重慶個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑創(chuàng)新服務(wù)

    具有兩個(gè)或兩個(gè)以上位點(diǎn)改變)、低頻MSI(MSI-L，*有一個(gè)位點(diǎn)發(fā)生改變)以及微衛(wèi)星穩(wěn)定型(MSS，沒有位點(diǎn)發(fā)生改變)。由于MSI-L結(jié)直腸ai在臨床表現(xiàn)和病理改變上與MSSliu無明顯差別，因此通常被歸入MSSliu。約15％的結(jié)直腸ai經(jīng)MSI途徑發(fā)生，其中3％左右為家族遺傳性(Lynch綜合征)，12％為散發(fā)性。二、遺傳性MSI-H結(jié)直腸ai(Lynch綜合征)與散發(fā)性MSI-H結(jié)直腸ai1．Lynch綜合征與散發(fā)性MSI-H結(jié)直腸ai發(fā)生機(jī)制的異同：作為經(jīng)MSI途徑發(fā)生的結(jié)直腸ai的典型**，Lynch綜合征**初由Michigan大學(xué)病理系的Warthin博士于1913年**先發(fā)現(xiàn)并報(bào)道，至1966年Lynch醫(yī)師明確了本病是一種常染色顯性遺傳的liu綜合征，在迄今100年的發(fā)現(xiàn)和研究過程中，“ai癥家族綜合征(cancerfamilysyndrome)”、“Lynch綜合征”、“遺傳性非息肉病性結(jié)直腸ai(hereditarynon．polyposiscolorectalcancer)”等名稱曾先后在不同時(shí)期被使用。隨著近年來錯(cuò)配修復(fù)基因在本病發(fā)生中的作用逐漸明確，現(xiàn)在WHOliu分類將Lynch綜合征這一名稱用于攜帶有錯(cuò)配修復(fù)基因胚系缺陷的常染色體顯性遺傳性liu綜合征。目前在Lynch綜合征患者中發(fā)現(xiàn)的DNA錯(cuò)配修復(fù)缺陷包括三種類型：(1)錯(cuò)配修復(fù)基因的胚系突變。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)利用新一代智能技術(shù)補(bǔ)充傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的檢測(cè)模式，賦能醫(yī)療健康建設(shè)，更好地為臨床和患者服務(wù)。重慶個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑創(chuàng)新服務(wù)

    免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白(keratin)顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。2、敏感性高在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。3、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的。廣東標(biāo)準(zhǔn)dMMR抗體檢測(cè)試劑鄭重承諾邁杰與大學(xué)，研究院所，醫(yī)院的科研人員進(jìn)行科研轉(zhuǎn)化研究合作,包括基礎(chǔ)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究等。

    三、我國(guó)結(jié)直腸ai的篩查策略結(jié)直腸ai篩查策略包括篩查對(duì)象、篩查方法、篩查流程、篩查頻率、篩查間隔和確診后的規(guī)范***及隨訪等。各國(guó)應(yīng)根據(jù)本國(guó)國(guó)情制訂篩查策略并適時(shí)進(jìn)行更新和補(bǔ)充。依據(jù)2011年10月由中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)頒布的《中國(guó)結(jié)直腸liu篩查、早診早治和綜合預(yù)防共識(shí)意見》，我國(guó)結(jié)直腸ai篩查的策略如下：1.人群篩查：我國(guó)結(jié)直腸ai的篩查目標(biāo)人群為50～74歲者。這符合我國(guó)結(jié)直腸ai發(fā)病規(guī)律，從50歲開始明顯上升，75～80歲達(dá)到高峰，然后緩慢下降。國(guó)外相關(guān)研究結(jié)果顯示：不必將76～85歲高齡人群作為篩查目標(biāo)人群。結(jié)合我國(guó)人均壽命、結(jié)直腸ai高發(fā)年齡等國(guó)情，故將人群篩查**高年齡定位在74歲。我國(guó)人口基數(shù)較大，且結(jié)直腸ai發(fā)病率逐年上升，潛在患病人群龐大，在篩查中***應(yīng)用纖維結(jié)腸鏡，其衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)成本勢(shì)必巨大，且纖維結(jié)腸鏡為有創(chuàng)檢查，在普通人群中***應(yīng)用面臨較大的依從性問題。故我國(guó)普遍采用初步篩查發(fā)現(xiàn)高危人群，對(duì)于高危人群行全結(jié)腸鏡檢查的序貫式篩查策略。具體的篩查方法包括FOBT、基于高危因素的問卷調(diào)查、乙狀結(jié)腸鏡及全結(jié)腸鏡檢查等，篩查周期建議為3年。對(duì)符合以下任意一項(xiàng)者應(yīng)視為高危人群：(1)FOBT陽性。(2)ai癥病史。(3)息肉病史。。

