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染色質(zhì)由組蛋白和DNA組成,——147個(gè)堿基對(duì)的DNA纏繞在8個(gè)組蛋白(由H2A、H2B、H3和H4形成的八聚體)周?chē)?,形成基本的染色質(zhì)單位,即核小體。核小體像珠串一樣串連在一起,并被包裝成更高階的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)。DNA帶負(fù)電荷,富含堿性氨基酸的組蛋白帶正電荷,且組蛋白多聚物有很多疏水區(qū)段。所有這些特點(diǎn)導(dǎo)致宿主DNA殘留(HCD)能吸附很多物質(zhì),包括宿主蛋白殘留(HCD)、色譜填料、目的病毒顆粒等,因此,HCD的存在增加了工藝流程的復(fù)雜度,同時(shí)也降低了病毒顆粒的穩(wěn)定性。SAN HQ提高核酸污染去除效率,同時(shí)提高目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)量。500mM鹽濃度條件高鹽核酸酶70921-160
核酸酶活性受到很多因素影響,如鹽濃度、pH、底物、溫度等。因此,不同客戶(hù)、不同項(xiàng)目中核酸酶的使用條件都不一樣。目前,生物制藥行業(yè)對(duì)Benonase全能核酸酶的使用比較熟悉,如生理鹽或低鹽濃度、脫鹽操作等。對(duì)于AdV/AAV等項(xiàng)目,使用SAN HQ高鹽核酸酶替代Benzonase時(shí),只需提高反應(yīng)體系總鹽濃度到400mM-500mM即可,溫度、Mg2+濃度等條件不用做任何調(diào)整,同樣酶量的SAN HQ對(duì)宿主細(xì)胞DNA(HCD)的去除效果更好、病毒載體得率更高。經(jīng)過(guò)工藝優(yōu)化后,可以將SAN HQ高鹽核酸酶的用量減少到原來(lái)的1/3-1/4,且HCD去除效果及產(chǎn)品得率更高。500mM鹽濃度條件高鹽核酸酶70921-160無(wú)錫高鹽核酸酶哪家好呢,歡迎咨詢(xún)上海倍篤生物 。
宿主細(xì)胞DNA殘留的擔(dān)憂(yōu)是基于致ai風(fēng)險(xiǎn)理論,特別是生產(chǎn)細(xì)胞系所包含的致ai序列,比如較常見(jiàn)腺病毒基因E1A和E1B(HEK293, PerC.6 和CAP 細(xì)胞系),人乳tou瘤病毒E6和E7基因(HeLa細(xì)胞系)等。當(dāng)使用致ai細(xì)胞系生產(chǎn)AAV時(shí),下游純化須盡可能減少殘留DNA。工業(yè)上一般使用核酸酶分解殘留DNA,普遍認(rèn)為小于200 bp的DNA片段可有效降低致ai風(fēng)險(xiǎn)。宿主細(xì)胞蛋白殘留與免疫原性、炎癥或過(guò)敏性休克有關(guān)。盡管與非人類(lèi)的生產(chǎn)原料相比(非人類(lèi)細(xì)胞系如BHK21或昆蟲(chóng)細(xì)胞,以及輔助病毒如HSV、腺病毒、桿狀病毒),人類(lèi)細(xì)胞免疫原性比較弱。
上海倍篤生物科技有限公司(簡(jiǎn)稱(chēng)“倍篤生物”),由中國(guó)科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士,于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個(gè)品牌的儀器、試劑及耗材,遵守相關(guān)法規(guī)要求,如cGMP規(guī)范、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等,致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測(cè)研發(fā)等,藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶(hù)提供合規(guī)、高質(zhì)量物料及專(zhuān)業(yè)服務(wù),以期與客戶(hù)共同協(xié)作,加快研發(fā)及生產(chǎn)進(jìn)度,為客戶(hù)提供更多價(jià)值。無(wú)需為了保持高酶活而進(jìn)行脫鹽操作,簡(jiǎn)化工藝、節(jié)省時(shí)間;
經(jīng)典的慢病毒載體(LV)的生產(chǎn)工藝如下,——三質(zhì)粒系統(tǒng)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞系,轉(zhuǎn)染24小時(shí)后LV由轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞生產(chǎn)并排出到培養(yǎng)上清液中;收獲上清培養(yǎng)液后,加入核酸酶去除HCD污染,通過(guò)澄清步驟去除大的細(xì)胞碎片等雜質(zhì);下游純化步驟分離LV載體,純化方法包括切向流過(guò)濾TFF、色譜純化及超速離心;純化后的LV病毒顆粒經(jīng)過(guò)無(wú)菌過(guò)濾,更換到優(yōu)化后的配方中,灌裝并冷凍保存。每批Car-T生產(chǎn)時(shí)取對(duì)應(yīng)量的LV病毒,切忌反復(fù)凍融,否則LV病毒會(huì)失活。南京高鹽核酸酶售后服務(wù)哪家好呢,歡迎咨詢(xún)上海倍篤生物 。海南ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202
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ArcticZymes Technologies于2017年推出了SAN HQ高鹽核酸酶及其對(duì)應(yīng)的SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中SAN HQ高鹽核酸酶的殘留含量,特異性的anti-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在96-well plate,生物素Biotin標(biāo)記anti-SAN作為檢測(cè)抗體,鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物起到信號(hào)放大作用,TMB是終反應(yīng)底物。該試劑盒特異識(shí)別SAN HQ高鹽核酸酶,對(duì)其它核酸酶沒(méi)有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.4-25.6ng/ml,檢測(cè)精確度高RSD<=15%,2-8℃條件下保存12個(gè)月。500mM鹽濃度條件高鹽核酸酶70921-160