武漢10X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析可視化

10X Genomics單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序是利用單細(xì)胞水平上的高通量測(cè)序分析基因表達(dá)譜的技術(shù)，也是目前國內(nèi)和國際上公認(rèn)的單細(xì)胞測(cè)序大規(guī)模實(shí)驗(yàn)平臺(tái)技術(shù)，該平臺(tái)基于動(dòng)態(tài)微流控原理，突破傳統(tǒng)高通量測(cè)序的局限性，組織解離后，單個(gè)樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個(gè)細(xì)胞， 基于每個(gè)細(xì)胞分別建庫測(cè)序，獲得單個(gè)細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài)，并鑒定細(xì)胞的類型，可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較，反映細(xì)胞間的異質(zhì)性，提供足夠靈活的定制測(cè)定法以滿足多種實(shí)驗(yàn)需要，并有效縮短實(shí)驗(yàn)是時(shí)間和降低測(cè)序成本。助力探索生命時(shí)空多維度的動(dòng)態(tài)變化的生物學(xué)信息；助力醫(yī)療健康時(shí)代！武漢10X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析可視化

關(guān)于單細(xì)胞測(cè)序?qū)嶒?yàn)樣本制備，這與流式細(xì)胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致，也就是通過酶促或機(jī)械消化、細(xì)胞分選或其他細(xì)胞分離技術(shù)從整個(gè)樣本中制備生成活的單細(xì)胞懸液。隨后是細(xì)胞計(jì)數(shù)和質(zhì)量控制步驟，以確保您的樣本有適當(dāng)濃度的活細(xì)胞，并且不含細(xì)胞團(tuán)塊和死細(xì)胞碎片。如有必要，您還可以使用抗體對(duì)樣本進(jìn)行染色，標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細(xì)胞類型。解離樣本時(shí)采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)而定。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細(xì)胞大小，以及是否需要提取出細(xì)胞核進(jìn)行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何，所有樣本類型都遵循同一個(gè)基本原則，那就是生成高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液。成都10X單細(xì)胞測(cè)序多組學(xué)測(cè)序從樣本處理到終端數(shù)據(jù)分析，只要您需要，烈冰提供全流程的無憂服務(wù)。

烈冰生信團(tuán)隊(duì)傾情研發(fā)的NovelBrain®生信大數(shù)據(jù)分析平臺(tái)，針對(duì)龐大的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)，能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞類型鑒定的快、精、準(zhǔn)：一鍵導(dǎo)入genelist構(gòu)建個(gè)性化基因列表；輕松一點(diǎn)即可展示Marker基因的Featureplot；任意修改Cluster的顏色和名稱助力高效鑒定細(xì)胞類型；一鍵獲得t-SNE圖、Heatmap和Violin圖：輕松獲得并下載基因表達(dá)的t-SNE圖、Heatmap、Violin圖，還可以通過調(diào)節(jié)寬、高和系數(shù)比例來調(diào)節(jié)美觀。平臺(tái)上線300+task自主分析工具、50+pipeline工作流模板，幫助烈冰生信分析團(tuán)隊(duì)和自主分析用戶實(shí)現(xiàn)分析工具和模板的快速調(diào)用和一站式全流程自動(dòng)化分析，節(jié)省工作時(shí)間并提升整體工作效率

細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力評(píng)估在評(píng)估樣本質(zhì)量時(shí)，需要在細(xì)胞清洗和過濾之后測(cè)定細(xì)胞活力，這一點(diǎn)至關(guān)重要。測(cè)定細(xì)胞活力有許多種方法，烈冰多年單細(xì)胞測(cè)序經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)臺(tái)盼藍(lán)法在鑒定活細(xì)胞與死細(xì)胞的比例時(shí)效果很好。細(xì)胞計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性以及目標(biāo)回收量和實(shí)際回收量之間的一致性，取決于我們了解樣本中有多少個(gè)細(xì)胞。一旦過濾和清洗完成，可采用細(xì)胞計(jì)數(shù)設(shè)備（如血球計(jì)數(shù)器或自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀）進(jìn)行定量。這些設(shè)備不但能提供準(zhǔn)確的細(xì)胞計(jì)數(shù)，還能計(jì)算出向微流體芯片上樣適量細(xì)胞所需的細(xì)胞懸液體積。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次突破性的改變，一次對(duì)幾十萬到幾百萬條核酸序列進(jìn)行測(cè)定。