    3）當(dāng)樣本為MSH6或PMS2蛋白缺失的MSI-L時(shí)，可能是Lynch綜合征的罕見表型，建議進(jìn)一步確診。由于所有MMR蛋白的核染容易識(shí)別，且周圍間質(zhì)組織就可作為內(nèi)對(duì)照；同時(shí)IHC檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜和可以迅速拿到檢測(cè)結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)，所以目前IHC檢測(cè)已經(jīng)替代PCR檢測(cè)成為林奇綜合征的初步篩選方法，或在PCR檢測(cè)之后找出缺失的MMR蛋白。MSI對(duì)結(jié)直腸ai化療和預(yù)后的預(yù)測(cè)意義結(jié)直腸ai的化療而言，有大量的研究表明MSI狀態(tài)對(duì)于決定結(jié)直腸ai患者是使用5-FU***還是伊立替康***很重要。一項(xiàng)林奇綜合征患者長(zhǎng)期隨訪的回顧性研究，根據(jù)MSI狀態(tài)進(jìn)行評(píng)價(jià)，證實(shí)5-FU輔助***可使MSI-L和MSS患者生存得到改善。然而，在MSI-H患者術(shù)后5-FU輔助***并沒有顯示出有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的效果，相反5年生存率低于那些*接受手術(shù)***的患者[11]。同時(shí)，MSI患者比起MSS患者對(duì)伊立替康的***更為敏感。根據(jù)上文所述，MSI的發(fā)生，與MMR基因缺失有關(guān)，因此NCCN結(jié)直腸ai小組建議計(jì)劃單獨(dú)使用5-FU進(jìn)行輔助***的Ⅱ期結(jié)直腸ai患者需進(jìn)行MSI檢測(cè)。結(jié)直腸ai的預(yù)后而言，一項(xiàng)匯集32項(xiàng)研究的薈萃分析表明：MSI患者生存期更長(zhǎng)、病死率更低(不易發(fā)生liu復(fù)發(fā)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)[12]。鑒于MMR基因在結(jié)直腸ai***和預(yù)后方面的***影響。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)--伴隨診斷整體解決方案提供者,檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)全涵蓋.

    選擇靠近n末端的氨基酸區(qū)域1-100位氨基酸序列與gst蛋白融合表達(dá)為抗原片段，抗原片段的dna編碼序列為seqid**。二.重組msh6蛋白片段的表達(dá)和純化將seqid**的dna序列直接合成并克隆進(jìn)克隆載體質(zhì)粒puc57(南京金斯瑞生物科技有限公司)。該dn**段5’端和3’端分別帶有ecori和xhoi酶切位點(diǎn)，取5μl(約1微克)帶有msh6片段的質(zhì)粒puc57-msh6和用作載體的pet30a-gst(merck)5μl(約1微克)分別進(jìn)行雙酶切，酶切體系為：ecori(takara)1μl，xhoi(takara)1μl，5μl10×bufferh，38μlddh2o，37℃酶切三小時(shí)。酶切產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖電泳，柱離心式dna回收試劑盒(北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司)切膠回收基因和載體片段。取2μl回收的線性化載體，3μl酶切回收的msh6基因片段，5μl2×ez-ligt4dna快連試劑(北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司)，混勻，室溫連接三十分鐘。取出-80℃保存的感受態(tài)細(xì)胞(bl21)，解凍后加入連接產(chǎn)物，冰上放置30min。42℃熱激90秒后冰浴2min后，加入800μl無抗性的lb培養(yǎng)基。37℃復(fù)蘇培養(yǎng)20min，涂板。從轉(zhuǎn)化的平板挑單克隆到，37℃，200rpm培養(yǎng)，dna測(cè)序(北京華大基因)。將測(cè)序正確的克隆菌液2ul活化的菌液到5mllb液體培養(yǎng)基中，37℃，200rpm，培養(yǎng)。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)為客戶提供生物標(biāo)記物發(fā)現(xiàn)、 靶點(diǎn)驗(yàn)證、伴隨診斷開發(fā)與商業(yè)化、患者用藥指導(dǎo)等一體化解決方案。山西專注dMMR抗體檢測(cè)試劑服務(wù)至上

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)同時(shí)擁有符合GMP和ISO 13485的要求的GMP生產(chǎn)車間及倉(cāng)儲(chǔ)，可以充分滿足客戶的需求。重慶個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑創(chuàng)新服務(wù)

    對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前*常用的技術(shù)。本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是：定位準(zhǔn)確，對(duì)比度好，染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速，已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法，且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬***法、ABC法、SP法等。3、免疫膠體金技術(shù)免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠，它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白，對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此，用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針，就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位，甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒，且膠體金的電子密度高，所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色，因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。四、免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)1、特異性強(qiáng)免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此。重慶個(gè)性化dMMR抗體檢測(cè)試劑創(chuàng)新服務(wù)