陜西個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑來電咨詢

    選擇靠近n末端的氨基酸區(qū)域1-100位氨基酸序列與gst蛋白融合表達(dá)為抗原片段，抗原片段的dna編碼序列為seqid**。二.重組msh6蛋白片段的表達(dá)和純化將seqid**的dna序列直接合成并克隆進(jìn)克隆載體質(zhì)粒puc57(南京金斯瑞生物科技有限公司)。該dn**段5’端和3’端分別帶有ecori和xhoi酶切位點(diǎn)，取5μl(約1微克)帶有msh6片段的質(zhì)粒puc57-msh6和用作載體的pet30a-gst(merck)5μl(約1微克)分別進(jìn)行雙酶切，酶切體系為：ecori(takara)1μl，xhoi(takara)1μl，5μl10×bufferh，38μlddh2o，37℃酶切三小時(shí)。酶切產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖電泳，柱離心式dna回收試劑盒(北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司)切膠回收基因和載體片段。取2μl回收的線性化載體，3μl酶切回收的msh6基因片段，5μl2×ez-ligt4dna快連試劑(北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司)，混勻，室溫連接三十分鐘。取出-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞(bl21)，解凍后加入連接產(chǎn)物，冰上放置30min。42℃熱激90秒后冰浴2min后，加入800μl無抗性的lb培養(yǎng)基。37℃復(fù)蘇培養(yǎng)20min，涂板。從轉(zhuǎn)化的平板挑單克隆到，37℃，200rpm培養(yǎng)，dna測(cè)序(北京華大基因)。將測(cè)序正確的克隆菌液2ul活化的菌液到5mllb液體培養(yǎng)基中，37℃，200rpm，培養(yǎng)。PMS2抗體試劑 蘇蘇械備20180570號(hào).陜西個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑來電咨詢

    篩選出分泌特定單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株abm58060-20a2-pu。將此細(xì)胞株轉(zhuǎn)入t-75培養(yǎng)瓶中擴(kuò)增至對(duì)數(shù)生長期保種或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例3腹水誘生法制備單克隆抗體一、腹水制備對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基洗滌并懸起，計(jì)數(shù)～5×105，1ml。懸浮的細(xì)胞腹腔注射事先用石蠟油致敏的小鼠。7天后開始收集腹水。取出的腹水于4℃離心4000rpm，10min。小心吸出中間的腹水收集于離心管中，4℃或-20℃保存。二、單克隆抗體的純化用hitraprproteinaff(ge公司)親和層析法按說明書從腹水中純化抗體。sds-page膠鑒定純度，bradford法測(cè)定濃度。純化的抗體保存于-20℃。實(shí)施例4單克隆抗體特性鑒定一、亞型鑒定用100mmpbs()稀釋包被羊抗鼠igg(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，過夜。傾空液體，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封閉液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。傾空液體用pbs-t清洗3次。用封閉液1：1000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(κ,λ)抗體或1：2000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗體，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。河南dMMR抗體檢測(cè)試劑共同合作邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)嚴(yán)格按照IS013485標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定建立質(zhì)量體系。

    可能是由于蛋白的不穩(wěn)定造成的。目前，其用途主要為：聯(lián)合檢測(cè)msh2、msh6、pms2、mlh1可用于lynchsyndrome(遺傳性非息肉性結(jié)腸ai)的篩查。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：發(fā)明人提供了一種抗msh6蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別是。進(jìn)一步地，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)氨基酸序列分別是。進(jìn)一步地，所述單克隆抗體特異性識(shí)別msh6蛋白。進(jìn)一步地，所述單克隆抗體由保藏號(hào)為cgmcc**7492的雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生。所述細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞系abm58060-20a2-pu，分類命名為：小鼠雜交瘤細(xì)胞系，該細(xì)胞系已于2019年04月3日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所。進(jìn)一步地，所述抗msh6蛋白為小鼠igg2b亞型單克隆抗體。發(fā)明人還提供了一種抗msh6蛋白單克隆抗體的制備方法，其免疫小鼠所用的抗原為seqid**所示核苷酸序列編碼，經(jīng)由大腸桿菌重組表達(dá)的重組蛋白。發(fā)明人還提供了一株分泌抗msh6蛋白的雜交瘤細(xì)胞系，所述細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞系abm58060-20a2-pu，所述細(xì)胞系保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為：cgmcc**7492。

