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單細(xì)胞RNA-seq、RNA-seq和逆轉(zhuǎn)錄qPCR(RT-qPCR)都采用一個共同過程,即分離RNA并將其轉(zhuǎn)化為cDNA進(jìn)行分析。不過,每種分析在開展方式和獲得的數(shù)據(jù)上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先從大量細(xì)胞中分離RNA,然后將其轉(zhuǎn)化為cDNA。RNA-seq是使用cDNA來構(gòu)建新一代測序文庫,從而測定整個轉(zhuǎn)錄組的基因表達(dá)。RT-qPCR則是從cDNA中擴(kuò)增特定靶點,并通過熒光測定表達(dá)水平。RT-qPCR限于已知靶點,而RNA-seq可實現(xiàn)無偏倚的全轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)分析。然而,這兩者只能提供細(xì)胞群體內(nèi)基因表達(dá)的平均情況。單細(xì)胞RNA-seq則在分離RNA之前將單細(xì)胞分離到微孔或單個微反應(yīng)容器中。然后用細(xì)胞特異性的條形碼標(biāo)記RNA,確保來自每個細(xì)胞的cDNA可以追溯到起源細(xì)胞。與RNA-seq相似,帶有條形碼的cDNA也被用于構(gòu)建新一代測序文庫,從而能夠?qū)γ總€細(xì)胞的整個轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行基因表達(dá)測定。單細(xì)胞測序平臺,烈冰提供高性價比服務(wù)方案。吉林烈冰生物單細(xì)胞測序
烈冰生物搭建近10臺10XGemomics平臺,目前為全國范圍內(nèi)的高校、醫(yī)院和研究所等單位的科研學(xué)者提供鼓舞,10X微流體“雙十字”交叉系統(tǒng)為8或16通道系統(tǒng),每個通道上限可捕獲20000細(xì)胞,16通道一次可檢測細(xì)胞范圍為百萬級別的細(xì)胞水平。此外,單個細(xì)胞捕獲效率高達(dá)65%,可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型,利于稀有樣本或小細(xì)胞量類型樣本研究;細(xì)胞可適性高,對細(xì)胞大?。ㄖ睆匠^40um細(xì)胞需要制備成細(xì)胞核)及類型無限制。細(xì)胞捕獲周期較短,能夠?qū)崿F(xiàn)自動分離,無需人工操作,1天內(nèi)可完成從細(xì)胞懸液到cDNA文庫構(gòu)建的所有的測序準(zhǔn)備工作。長春單細(xì)胞測序服務(wù)高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次顛覆性的改變,一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進(jìn)行測定。
基于10XNextGEM技術(shù),單細(xì)胞測序一次實驗可以同時檢測近萬個細(xì)胞,可在一個樣本中同時獲3端mRNA表達(dá)譜、如需和免疫組庫(TCR和BCR)的數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合時,即某些研究還需結(jié)合基因的表達(dá)譜和V(D)J數(shù)據(jù)進(jìn)行復(fù)雜組織樣本的是影響免疫應(yīng)答分析,監(jiān)測免疫療法的效果,研究疾病發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制,可進(jìn)行單細(xì)胞免疫組庫測序:烈冰單細(xì)胞免疫組庫平臺具備:1000+項目經(jīng)驗,一次實驗可同時獲取1000-20000個細(xì)胞的文庫構(gòu)建,獲得轉(zhuǎn)錄組和免疫組數(shù)據(jù);具備完善的免疫組庫測序和實驗質(zhì)控流程,獲取V(D)J全長序列的配對信息;豐富的免疫組庫測序和數(shù)據(jù)分析經(jīng)驗,實現(xiàn)專屬個性化數(shù)據(jù)分析服務(wù),搭配單細(xì)胞分析云平臺,一鍵導(dǎo)出交互性的動態(tài)結(jié)果報告。
對于單細(xì)胞測序而言,常常需要先構(gòu)建細(xì)胞圖譜,在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項分析,并且數(shù)據(jù)分析時以細(xì)胞聚類(cellcluster)為討論對象,而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象,因此單細(xì)胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴(yán)格,但是單細(xì)胞測序,特別是目的為圖譜研究時,需要通過提高樣本復(fù)雜度(增加樣本數(shù)),盡可能的構(gòu)建某一疾病類型、群體細(xì)胞圖譜信息。因此,單細(xì)胞測序?qū)嶒炘O(shè)計時首先需要保證生物學(xué)重復(fù),不同樣本來源的樣本建議單獨進(jìn)行細(xì)胞解離和捕獲、建庫、測序,以保證捕獲到足夠的細(xì)胞數(shù),單個樣本分別捕獲細(xì)胞時,后續(xù)分析除了整體分析以外,還可以做單樣本分析,保證分析的完備準(zhǔn)確性。烈冰測序服務(wù)已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表。
烈冰生信團(tuán)隊傾情研發(fā)的NovelBrain®生信大數(shù)據(jù)分析平臺,針對龐大的單細(xì)胞測序數(shù)據(jù),能夠?qū)崿F(xiàn)細(xì)胞類型鑒定的快、精、準(zhǔn):一鍵導(dǎo)入genelist構(gòu)建個性化基因列表;輕松一點即可展示Marker基因的Featureplot;任意修改Cluster的顏色和名稱助力高效鑒定細(xì)胞類型;一鍵獲得t-SNE圖、Heatmap和Violin圖:輕松獲得并下載基因表達(dá)的t-SNE圖、Heatmap、Violin圖,還可以通過調(diào)節(jié)寬、高和系數(shù)比例來調(diào)節(jié)美觀。平臺上線300+task自主分析工具、50+pipeline工作流模板,幫助烈冰生信分析團(tuán)隊和自主分析用戶實現(xiàn)分析工具和模板的快速調(diào)用和一站式全流程自動化分析,節(jié)省工作時間并提升整體工作效率單細(xì)胞科聯(lián)合空間轉(zhuǎn)錄組,展示組織切片中不同區(qū)域的基因表達(dá)情況,揭示精細(xì)病理區(qū)域中“喚醒”的信號通路。南通烈冰生物單細(xì)胞測序
全線搭建10x Genomics單細(xì)胞測序平臺。吉林烈冰生物單細(xì)胞測序
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序是在單細(xì)胞水平上高通量測序分析基因表達(dá)譜的技術(shù),突破傳統(tǒng)高通量測序的局限性,組織解離后,單個樣本一次上機(jī)能捕獲500-20000個細(xì)胞,基于每個細(xì)胞分別建庫測序,獲得單個細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)狀態(tài),并鑒定細(xì)胞的類型,可以在不同樣本間從細(xì)胞類型的組成和豐度角度進(jìn)行比較,反映細(xì)胞間的異質(zhì)性。而2021年橫空出世的10XGenomicsChromiumX平臺實現(xiàn)了單塊chip上的百萬級別通量的細(xì)胞捕獲,系統(tǒng)實現(xiàn)16個通道同時運行,每個通道可捕獲2000-20000個細(xì)胞(不混樣),并支持原ChromiumController體統(tǒng)外的多種細(xì)胞捕獲百萬級別通量實驗,可準(zhǔn)確鑒別稀有細(xì)胞類型和適配大規(guī)模單細(xì)胞研究。吉林烈冰生物單細(xì)胞測序
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