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    MSH2和MLH1分別與其同源錯配修復(fù)蛋白組成復(fù)合體發(fā)揮作用。MSH2分別與MSH6、MSH3組成復(fù)合體MutSα、MutSβ。MLH1則分別與PMS2、PMS1或MLH3形成復(fù)合體MutLα、MutLβ或MutLγ。MutSα或MutSβ識別了錯配堿基后，與DNA堿基結(jié)合，再與MutL結(jié)合，***ATP酶，水解錯配的堿基，同時***核酸內(nèi)切酶1，切除并修復(fù)錯配的堿基。微衛(wèi)星(microsatellite)***存在于原核及真核生物基因組中，具有較高的遺傳穩(wěn)定性，但在錯配修復(fù)基因功能發(fā)生異常時，子代細(xì)胞微衛(wèi)星的重復(fù)核苷酸數(shù)量可增多或減少，導(dǎo)致微衛(wèi)星的長度不再保持一致，這種現(xiàn)象稱MSI。錯配修復(fù)基因發(fā)生突變或啟動子甲基化可引起DNA錯配修復(fù)功能的降低，導(dǎo)致MSI。很多重要的生長調(diào)節(jié)相關(guān)基因如Ⅱ型TGF-β、IGF2R、PTEN、BAX等的編碼區(qū)或啟動子區(qū)含有微衛(wèi)星，錯配修復(fù)異常導(dǎo)致的MSI可引起這些基因在復(fù)制過程中發(fā)生錯義突變或移碼突變，這種復(fù)制錯誤不斷累積，**終造成liu的發(fā)生，而MSI則可作為經(jīng)此途徑發(fā)生的結(jié)直腸ai的分子標(biāo)志物。人類基因組中的微衛(wèi)星位點(diǎn)很多，1998年MSI國際研究合作組織推薦對Bat26、Bat25、D5S346、D2S123和D17S250五個位點(diǎn)進(jìn)行檢測，根據(jù)微衛(wèi)星位點(diǎn)不穩(wěn)定的數(shù)量將結(jié)直腸ai分為高頻MSI(MSI-H。方法簡單易行，醫(yī)保覆蓋，適于臨床推廣。云南推薦dMMR抗體檢測試劑鄭重承諾

    atccnumbercrl-8287)以5:1比例混合，離心1500rpm，5min。棄上清后離心管放入37℃水浴中，在1分鐘內(nèi)緩慢加入1ml的peg1500(roche公司)，并攪動細(xì)胞。在溫水中靜置1min后，加入10ml無血清的imdm(sigma公司)，混勻，離心1000rpm，5min。棄上清后，加入10ml血清(paa公司)小心的將細(xì)胞吹打起來，并加入5ml混合10xhat(sigma公司)的胸腺細(xì)胞，混勻。再加入25ml含有％硝基纖維素(sigma公司)的半固體培養(yǎng)基充分混勻，然后均勻的倒入20個細(xì)胞培養(yǎng)皿中。將細(xì)胞培養(yǎng)皿放入到濕盒中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。三、克隆化及elisa篩選陽性雜交瘤細(xì)胞：融合后11天，克隆細(xì)胞團(tuán)大小密度適中，在解剖鏡下，吸取圓、實(shí)、大的克隆團(tuán)(10板×93個)打入事先準(zhǔn)備好培養(yǎng)基的96孔培養(yǎng)板中，放入37℃5％co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。3天后，細(xì)胞量大約占底面積2/3，取100μl上清進(jìn)行elisa篩選。陽性克隆完全換液，加入200μl含飼養(yǎng)細(xì)胞和1％ht(sigma公司)的完全培養(yǎng)基。兩天后進(jìn)行第二次elisa篩選，陽性克隆轉(zhuǎn)入事先準(zhǔn)備好培養(yǎng)基(含飼養(yǎng)細(xì)胞和ht)的24孔板培養(yǎng)。五天后取100μl上清進(jìn)行第三次elisa篩選，陽性克隆逐次轉(zhuǎn)入6孔板和細(xì)胞培養(yǎng)瓶擴(kuò)大培養(yǎng)并凍存。四川個性化dMMR抗體檢測試劑誠信合作【邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)】一直以來致力于轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)服務(wù)和伴隨診斷產(chǎn)品開發(fā)及商業(yè)化。

