無錫single cell RNA單細胞測序服務

來源: 發(fā)布時間:2022-07-15

樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉錄組的變化,在對細胞進行清洗和計數后,單細胞懸液應當保存于冰上,直至用于后續(xù)的上機和文庫制備步驟。在理想狀況下,一旦制備好樣本,應當在3min鐘內將其用于下游步驟。然而,您還有必要了解各類細胞的不同性質,因為這可能會影響細胞應在冰上保存的時間,以及它們在制備后多久便應當被盡快使用。例如,有些細胞(如PBMC)如果在冰上放置一段時間,它們就開始形成團塊。這些團塊很難解離,增加了堵塞的風險,而且每個團塊被當成單細胞計數,又降低了細胞計數的準確性。此外,有些細胞更加粘稠,形成團塊的速度更快。對于這些細胞,必須盡量減少制備和使用之間的時間差。強勢發(fā)文!烈冰BD單細胞測序平臺助力揭示愈傷組織能再生的機制。無錫single cell RNA單細胞測序服務

細胞計數和活力評估在評估樣本質量時,需要在細胞清洗和過濾之后測定細胞活力,這一點至關重要。測定細胞活力有許多種方法,烈冰多年單細胞測序經驗發(fā)現臺盼藍法在鑒定活細胞與死細胞的比例時效果很好。細胞計數的準確性以及目標回收量和實際回收量之間的一致性,取決于我們了解樣本中有多少個細胞。一旦過濾和清洗完成,可采用細胞計數設備(如血球計數器或自動細胞計數儀)進行定量。這些設備不但能提供準確的細胞計數,還能計算出向微流體芯片上樣適量細胞所需的細胞懸液體積。溫州BD VDJ單細胞實驗平臺2019年,烈冰已助力發(fā)表了采用BD Rahpsody平臺的單細胞風濕類文章。

單細胞測序結果動輒上百G數據量,龐大的數據對于分析平臺和分析能力有著很高的要求,首先針對下機數據的質控環(huán)節(jié):單細胞測序產生數億的結果序列,不可避免的會出現低質量的測序結果,存在各種情況的序列污染。因此序列過濾及質量評估就會變得極為重要。序列質量主要通過測序質量值Q20/Q30的占比來表征,即堿基測序結果的錯誤率在1% / 0.1%以下的比例。理想的測序結果reads的堿基質量均高于30。保證數據獲得后的處理結果的準確性,為后續(xù)細胞類型鑒定和功能分析打下堅實基礎。

烈冰科技自主研發(fā)的單細胞云平臺致力于幫助每一位客戶定制化分析數據,深度解讀數據分析結果,深入挖掘其背后的生物學意義;從操作便捷、結果可視化、分析可追溯、系統(tǒng)穩(wěn)定等方面助力單細胞研究,加速科研進程!此外,烈冰生信團隊根據豐富的實戰(zhàn)經驗為用戶量身打造了一款單細胞測序結果解讀的神兵利器——單細胞瀏覽器(Single Cell Browser),不但可以將海量復雜的結果文件可視化,還是可以實現三維立體化展示的軟件。專業(yè)的生信代碼交給專業(yè)的烈冰,專業(yè)的生物學意義交給專業(yè)的您,詳情請咨詢烈冰生物?;诖胖锽arcode和UMI及polyT的探針結構,精細區(qū)分上萬個細胞中mRNA的來源及表達豐度。

針對單細胞測序數據分析時的reads數、基因表達量及細胞數量判定過程中:以捕獲5000個細胞、100G的測序量為標準,每個細胞的reads數大約在50k左右;每個細胞的基因中位數取決于樣本的細胞類型,例如成熟的B,T,粒細胞數量較多的組織中,由于該類型細胞表達的基因數普遍較少,導致基因中位數下降。而某些疾病組織、或者體外培養(yǎng)的如干細胞等,他們的基因表達數較高,甚至可以超過1W,這就導致該類樣本基因中位數非常高。因此,我們對細胞數量以及基因中位數確認時,需要考察實際組織的細胞組成。截至2022年6月,烈冰助力發(fā)表單細胞測序文章30+篇。天津BD VDJ單細胞平臺

BD平臺基于cyto-seq技術,實現細胞和磁珠的一對一結合。無錫single cell RNA單細胞測序服務

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