    在臨床中，對(duì)于Ⅱ期結(jié)腸ai病人，考慮使用5-Fu單藥化療時(shí)，主要考慮因素是什么？可能有的醫(yī)生會(huì)說，「Soeasy！檢測(cè)下MMR啊，看看是dMMR還是pMMR」。來吧，我們看1個(gè)病例患者女，51歲，診斷為T3N0M0（伴有普危因素），免疫組化結(jié)果：HER2(1+)，GPC3(-)，MSH2(+)，MSH6(+)，PMS2(+)，MLH1(+)，CK19(-)，CK20(+)，Ki67(60%+)。這名患者該不該用單藥5-Fu進(jìn)行輔助化療？一拿到免疫組化結(jié)果，很多醫(yī)生的表情是這樣的：大家都知道，MSI-H/dMMR患者不能從單藥5-Fu的***中獲益。但問題是，面對(duì)由英文字母、數(shù)字、括號(hào)和加減號(hào)組成的免疫組化結(jié)果，如何確定是dMMR還是pMMR？到底怎樣算H-MSI，怎樣算L-MSI，怎樣又算MS-S？下面我們就來解決這個(gè)問題。MMR基因是DNA錯(cuò)配修復(fù)基因，它的表達(dá)缺失可引起DNA復(fù)制過程中錯(cuò)配的累積，導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）的發(fā)生，約15%的結(jié)直腸ai是經(jīng)由MSI途徑引發(fā)的。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)致力于解決創(chuàng)新藥物的研發(fā)痛點(diǎn)及患者的用藥痛點(diǎn)，助力精z準(zhǔn)醫(yī)療！

dMMR（MSH6/MLH1/PMS2/MSH2）抗體檢測(cè)試劑錯(cuò)配修復(fù)〈MismatchRepair,MMR)發(fā)生于DNA復(fù)制、重組及損傷修復(fù)過程，能夠識(shí)別和修復(fù)錯(cuò)誤的插入、缺失和整合。人體內(nèi)常見的4種錯(cuò)配修復(fù)蛋白，即hMLH1、hMSH2、hMSH6、hPMS2協(xié)同發(fā)揮DNA錯(cuò)配修復(fù)功能。MMR系統(tǒng)任何一種蛋白缺失，都會(huì)導(dǎo)致DNA錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷(MismatchRepairDeficiency,dMMR)，產(chǎn)生復(fù)制錯(cuò)誤或微衛(wèi)顯不穩(wěn)定(MicrosatelliteInstability,MSI)，進(jìn)而誘導(dǎo)liu發(fā)生。

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的dMMR抗體檢測(cè)試劑采用免疫組織化學(xué)法（IHC）檢測(cè)liu組織中MLH1、MSH2、MSH6和、PMS2四種蛋白的表達(dá)。

備案號(hào)

PMS2抗體試劑蘇蘇械備20180570號(hào)

MSH6抗體試劑蘇蘇械備20180569號(hào)

MSH2抗體試劑蘇蘇械備20180568號(hào)

MLH1抗體試劑蘇蘇械備20180519號(hào)

產(chǎn)品特點(diǎn)**使用北歐免疫組化質(zhì)控中心NordiQC推薦的IHC抗體組合。精確經(jīng)多平臺(tái)平行驗(yàn)證（MSI-PCR、MSI-NGS)，一致性高，特異性好普適覆蓋多個(gè)主流IHC自動(dòng)染色平臺(tái)，適用范圍廣便捷方法簡單易行，醫(yī)保覆蓋。 邁杰基于基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)及病理組學(xué)等綜合性轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺(tái)，豐富的伴隨診斷開發(fā)經(jīng)驗(yàn)。河南dMMR抗體檢測(cè)試劑共同合作

邁杰與大學(xué)，研究院所，醫(yī)院的科研人員進(jìn)行科研轉(zhuǎn)化研究合作,包括基礎(chǔ)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究等。陜西個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑來電咨詢

    每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的檸檬酸緩沖液()進(jìn)行顯色反應(yīng)，10-20min內(nèi)測(cè)定405nm波長下的od值。結(jié)果顯示，本發(fā)明單克隆抗體為igg2b型鼠源單克隆抗體。二、親和常數(shù)測(cè)定包被msh6重組蛋白，包被濃度為2μg/ml,100μl/孔，4℃包被過夜，pbs-t洗3次。每孔加200μl封閉液37℃封閉2h，pbs-t洗3次。實(shí)施例4中純化的單克隆抗體，從1：200開始2倍梯度稀釋，***1孔留空白對(duì)照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp標(biāo)記的羊抗鼠二抗1：20000稀釋，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的檸檬酸-磷酸緩沖液顯色10min，加50μ。用酶標(biāo)儀測(cè)定波長450nm的吸光值。畫出od值對(duì)應(yīng)抗體稀釋倍數(shù)的曲線，找出≥1/2“平臺(tái)od值”對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)a。利用下列公式計(jì)算出親和常數(shù)為×109。三、單抗反應(yīng)特異性和應(yīng)用效果選擇msh6重組蛋白，用免疫印跡的方法檢測(cè)本發(fā)明單克隆抗體的識(shí)別特異性，免疫印跡實(shí)驗(yàn)過程如下：每種蛋白上樣約5-10ng，進(jìn)行12％聚丙烯酰胺凝膠電泳。按常規(guī)方法在bio-rad電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中將凝膠蛋白帶轉(zhuǎn)移到pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于含5％脫脂奶粉的tbs-t封閉液中4℃過夜。加入單克隆抗體msh6。陜西個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑來電咨詢