    ％的MLH1啟動子甲基化或MLH1表達(dá)缺失的結(jié)直腸ai中存在BRAF基因V600E突變，而且除極個別報道外，BRAF突變幾乎從不發(fā)生在Lynch綜合征相關(guān)結(jié)直腸ai中，因此檢測liu是否存在MLH1啟動子甲基化和BRAF基因V600E突變可作為區(qū)分散發(fā)性MSI-H結(jié)直腸ai與Lynch綜合征相關(guān)結(jié)直腸ai的重要參數(shù)。2．MSI-H結(jié)直腸ai的臨床病理特征：Lynch綜合征相關(guān)性結(jié)直腸ai與散發(fā)性MSI-H結(jié)直腸的臨床病理特征大致相同。與MSS結(jié)直腸ai相比，MSI-H結(jié)直腸ai好發(fā)于右半結(jié)腸，組織學(xué)類型以黏液腺ai和低分化腺ai多見，liu內(nèi)有明顯的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(tumorinfiltratinglymphcytes，TIL)，較少見到腺腔內(nèi)壞死，liu邊緣呈膨脹性浸潤，周圍可見Crohn病樣淋巴細(xì)胞聚集(圖1)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率較低。相對于Lynch綜合征，散發(fā)性MSI-H結(jié)直腸ai發(fā)病年齡較大，女性相對多見，更易發(fā)生在右半結(jié)腸。圖1MSI-Hliu的形態(tài)特點(diǎn)；liu呈低分化或伴黏液分化，伴***的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(A，HE中倍放大)，liu前緣呈膨脹性浸潤，周圍見Crohn病樣淋巴細(xì)胞聚集灶(B，HE低倍放大)盡管MSI-H結(jié)直腸ai的病理特征與MSSliu存在一定差別，但除TIL外，其他形態(tài)指標(biāo)的特異性和敏感性均較低，即使結(jié)合發(fā)病年齡等因素(<60歲)。

dMMR 是 MMR 表達(dá)缺失，pMMR 是 MMR 表達(dá)正常。dMMR 表現(xiàn)為高頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-H）， pMMR 表現(xiàn)為低頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-L）或微衛(wèi)星穩(wěn)定（MS-S）。 目前，*常用的篩查結(jié)直腸ai MMR 表達(dá)有無缺失的方法有 2 種：免疫組化檢測 MMR 相關(guān)蛋白的表達(dá)，以及 PCR 檢測多個微衛(wèi)星位點(diǎn)以判斷有否存在 MSI。

下面重點(diǎn)來了： 免疫組化：有缺失，dMMR；無缺失，pMMR 免疫組化主要檢測ai組織中 MLH1，PMS2，MSH2 及 MSH6 這 4 種蛋白的表達(dá)： 

1. 若結(jié)果顯示任一蛋白完全缺失，則判讀為  dMMR； 

2. 若顯示無蛋白缺失，則判度為 pMMR。 所以回到上面的病例： MLH1，PMS2，MSH2 及 MSH6 蛋白均未缺失，應(yīng)判讀為 pMMR，可以用單藥 5-Fu 進(jìn)行輔助化療。 PCR 檢測：≥40%，MSI-H；<40%，MSI-L/MS-S MSI 的分類是基于不同單核或雙核苷酸重復(fù)序列的改變（如： BAT25、 BAT26、 D5S346、 D2S123 和 D17S250，即 Bethesda 標(biāo)準(zhǔn)微衛(wèi)星位點(diǎn)）。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)病理檢測平臺配備有Roche/Leica/Dako等多種全自動檢測儀器，有病理醫(yī)生進(jìn)行精確的判讀。

