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當(dāng)下,單細(xì)胞測序已經(jīng)廣泛應(yīng)用于多種疾病發(fā)展過程中的關(guān)鍵過程和事件,如疾病從輕癥病變向惡性的轉(zhuǎn)化、惡性向轉(zhuǎn)移病變的發(fā)展,以及疾病對(duì)多種藥物的反應(yīng)等等。單細(xì)胞測序技術(shù)作為一個(gè)需要將組織解離成為單細(xì)胞懸液,或者是采用細(xì)胞核捕獲的策略捕獲單細(xì)胞核,進(jìn)而對(duì)于每一個(gè)單細(xì)胞或者細(xì)胞核進(jìn)行測序得到結(jié)果的技術(shù),其空間定位信息是丟失的。這就衍生出了一個(gè)問題就是如果單細(xì)胞A與B并不出現(xiàn)在一個(gè)組織區(qū)域中他們會(huì)互相影響或者轉(zhuǎn)化么?免疫研究中,兩個(gè)具有非常強(qiáng)的PDL1-PD1的配對(duì)關(guān)系的細(xì)胞在組織切片上風(fēng)馬牛不相及,這樣PDL1-PD1的關(guān)系會(huì)生效么?單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)可在同一細(xì)胞中捕獲分析兩種以上的組學(xué)信息,包括轉(zhuǎn)錄組、基因組、表觀基因組、蛋白組等。蘇州高通量測序單細(xì)胞多組學(xué)平臺(tái)
相對(duì)于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問題,BD和10X這兩個(gè)平臺(tái)普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1-6K不等的測序細(xì)胞量,這個(gè)量級(jí)的測序細(xì)胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的SingleCell群體類型。因此,這兩種技術(shù)對(duì)于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上,無論是從細(xì)胞數(shù)量上來說還是表達(dá)檢測可靠性來說,都會(huì)更實(shí)用。同時(shí)依托RandomCellLabel技術(shù),使得其對(duì)于NovaSeq、HiSeqXTen、Hiseq4000等設(shè)備存在的Indexhooping現(xiàn)象,相對(duì)于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說,影響幾乎可以忽略不計(jì)(10XGenomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測試結(jié)果,顯示無影響。濟(jì)南single cell RNA單細(xì)胞多組學(xué)商業(yè)化服務(wù)多組學(xué)技術(shù)結(jié)合了不同的生物數(shù)據(jù)集,如基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)。
單細(xì)胞測序技術(shù)的不斷發(fā)展解決了以往群體細(xì)胞組學(xué)分析面臨的兩個(gè)瓶頸:一是大量細(xì)胞的混合測序會(huì)掩蓋細(xì)胞間的異質(zhì)性;二是傳統(tǒng)的測序技術(shù)需要大量的細(xì)胞作為起始,細(xì)胞數(shù)目稀有的樣品則難以研究.利用單細(xì)胞測序方法不僅能夠揭示組織中的細(xì)胞類型和稀有亞群、細(xì)胞狀態(tài)和命運(yùn)的變化,還可以研究細(xì)胞數(shù)稀有的珍貴樣品,從而幫助人們理解發(fā)育、衰老和疾病發(fā)展的機(jī)制。隨著單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組、基因組、表觀遺傳組、蛋白組等各組學(xué)測序技術(shù)的快速發(fā)展,研究者開始將它們相互組合,使得單個(gè)細(xì)胞或同類細(xì)胞的多個(gè)組學(xué)數(shù)據(jù)能夠聯(lián)合分析.因此,利用單細(xì)胞多組學(xué)技術(shù)能夠更有效地研究細(xì)胞在特定時(shí)空狀態(tài)下各組學(xué)間的復(fù)雜聯(lián)系,從而揭示細(xì)胞狀態(tài)和命運(yùn)調(diào)控的分子機(jī)制。
