遼寧凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

用于水解離心柱中糖蛋白上的N-聚糖的固定化酶。 Genovis的PNGase F 固定化微離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的 PNGase F 酶，用于在樣品中酶峰減少的糖蛋白上水解 N-糖。 將糖蛋白樣品與PNGase F一起在離心柱中固定，然后通過離心步驟輕松收集去糖基化的蛋白質(zhì)。由于空間位阻，PNGase F對某些糖蛋白的活性可能緩慢或受到抑制 - 在這些情況下可能需要更長的孵育時間或糖蛋白變性。 Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.2 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3.z終樣品中的酶峰減少。實現(xiàn)高通量 N-糖去除，簡化糖蛋白底物的下游分析。遼寧凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

生成攜帶 O-糖的糖肽，該酶可實現(xiàn) O-糖譜分析、O-糖肽圖譜和位點占用測定，以及使用 MS 分析的中級方法。1.可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點的 N 末端；2.穩(wěn)健的消化，增強(qiáng)復(fù)雜生物制藥的表征；3.高特異性 - 可靠的聚糖位點測定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶，可消化攜帶he心1 O-聚糖的蛋白質(zhì)，糖基化（he心 1）Ser 和 Thr 殘基的 N 端。OpeRATOR 來源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表達(dá)。大腸桿菌。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 42 kDa。SialEXO 來源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表達(dá)。大腸桿菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 標(biāo)簽，這些組分的分子量分別為 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的凍干酶。Genovis的OpeRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。江蘇凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱，可在3小時內(nèi)有效去除C1 抑制劑O-聚糖。

Genovis的SialEXO Immobilized是一種微離心柱，用于在室溫下孵育30分鐘后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。為了研究依那西普的潛在電荷變體，開發(fā)了一種使用SialEXO固定化柱對糖蛋白進(jìn)行去唾液酸化的一般工作流程。毛細(xì)管電泳通常用于在生物制劑的表征和質(zhì)量控制過程中確定電荷變體。使用SialEXO Imfixedized對糖蛋白進(jìn)行去唾液酸化，并使用ProteinSimple的Maurice在成像等電聚焦中進(jìn)行分析。綜合起來，該分析工作流程改進(jìn)了糖蛋白的分離并實現(xiàn)了電荷異構(gòu)體分析。依那西普，如果不首先去除唾液酸，將很難分析，但使用SialEXO固定化分離峰可以獲得。

使用Genovis的GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進(jìn)行 Tn 抗原表征：未成熟的截短O-聚糖導(dǎo)致了復(fù)雜生物制藥的異質(zhì)性，使其分析更具挑戰(zhàn)性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc殘基組成，通過糖苷鍵與絲氨酸或蘇氨酸連接，稱為Tn抗原。 現(xiàn)在，使用GalNAcEXO可以采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。在質(zhì)譜圖中可以觀察到重復(fù)峰的模式。其次，在與GalNAcEXO酶孵育后，剩余的GalNAc殘基被完全去除，留下一個峰。因此，該工作流程確認(rèn)了 O-糖基化生物制藥上存在 Tn 抗原，并允許定量he心 GalNAc 水平。這種工作流程的另一個好處是減少了剩余的異質(zhì)性，這有助于確認(rèn)蛋白質(zhì)的完整質(zhì)量，并揭示截短的片段。唾液酸的去除有助于研究蛋白質(zhì)中的潛在變體。SialEXO酶可在電荷異構(gòu)體分析之前去除所有唾液酸。

水解O-聚糖的酶不會從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR色譜柱只能在天然條件下使用的原因。 OmniGLYZOR 試劑盒 Microspin 以含有足夠材料的試劑盒形式提供，可使5 × 50-100 μg 或 10 × 50-100 μg 糖蛋白去糖酸化。N-和O-連接聚糖的快速高效；與LC-MS兼容；完全去除聚糖，改進(jìn)基礎(chǔ)蛋白的分析；固定形式可提高酶與底物的比率，從而實現(xiàn)快速去糖基化。 IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶分別購自Genovis(馬薩諸塞州，美國)。用于水解糖蛋白上N-聚糖的凍干酶。Genovis的PNGase F 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中，分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。GalactEXO混合物由兩種半乳糖苷酶組成，可高效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖酶。遼寧凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響：可使用Genovis的IgdE酶（FabALACTICA?）和PNGaseF酶。遼寧凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物。Genovis的SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶。 Genovis的SialEXO 2-3凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在500個單位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 與唾液酸酶混合物 SialEXO 相比，SialEXO 2-3 是一種 α2-3 特異性唾液酸酶，允許對 α2-3 連接的唾液酸進(jìn)行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小時內(nèi)實現(xiàn)。遼寧凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)