數(shù)字PCR（Digital PCR-dPCR）技術是一種新的核酸檢測和定量方法，與傳統(tǒng)定量PCR（qPCR）技術不同，數(shù)字PCR采用***定量的方式，不依賴于標準曲線和參照樣本，直接檢測目標序列的拷貝數(shù)。由于這種檢測方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性、精確性，dPCR迅速得到***的應用，這項技術在極微量核酸樣本檢測、復雜背景下稀有突變檢測和表達量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認可，而其在基因表達研究、microRNA研究、基因組拷貝數(shù)鑒定、**標志物稀有突變檢測、致病微生物鑒定、轉(zhuǎn)基因成分鑒定、NGS測序文庫精確定量和結果驗證等諸多方面具有的廣闊應用前景已經(jīng)受到越來越多的關注。微反應單元體積大小一致且穩(wěn)定是泊松分布準確計算的前提。廣東Digital PCR數(shù)字PCR方案
20 世紀末，Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digital PCR，dPCR) 的概念，通過將一個樣本分成幾十到幾萬份，分配到不同的反應單元，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子( DNA 模板) ，在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增，擴增結束后對各個反應單元的熒光信號進行統(tǒng)計學分析。與 qPCR 不同的是，數(shù)字PCR不依賴于CT值，因此不受擴增效率影響，擴增結束后通過直接計數(shù)或泊松分布公式來計算每個反應單元的平均濃度(含量)，能夠?qū)⒄`差控制在5%以內(nèi)，數(shù)字PCR 可以不需要對照標準樣品和標準曲線來實現(xiàn)***定量分析。廣東PCR數(shù)字PCR口碑推薦用數(shù)字化PCR是非常不錯的一個選擇，而且也非常便宜。
（5）在SARS-CoV-2核酸參考品制備中，數(shù)字PCR能夠?qū)怂徇M行精確的定量，能夠提高世界各國SARS-CoV-2核酸測量結果的一致性和準確性。（6）數(shù)字PCR能夠靈敏檢測與定量環(huán)境中的病毒RNA濃度，包括從不同環(huán)境中取樣的樣本（如公共區(qū)域、病房、醫(yī)院衛(wèi)生間、實驗室操作員手套、廢水等等）。（7）在實驗室樣品與臨床樣品病毒突變檢測中，數(shù)字PCR適合用于已知的SARS-CoV-2遺傳變異檢測，特別是對于一些低頻突變。（8）在抗病毒藥物的研發(fā)過程中，病毒載量的變化是評估藥物有效性的重要指標，借由數(shù)字PCR提供的***定量結果，能夠給出更具說服力和準確的評價結果。
數(shù)字PCR (Digital PCR) 技術作為新一代核酸檢測和***定量技術，目前在痕量核酸樣本檢測、復雜樣本稀有突變檢測和微小表達差異鑒定等方面表現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認可。NGS和CRISPR等分子生物學技術的發(fā)展，為數(shù)字PCR技術在microRNA研究、基因組拷貝數(shù)精細鑒定、致病微生物鑒定、轉(zhuǎn)基因成分鑒定及基因細胞***等諸多領域帶來了新的契機。良好的引物探針設計是數(shù)字PCR實驗獲得成功的關鍵因素之一。這正是眾多研究人員選擇LNA（鎖核酸技術）的原因——LNA修飾的引物和探針采用了成熟可靠的算法設計，獲得了全世界科學家的信賴。轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測。
數(shù)字PCR可以直接計算目標序列的拷貝數(shù)，因此無需依賴于對照樣品和標準曲線就可以進行精確的***定量檢測；此外，由于數(shù)字PCR在進行結果判讀時*判斷有/無兩種擴增狀態(tài)，因此也不需要檢測熒光信號與設定閾值線的交點，完全不依賴于Ct值的鑒定，因此數(shù)字PCR的反應受擴增效率的影響**降低，對PCR反應抑制物的耐受能力**提高；數(shù)字PCR實驗中標準反應體系分配的過程可以極大程度上降低與目標序列有競爭性作用的背景序列濃度，因此數(shù)字PCR技術也特別適合在復雜背景中檢測稀有突變。影響引物探針特異性的因素有很多種，譬如純化方式、設計方法以及引物探針的修飾技術等。廣東PCR數(shù)字PCR口碑推薦
一體化全自動的QIAcuity數(shù)字PCR系統(tǒng)很大程度解放了實驗人員的雙手，同時又避免由于手動操作而引入的誤差。廣東Digital PCR數(shù)字PCR方案
肺*的ALK融合基因檢測：ALK融合基因是NSCLC患者另外一個常規(guī)的伴隨診斷，可以指導ALK-TKI藥物的使用，目前已發(fā)現(xiàn)20種以上EML4-ALK的融合形式，多個報道證實它們中大部分能促進**生成。另外ALK還可能與TFG、KIF5B、KLC1、PTPN3、STRN等基因發(fā)生融合，因此ALK融合突變的診斷具有一定難度。目前臨床常規(guī)使用的檢測手段包括免疫組化（Immunohistochemistry，IHC），熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）以及RT-PCR等三種。這三種方法各具優(yōu)缺點：IHC相對簡單，價格低廉，但是容易受到主觀判斷的影響；FISH可以檢測各種融合類型，但是操作繁瑣，價格昂貴；RT-PCR方法的特異性較好，結果客觀，但是只能針對已知類型。近期有研究者采用數(shù)字PCR，利用ALK基因3’端的過表達來鑒定ALK的融合，該方法既具有PCR方法特異性好、結果客觀的優(yōu)勢，同時又不受融合類型的限制，可以檢測所有融合型，在與三種傳統(tǒng)方法的對比過程中展現(xiàn)出了更好的臨床符合率，未來有望成為一種新的常規(guī)檢測手段。廣東Digital PCR數(shù)字PCR方案