SingleCellSequencing技術(shù),即利用優(yōu)化后的高通量測序技術(shù)(NGS,NextGenerationSequencing)分析每一個(gè)單個(gè)細(xì)胞的序列信息,從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問題來了,如何獲得單個(gè)細(xì)胞?如果無法獲得單個(gè)細(xì)胞這一切都是不成立的;如何獲得大批量的單個(gè)細(xì)胞?單個(gè)組織細(xì)胞群體通常在百萬級(jí)別以上,如果被檢測的測序細(xì)胞數(shù)量過小精確度不足;如何低成本地獲得大批量單個(gè)細(xì)胞?單細(xì)胞測序成本非常高,尤其是需要測2000~3000個(gè)以上的細(xì)胞的時(shí)候,如果單個(gè)細(xì)胞的分選成本也很高,技術(shù)根本無法普及。所以,正因?yàn)檫@些問題的存在使得高通量測序在單個(gè)細(xì)胞測序應(yīng)用中的普及度一直不足,直到幾個(gè)突破性技術(shù)的誕生。單細(xì)胞多組學(xué)的研究對(duì)生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn),細(xì)胞分化發(fā)育研究等均有重要意義。
針對(duì)單細(xì)胞測序的細(xì)胞數(shù)量判斷環(huán)節(jié):主要是對(duì)細(xì)胞數(shù)量、基因表達(dá)量、測序質(zhì)量進(jìn)行整體描述。過濾標(biāo)準(zhǔn):由于細(xì)胞破碎后游離RNA會(huì)釋放到環(huán)境或孔中,并且測序中也會(huì)存在一些死細(xì)胞,導(dǎo)致數(shù)據(jù)存在background值。因此,我們需要設(shè)定一定的標(biāo)準(zhǔn)來過濾掉假細(xì)胞或死細(xì)胞。以10×Genomics為例,細(xì)胞數(shù)量判斷主要通過分析UMICounts-Barcode曲線斜率拐點(diǎn),當(dāng)存在多個(gè)斜率拐點(diǎn)的時(shí)候,結(jié)合預(yù)期UMI=500時(shí)的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行過濾。當(dāng)斜率拐點(diǎn)低于UMI=500的時(shí)候,選擇UMI=500作為細(xì)胞的判斷的標(biāo)準(zhǔn);否則,選擇和預(yù)期細(xì)胞數(shù)量非常接近的拐點(diǎn)作為細(xì)胞判斷的位置。這樣我們能夠有效獲得真實(shí)的并且在基因數(shù)量上可以分析的數(shù)據(jù)。在單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組領(lǐng)域,將轉(zhuǎn)錄組與蛋白質(zhì)結(jié)合的代表性例子只有單細(xì) 胞RNA測序方法。蘇州single cell 單細(xì)胞多組學(xué)測序服務(wù)公司
單細(xì)胞測序手段有力地解決了組織內(nèi)高度異質(zhì)性對(duì)于低豐度信號(hào)影響的問題。蘇州高通量測序單細(xì)胞多組學(xué)平臺(tái)
烈冰與國內(nèi)高校、研究所、醫(yī)院和藥企單位開展深度合作,服務(wù)于600+臨床與研究機(jī)構(gòu),1000+客戶和5000+重要科研項(xiàng)目,助力并聯(lián)合發(fā)表300+篇CNS等國際學(xué)術(shù)期刊(不完全統(tǒng)計(jì)),在單細(xì)胞領(lǐng)域,烈冰助力用戶發(fā)表單細(xì)胞文獻(xiàn)30+篇,總IF>300+,IF>10+以上文章占比65%以上,包含Immunity、NatureCellBiology、NaturePlants、AdvancedScience等生物領(lǐng)域國際主流學(xué)術(shù)期刊,已發(fā)表文章研究領(lǐng)域涵蓋包括COVID-19研究、疾病發(fā)生轉(zhuǎn)移機(jī)制,免疫研究、腦神經(jīng)、白血病、胚胎發(fā)育、糖尿病、退行性疾病和植物領(lǐng)域研究等。蘇州高通量測序單細(xì)胞多組學(xué)平臺(tái)
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