西安烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組平臺(tái)

10xGenomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫(kù)構(gòu)建的每張載玻片上有四個(gè)捕獲區(qū)域，每個(gè)捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm，包含5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)（barcodedspots），每個(gè)點(diǎn)的直徑為55μm，點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100μm，并且每個(gè)點(diǎn)都有一個(gè)barcode序列。組織切片的細(xì)胞中會(huì)釋放出mRNA，遷移到每個(gè)spot的mRNA會(huì)被標(biāo)記上相應(yīng)的barcode序列，然后進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建并進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以確定哪些數(shù)據(jù)來(lái)自哪個(gè)位置，從而實(shí)現(xiàn)空間基因表達(dá)的可視化。烈冰對(duì)于一個(gè)細(xì)胞群體中的每個(gè)細(xì)胞單獨(dú)進(jìn)行建庫(kù)測(cè)序分析。西安烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組平臺(tái)

高通量測(cè)序技術(shù)（High-throughputsequencing）又稱“下一代”測(cè)序技術(shù)（“Next-generation”sequencing），以能一次并行對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定和一般讀長(zhǎng)較短等為標(biāo)志。高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次顛覆性的改變，一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定，因此在有些文獻(xiàn)中稱其為下一代測(cè)序技術(shù)(nextgenerationsequencing)足見(jiàn)其劃時(shí)代的改變，同時(shí)高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為可能，所以又被稱為深度測(cè)序(deepsequencing)。而烈冰科技具有專業(yè)生物背景和十二年科研服務(wù)經(jīng)驗(yàn)，已助力Nature，immunity等在內(nèi)的300+篇CNS文章發(fā)表。杭州BD Rhapsody空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序價(jià)格烈冰測(cè)序服務(wù)已助力300余篇國(guó)際主流期刊研究文章發(fā)表。

冰凍切片的空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序在RNA捕獲、文庫(kù)構(gòu)建方面，需要將組織切片貼合在帶有mRNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上，通過(guò)甲醛固定、H&E染色得到組織切片的形態(tài)結(jié)構(gòu)。再進(jìn)行透化處理，使細(xì)胞中的mRNA釋放，并結(jié)合到芯片相鄰的捕獲探針上。將捕獲的mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并構(gòu)建測(cè)序文庫(kù)進(jìn)行上機(jī)測(cè)序，從而獲取基因表達(dá)信息?？傮w來(lái)說(shuō)，空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)驗(yàn)流程包括：組織凍存-OCT包埋-冷凍切片-固定染色-組織透化-cDNA合成及建庫(kù)-上機(jī)測(cè)序，而需要客戶進(jìn)行樣本準(zhǔn)備的步驟相對(duì)簡(jiǎn)單：組織凍存與OCT包埋。

生命科學(xué)研究的目的之一就是為了解決細(xì)胞和組織以及該組織如何影響功能這一難題。測(cè)序技術(shù)可提供特定條件下某些 組織中基因的表達(dá)信息，不僅可以推斷出相應(yīng)未知基因的功能，揭示特定調(diào)節(jié)基因的作用機(jī)制，而且可以辨別細(xì)胞的類型和異質(zhì)性，為疾病診斷提供理論依據(jù)。但由于研究的深入或具體研究方向和內(nèi)容的不同，傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)顯然不能夠滿足科研工作者們強(qiáng)烈的好奇心，更加直觀地反映組織中基因的表達(dá)情況，隨即單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（Single-cell RNA-sequencing，scRNA-seq）、空間轉(zhuǎn)錄組（Spatial transcriptomics，ST）測(cè)序等一系列技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。強(qiáng)勢(shì)發(fā)文！烈冰空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序助力揭示愈傷組織能再生的機(jī)制。

在發(fā)育過(guò)程或疾病發(fā)生過(guò)程中，組織內(nèi)部的不同細(xì)胞經(jīng)歷了復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，因此，組織內(nèi)部的異質(zhì)性研究是目前揭示重要生物學(xué)研究的一個(gè)重要研究手段。組織內(nèi)部的異質(zhì)性包括細(xì)胞類型的異質(zhì)性和空間位置的異質(zhì)性兩個(gè)層面，細(xì)胞類型異質(zhì)性可由單細(xì)胞測(cè)序來(lái)完美呈現(xiàn)，而空間位置的異質(zhì)性，則需要可高通量地檢測(cè)全轉(zhuǎn)錄組空間信息的新型研究方法來(lái)解決。烈冰生物真正實(shí)現(xiàn)空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的全程把控，做到從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、空間信息標(biāo)記、建庫(kù)測(cè)序、定制化分析的全流程一站式服務(wù)，助力高分文章發(fā)表。烈冰測(cè)序數(shù)據(jù)分析平臺(tái)，不依賴已有物種信息，可研究非模式物種，針對(duì)不同平臺(tái)的數(shù)據(jù)，制定多套流程；南京BD Rhapsody空間轉(zhuǎn)錄組服務(wù)機(jī)構(gòu)

空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤。西安烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組平臺(tái)

空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的數(shù)據(jù)分析基本分為三個(gè)階段：1.數(shù)據(jù)的預(yù)處理部分；2.Spot點(diǎn)陣的分群與定義；3.Spot分群的功能與生物學(xué)價(jià)值。每一個(gè)部分都不可或缺，其結(jié)果都對(duì)后續(xù)的分析結(jié)果有重要影響。由于空間轉(zhuǎn)錄組的序列結(jié)構(gòu)與單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的左端序列結(jié)構(gòu)是非常接近的，都是Cellbarcode/SpotBarcode+UMI+捕獲區(qū)域這樣的設(shè)計(jì)。右端普遍為捕獲的RNA序列。因此采用單細(xì)胞的原始數(shù)據(jù)過(guò)濾策略即可，左端可以考慮切下捕獲區(qū)域前的序列區(qū)域作為后續(xù)分析用的序列以減少分析負(fù)荷。隨后，采用10X官方的Spatialranger的策略進(jìn)行后續(xù)分析，解析出位于空間位置中的有效的Spot表達(dá)矩陣。西安烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組平臺(tái)

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