UMI以及有序列表達(dá)。那么這個時候，貼片的質(zhì)量就成為了制約空間轉(zhuǎn)錄組有效區(qū)域的要點(diǎn)了。如果組織沒有很好地覆蓋到空轉(zhuǎn)片上，那么容易出現(xiàn)雖然有HE染色有組織片子，但是沒有基因表達(dá)，即無有效Spot位點(diǎn)。同樣的，另一個就是組織切片的大小，也就是說組織切片在整個玻片的覆蓋面積越小，分析的有效區(qū)域就越少。這兩者基本上決定了整個空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果的基礎(chǔ)質(zhì)量。武漢single cell 單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)公司

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