    與無突變的結(jié)直腸ai相比，BRAF突變型CRC患者的年齡偏大，女性居多，微衛(wèi)星不穩(wěn)定可能性大、組織級別高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和局部晚期發(fā)生率高。術(shù)后輔助***后，BRAF突變型CRC的無病生存期更短，復(fù)發(fā)后的總生存期更差。PETACC-3研究檢測了1404例Ⅱ~Ⅲ期結(jié)腸ai患者的BRAF和KRAS突變，結(jié)果顯示，BRAF突變型患者的總生存劣于野生型患者。當(dāng)根據(jù)微衛(wèi)星不穩(wěn)定分層后，這種差異更加明顯。PETACC8和N0147試驗(yàn)的匯總分析提示W(wǎng)T組，BRAF突變組的中位SAR分別為，和，其中BRAF突變組（HR：：，P＜），提示BRAFV600E是TTR，SAR和OS的**預(yù)測因子。在以后的臨床試驗(yàn)輔助試驗(yàn)中應(yīng)將這些突變納入為重要分層因素。2.評估Lynch綜合癥Lynch綜合癥的機(jī)制通常是胚系MMR的缺失，SepulvedaAR等報道BRAFV600突變在胚系MMR缺失的患者中很少發(fā)生，但在具有表現(xiàn)得MMR缺失患者中被報道有高達(dá)3/4的患者具有BRAFV600E突變。因此BRAF突變可作為區(qū)分胚系與表現(xiàn)dMMR的手段，特別是MLH1缺失的情況下，進(jìn)一步評估Lynch綜合癥。三、MSI/MMR大量研究表明，微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）是由錯配修復(fù)（MMR）基因發(fā)生缺陷引起的，當(dāng)錯配修復(fù)系統(tǒng)功能異常時，微衛(wèi)星出現(xiàn)的復(fù)制錯誤得不到糾正并不斷累積。邁杰與大學(xué)，研究院所，醫(yī)院的科研人員進(jìn)行科研轉(zhuǎn)化研究合作,包括基礎(chǔ)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究等。吉林一體化dMMR抗體檢測試劑推薦咨詢

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    還應(yīng)重視對有血緣關(guān)系親屬的結(jié)直腸ai篩查。詳盡的篩查建議見《中國結(jié)直腸liu篩查、早診早治和綜合預(yù)防共識意見》。4.炎癥性腸病相關(guān)結(jié)直腸ai的篩查：炎癥性腸病是結(jié)直腸ai發(fā)生的高危因素。其中潰瘍性結(jié)腸炎ai變的主要危險因素包括全結(jié)腸病變及病程>10年，對此類患者應(yīng)更重視結(jié)腸鏡檢查。根據(jù)潰瘍性結(jié)腸炎ai變的不同危險度分級，決定全結(jié)腸鏡篩查的時間間隔。潰瘍性結(jié)腸炎患者全結(jié)腸鏡篩查的主要目的是早期發(fā)現(xiàn)黏膜上皮內(nèi)瘤變及相關(guān)病灶，因此需要進(jìn)行多段多點(diǎn)活組織病理學(xué)檢查以提高檢出率?？肆_恩病的ai變率接近潰瘍性結(jié)腸炎，長期活動***程是ai變發(fā)生的高危因素，累及結(jié)直腸的克羅恩病患者篩查方案與潰瘍性結(jié)腸炎相似。四、結(jié)直腸ai的化學(xué)預(yù)防結(jié)直腸ai的一級預(yù)防包括結(jié)直腸ai的化學(xué)預(yù)防和對結(jié)直腸腺瘤的處理。通過改善飲食等生活習(xí)慣，應(yīng)用藥物預(yù)防腺瘤的發(fā)生或切除后再發(fā)或ai變，以及預(yù)防炎癥性腸病ai變，均屬于廣義的化學(xué)預(yù)防。對結(jié)直腸腺瘤的處理包括：一級預(yù)防即降低結(jié)直腸腺瘤的發(fā)生風(fēng)險。具體的措施包括：(1)改善飲食結(jié)構(gòu)，增加膳食纖維的攝取。(2)適當(dāng)補(bǔ)充鈣劑和維生素D。(3)對葉酸水平較低者，可適當(dāng)補(bǔ)充葉酸。(4)戒煙。對于罹患結(jié)直腸ai高危人群年齡>。云南推薦dMMR抗體檢測試劑鄭重承諾