空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)流程：1、組織優(yōu)化由于不同物種、組織來源的樣本所需的比較好透化時間不盡相同，在正式開展空間轉(zhuǎn)錄組測序?qū)嶒?yàn)前，需要利用組織優(yōu)化kit進(jìn)行條件的摸索。組織優(yōu)化芯片上包含8個捕獲區(qū)域，每個區(qū)域均覆蓋了熒光標(biāo)記探針，可捕獲mRNA形成帶有熒光標(biāo)簽的cDNA，隨即可通過熒光成像結(jié)果判定比較好透化時間及組織優(yōu)化條件。2、空間轉(zhuǎn)錄組測序確定組織優(yōu)化條件后，即可進(jìn)行切片、H&E染色及成像、空間轉(zhuǎn)錄組文庫構(gòu)建及測序分析流程?？臻g轉(zhuǎn)錄組測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破。南京上海烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)
解決空間轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)分析中由于超大數(shù)據(jù)量、超高的質(zhì)控要求以及繁多分析需求而引起的分析困難，做到快速可定制化完成空間轉(zhuǎn)錄組分析；擁有行業(yè)先進(jìn)的3DHISTECH公司的PANNORAMIC系列的數(shù)字切片掃描儀，可以同時實(shí)現(xiàn)明場與熒光場下冷凍切片的快速掃描成像；Z-Stack多層聚焦掃描及Extended Focus 景深擴(kuò)展多層融合掃描模式，進(jìn)一步提升分辨率和清晰度，保證切片高分辨的數(shù)字圖像信息精細(xì)采集；能夠滿足針對分析結(jié)果中感興趣基因的RNA-FISH驗(yàn)證以及組織切片的免疫組化的高清成像，獲取表達(dá)與定位信息。青島烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組多組學(xué)測序烈冰智造空間轉(zhuǎn)錄組細(xì)胞捕獲，媲美國際主流的單細(xì)胞平臺。
為同時獲得空間表達(dá)和組織學(xué)背景信息，該方案首先將FFPE組織切片置于Visium基因芯片上進(jìn)行組織學(xué)染色和成像，然后利用切片下方Visium基因芯片上的探針進(jìn)行表達(dá)定量。由于FFPE樣本通常存在RNA高度降解的問題，針對FFPE樣本的Visium空間基因表達(dá)解決方案無法像新鮮凍存組織樣本一樣利用完整mRNA具有的poly（dA）序列進(jìn)行mRNA捕獲。該方案采用針對編碼基因的成對RNA模板連接探針（RTL）與mRNA雜交。左側(cè)探針（LHS）具有部分Read 2序列，右側(cè)探針（RHS）具有合成的poly(A)序列。左右探針與mRNA雜交后彼此連接，而mRNA被RNase降解。組織透化后，被連接的成對探針與芯片上包含空間Barcode、UMI和poly(dT）序列的引物序列捕獲，并且空間Barcode和UMI序列被延伸到成對探針序列上。攜帶空間Barcode的探針序列用于進(jìn)行測序文庫構(gòu)建和測序。測序序列上的空間Barcode用于將測序序列定位到組織切片圖像上，UMI用于基因表達(dá)定量。
烈冰生物生信分析團(tuán)隊(duì)緊追國際前沿、整合添加多項(xiàng)國際期刊認(rèn)可的空轉(zhuǎn)分析工具，構(gòu)建一套完整的數(shù)據(jù)分析流程；精心研發(fā)空轉(zhuǎn)結(jié)果瀏覽器，可同步展示空間轉(zhuǎn)錄組與單細(xì)胞測序分析結(jié)果，詳細(xì)深入地解析空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。完成從Rawdata（原始數(shù)據(jù)）到Spot-Gene的具有定位信息的表達(dá)矩陣的過程后，就進(jìn)入了空轉(zhuǎn)的第二步，去進(jìn)行Spot的Cluster的過程，熟悉單細(xì)胞測序的研究者知道，Cluster在單細(xì)胞測序中往往表示為細(xì)胞的類型，也就是說能聚在一起采用算法分為一個群體細(xì)胞是一個Celltype（當(dāng)然分情況也會有不同）。而在空轉(zhuǎn)中，也正是由于前面提到了細(xì)胞的非單一性，導(dǎo)致了這里的分群并不是單純的同一細(xì)胞類型，而應(yīng)該認(rèn)為是具有相同細(xì)胞組成的點(diǎn)陣區(qū)域，或者說是近似的組織結(jié)構(gòu)區(qū)域?？臻g轉(zhuǎn)錄組測序機(jī)構(gòu)，請認(rèn)準(zhǔn)上海烈冰生物科技。
空間轉(zhuǎn)錄組研究的的必耍性：研究單細(xì)胞是想要探究細(xì)胞間的異質(zhì)性，但是常規(guī)的單細(xì)胞是將細(xì)胞解離成單細(xì)胞懸液，然后利用單細(xì)胞分離技術(shù)（微孔，微板，液滴）等方法實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞建庫，這里比較大的問題是是細(xì)胞失去了原本在組織的空間信息。然而這個空間信息在實(shí)際研究中是非常重要。特別是在研究細(xì)胞命運(yùn)機(jī)制及細(xì)胞譜系發(fā)生空間位置的信息顯得尤為重要，因此發(fā)展空問轉(zhuǎn)錄組技術(shù)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的位置信息的保留，對研究此類細(xì)胞狀態(tài)尤為必要。烈冰專精空間轉(zhuǎn)錄組測序領(lǐng)域。廣州烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析可視化
截至2021年10月，烈冰助力發(fā)表空間轉(zhuǎn)錄組測序文章近20篇。南京上海烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)
空間轉(zhuǎn)錄組測序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和玻片有效區(qū)域的利用率、貼片的質(zhì)量和透化時間息息相關(guān)。貼片質(zhì)量不良會影響總的有效spot數(shù)等；而透化不合理會導(dǎo)致spot的reads數(shù)、基因中位數(shù)等參數(shù)。而在特異性基因表達(dá)方面，我們也可以統(tǒng)計(jì)空間轉(zhuǎn)錄組群體的特異性基因表達(dá)即Markergene，將他們在組織切片以及空轉(zhuǎn)上進(jìn)行著色。我們也可以對于任意一個已知的基因或者數(shù)據(jù)庫中的一些細(xì)胞Marker，然后將其在基因表達(dá)在空間轉(zhuǎn)錄組的切片以及HE染色上展示自己的基因表達(dá)進(jìn)而了解，群體中的可能的細(xì)胞組成關(guān)系。南京上海烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組測序服務(wù)
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