10XGenomics是一種基于drop的微流控技術(shù)，液體在配套芯片中的微管道中流動(dòng)，因此細(xì)胞直徑會(huì)受到芯片中微管道直徑的限制，微流體通道的直徑約為50~60um，因此捕獲細(xì)胞的直徑不能超過40um。當(dāng)細(xì)胞直徑過大時(shí)，容易出現(xiàn)管道堵塞，造成GEM生成失敗，對(duì)于神經(jīng)科學(xué)研究和心血管疾病研究的老師而言，準(zhǔn)備采用單細(xì)胞技術(shù)用于課題研究的時(shí)候，往往會(huì)遇到一個(gè)尷尬的問題，就是目標(biāo)細(xì)胞，例如神經(jīng)元細(xì)胞、成熟心肌細(xì)胞由于體積過大，不適用于10X單細(xì)胞技術(shù)。其中神經(jīng)元細(xì)胞的直徑很大，直接超過了芯片中管道的直徑，雖然心肌細(xì)胞直徑低于50um，但是成熟心肌細(xì)胞的長(zhǎng)度很長(zhǎng)，有可能堵塞通道造成實(shí)驗(yàn)失敗，這也是為什么現(xiàn)在很多已發(fā)表的心臟單細(xì)胞文章，主要研究方向是心臟發(fā)育的原因了，主要還是因?yàn)槲窗l(fā)育成熟的心肌細(xì)胞比較小，不會(huì)出現(xiàn)堵塞管道的風(fēng)險(xiǎn)。因此可以考慮組織解離后過40um濾網(wǎng)，過濾掉大細(xì)胞，避免出現(xiàn)管道堵塞、實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。此種方案的缺點(diǎn)是大細(xì)胞被過濾掉，丟失相關(guān)細(xì)胞數(shù)據(jù)；另外組織解離獲得高質(zhì)量細(xì)胞懸液以后，繼續(xù)做細(xì)胞裂解抽細(xì)胞核，開展細(xì)胞核測(cè)序。具體可訪問烈冰官網(wǎng)給我們留言，烈小冰將安排專業(yè)技術(shù)為您詳細(xì)解答。過去的十年，我們是知識(shí)的承載者；現(xiàn)在，我們?cè)谂?gòu)建醫(yī)學(xué)的大數(shù)據(jù)時(shí)代；未來我們將重新定義知識(shí)形態(tài)！武漢10X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析可視化

烈冰測(cè)序服務(wù)已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表。武漢10X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析可視化

烈冰生物搭建近10臺(tái)10XGemomics平臺(tái)，目前為全國范圍內(nèi)的高校、醫(yī)院和研究所等單位的科研學(xué)者提供鼓舞，10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng)，每個(gè)通道上限可捕獲20000細(xì)胞，16通道一次可檢測(cè)細(xì)胞范圍為百萬級(jí)別的細(xì)胞水平。此外，單個(gè)細(xì)胞捕獲效率高達(dá)65%，可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型，利于稀有樣本或小細(xì)胞量類型樣本研究；細(xì)胞可適性高，對(duì)細(xì)胞大?。ㄖ睆匠^40um細(xì)胞需要制備成細(xì)胞核）及類型無限制。細(xì)胞捕獲周期較短，能夠?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)分離，無需人工操作，1天內(nèi)可完成從細(xì)胞懸液到cDNA文庫構(gòu)建的所有的測(cè)序準(zhǔn)備工作。武漢10X單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)分析可視化

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