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針對單細胞測序的細胞上樣數,為什么不建議捕獲到的細胞數量越高越好?一味地追求高數量的細胞捕獲可能會存在一些問題。例如在上機細胞懸液濃度固定時,如果目標細胞捕獲數增加到8000甚至10000,上樣細胞懸液體積勢必增加,在細胞懸液質量不是很理想(細胞活性<90%、碎片率>5%、結團率均>5%)的情況下,引入的背景信號會增加,分析結果不理想的直接體現包括:cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低。當cell和non-cell無法有效區(qū)分時,會使得數據出現假陽性和假陰性結果!當目標細胞捕獲數很大時,多細胞率會增加,數據分析時,此部分“cell”表現為基因檢測數和UMI檢測數是正常cell的N倍(N是一個GEM包裹的細胞數),導致所有細胞的統(tǒng)計數據(單個細胞基因檢測中位數、單個細胞UMI檢測中位數)虛高。此部分“cell”雖然可以通過設置數據分析閾值進行過濾,但是容易會有此類數據的殘留和正常高基因檢測細胞的人為去除!助力探索生命時空多維度的動態(tài)變化的生物學信息;助力醫(yī)療健康時代!杭州single cell RNA單細胞平臺
針對單細胞測序數據分析時的reads數、基因表達量及細胞數量判定過程中:以捕獲5000個細胞、100G的測序量為標準,每個細胞的reads數大約在50k左右;每個細胞的基因中位數取決于樣本的細胞類型,例如成熟的B,T,粒細胞數量較多的組織中,由于該類型細胞表達的基因數普遍較少,導致基因中位數下降。而某些疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細胞等,他們的基因表達數較高,甚至可以超過1W,這就導致該類樣本基因中位數非常高。因此,我們對細胞數量以及基因中位數確認時,需要考察實際組織的細胞組成。北京single cell 單細胞測序烈冰測序服務已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表。
單細胞測序實驗再樣本細胞上機分選簽,需要對細胞數量、細胞活性進準判斷,這對Single Cell分選標記、建庫、下機數據的質量都具有著決定性的作用。如若細胞計數偏高,將會影響建庫的成功率;計數偏低,則會提高雙細胞的比例;而細胞活率過低,就會使測序數據的利用率大打折扣,因此把好單細胞懸液質量這一關尤為重要。而在鋪板過程中,由于不同操作人員手法具有不可避免的差異,不同的液體流速將直接影響單細胞的入孔效果。因此烈冰生物BD Rhapsody單細胞分選平臺配套了專門定制的電動移液器,其具有Prime Treat、Cell Load、Bead Load、Wash、Lysis、Retrieval多種操作模式,來對應各種不同的操作。通過已經設定的程序來控制液體的流速,大幅度降低人為操作習慣帶來的差異,保證實驗操作的一致性。
烈冰生信團隊傾情研發(fā)的NovelBrain?生信大數據分析平臺,針對龐大的單細胞測序數據,能夠實現細胞類型鑒定的快、精、準:一鍵導入gene list構建個性化基因列表;輕松一點即可展示Marker基因的Feature plot;任意修改Cluster的顏色和名稱助力高效鑒定細胞類型;一鍵獲得t-SNE圖、Heatmap和Violin圖:輕松獲得并下載基因表達的t-SNE圖、Heatmap、Violin圖,還可以通過調節(jié)寬、高和系數比例來調節(jié)美觀。平臺上線300+task自主分析工具、50+pipeline工作流模板,幫助烈冰生信分析團隊和自主分析用戶實現分析工具和模板的快速調用和一站式全流程自動化分析,節(jié)省工作時間并提升整體工作效率。烈冰生物為您提供一站式全流程高通量BD 單細胞測序服務。
什么時候要用到去死細胞的操作呢?跟進烈冰生物多年單細胞測序服務經驗來看,當細胞懸液進行質量和活性檢測后,考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作。而太低活性的懸液(小于30%),懸液中細胞大量死亡,可能已經丟失了原組織內的細胞比例和狀態(tài),失真嚴重,建議重新收集樣本進行新的實驗,保證數據的高質量和實驗結果的準確性。但需要注意到,去除死細胞的操作會損失一定的細胞數量,因此希望您在提供樣本時,盡可能提供足量的細胞,以備實驗過程中可能存在的細胞死亡的問題,BD Rhapsody單細胞捕獲平臺對樣本起始細胞量的要求較低,一般提供10萬個細胞以上均可滿足需求,特殊樣本可詳細咨詢烈冰生物。個性化制定測序項目方面,滿足從檢測基因到蛋白的多組學測序要求。深圳單細胞測序服務公司
高通量測序技術是對傳統(tǒng)測序一次突破性的改變,一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進行測定。杭州single cell RNA單細胞平臺
烈冰與國內高校、研究所、醫(yī)院和藥企單位開展深度合作,服務于600+臨床與研究機構,1000+客戶和5000+重要科研項目,助力并聯合發(fā)表300+篇CNS等國際學術期刊(不完全統(tǒng)計),在單細胞領域,烈冰助力用戶發(fā)表單細胞文獻30+篇,總IF>300+,IF>10+以上文章占比65%以上,包含Immunity、Nature Cell Biology、Nature Plants 、Advanced Science等生物領域國際主流學術期刊,已發(fā)表文章研究領域涵蓋包括COVID-19研究、疾病發(fā)生轉移機制,免疫研究、腦神經、白血病、胚胎發(fā)育、糖尿病、退行性疾病和植物領域研究等。杭州single cell RNA單細胞平臺
上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司是一家生物科技、醫(yī)藥科技、信息科技、計算機科技領域內的技術開發(fā)、技術服務、技術轉讓、技術咨詢,市場營銷策劃,市場信息咨詢與調查(不得從事社會調查、社會調研、民意調查、民意測驗),從事貨物及技術的進出口業(yè)務,計算機、軟件及耗材(除??兀?,軟件開發(fā)【依法須經批準的項目,經相關部門批準后方可開展經營活動】的公司,是一家集研發(fā)、設計、生產和銷售為一體的專業(yè)化公司。烈冰生物作為生物科技、醫(yī)藥科技、信息科技、計算機科技領域內的技術開發(fā)、技術服務、技術轉讓、技術咨詢,市場營銷策劃,市場信息咨詢與調查(不得從事社會調查、社會調研、民意調查、民意測驗),從事貨物及技術的進出口業(yè)務,計算機、軟件及耗材(除??兀?,軟件開發(fā)【依法須經批準的項目,經相關部門批準后方可開展經營活動】的企業(yè)之一,為客戶提供良好的單細胞測序,生物大數據云分析平臺,空間轉錄組測序,單細胞多組學測序。烈冰生物不斷開拓創(chuàng)新,追求出色,以技術為先導,以產品為平臺,以應用為重點,以服務為保證,不斷為客戶創(chuàng)造更高價值,提供更優(yōu)服務。烈冰生物始終關注醫(yī)藥健康市場,以敏銳的市場洞察力,實現與客戶的成長共贏。