上海10X Genomics單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班

來源: 發(fā)布時間:2022-06-25

相對于Smart-Seq技術(shù)在細(xì)胞數(shù)量上的問題,10X平臺普遍提供的細(xì)胞數(shù)量都在1000-20000不等的測序細(xì)胞量,這個量級的測序細(xì)胞量已經(jīng)可以說能夠完全覆蓋絕大部分組織的Single Cell群體類型。因此,這兩種技術(shù)對于基于基因表達(dá)進(jìn)行準(zhǔn)確細(xì)胞分型上,無論是從細(xì)胞數(shù)量上來說還是表達(dá)檢測可靠性來說,都會更實用。同時依托Random Cell Label技術(shù),使得其對于NovaSeq、HiSeq X Ten、Hiseq 4000等設(shè)備存在的Index hooping現(xiàn)象,相對于Smart-Seq數(shù)據(jù)來說,影響幾乎可以忽略不計(10X Genomics官方網(wǎng)站曾給出hooping測試結(jié)果,顯示無影響。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次突破性的改變,一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進(jìn)行測定。上海10X Genomics單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班

科研的魅力之處,在于無窮盡的探尋生命的本底,通過單細(xì)胞測序,我們對組織的分子基礎(chǔ)的研究也從初級到深層,并在單細(xì)胞層面逐漸達(dá)成一致,那么不禁要問一句,組織的空間位置到底重不重要?空間異質(zhì)性是功能的關(guān)鍵特征,細(xì)胞的位置信息更能反應(yīng)細(xì)胞命運調(diào)控機制和細(xì)胞譜系發(fā)生過程。因此時間和空間即像組織的AB面,而不可否認(rèn)的是,此時空間坐標(biāo)的記錄,像一個還未長大的娃娃,雖未觸及分子基礎(chǔ)研究的深層,但仍在努力攀登探尋生命本底的下一個高峰。重慶10X Chromium X單細(xì)胞測序服務(wù)機構(gòu)烈冰生物為您提供多平臺一站式全流程單細(xì)胞測序服務(wù)。

關(guān)于單細(xì)胞測序?qū)嶒灅颖局苽洌@與流式細(xì)胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致,也就是通過酶促或機械消化、細(xì)胞分選或其他細(xì)胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細(xì)胞懸液。隨后是細(xì)胞計數(shù)和質(zhì)量控制步驟,以確保您的樣本有適當(dāng)濃度的活細(xì)胞,并且不含細(xì)胞團(tuán)塊和死細(xì)胞碎片。如有必要,您還可以使用抗體對樣本進(jìn)行染色,標(biāo)記細(xì)胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通過FACS來富集感興趣的細(xì)胞類型。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗?zāi)繕?biāo)而定。也許需要額外的制備步驟,具體取決于組織質(zhì)量、樣本豐度、細(xì)胞大小,以及是否需要提取出細(xì)胞核進(jìn)行染色質(zhì)可接近性分析。無論具體的考慮因素如何,所有樣本類型都遵循同一個基本原則,那就是生成高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液。

作為單細(xì)胞測序的一個重要里程碑,10x genomic公司于2016年2月推出10x Chromium Single Cell Gene Expression Solution,此平臺整合了儀器、試劑盒和信息學(xué)軟件,能精確對接illumina測序儀,因此可實現(xiàn)大量大細(xì)胞的快速高效標(biāo)記、測序和分析,獲得單細(xì)胞水平的基因表達(dá)譜和差異情況,并通過對復(fù)雜細(xì)胞群體進(jìn)行深入細(xì)致分析,繪制大規(guī)模單細(xì)胞表達(dá)圖譜。 以量化細(xì)胞內(nèi)的群體異質(zhì)性,并逐個鑒定細(xì)胞類型、細(xì)胞狀態(tài)和動態(tài)細(xì)胞躍遷。除了有望鑒定新的細(xì)胞亞型和稀有細(xì)胞群體,單細(xì)胞技術(shù)還能更好地了解轉(zhuǎn)錄動態(tài)和基因調(diào)控關(guān)系。經(jīng)驗豐富的實驗團(tuán)隊,為獲得示組織內(nèi)真實表達(dá)水平的高質(zhì)量冷凍切片提供硬件和技術(shù)保障。

Single Cell Sequencing技術(shù),即利用優(yōu)化后的高通量測序技術(shù)(NGS,Next Generation Sequencing)分析每一個單個細(xì)胞的序列信息,從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問題來了,如何獲得單個細(xì)胞?如果無法獲得單個細(xì)胞這一切都是不成立的;如何獲得大批量的單個細(xì)胞?單個組織細(xì)胞群體通常在百萬級別以上,如果被檢測的測序細(xì)胞數(shù)量過小精確度不足;如何低成本地獲得大批量單個細(xì)胞?單細(xì)胞測序成本非常高,尤其是需要測2000~3000個以上的細(xì)胞的時候,如果單個細(xì)胞的分選成本也很高,技術(shù)根本無法普及。所以,正因為這些問題的存在使得高通量測序在單個細(xì)胞測序應(yīng)用中的普及度一直不足,直到幾個突破性技術(shù)的誕生。附加流式分選細(xì)胞表面Marker,對于較低分辨率的標(biāo)志物也能有效鑒定,助力高要求測序項目。上海10X Genomics單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班

烈冰一站式單細(xì)胞測序服務(wù):立足科學(xué)研究,解碼生命本質(zhì)。上海10X Genomics單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班

樣本制備后的保存 為了盡可能地減少轉(zhuǎn)錄組的變化,在對細(xì)胞進(jìn)行清洗和計數(shù)后,單細(xì)胞懸液應(yīng)當(dāng)保存于冰上,直至用于后續(xù)的上機和文庫制備步驟。在理想狀況下,一旦制備好樣本,應(yīng)當(dāng)在3min鐘內(nèi)將其用于下游步驟。然而,您還有必要了解各類細(xì)胞的不同性質(zhì),因為這可能會影響細(xì)胞應(yīng)在冰上保存的時間,以及它們在制備后多久便應(yīng)當(dāng)被盡快使用。例如,有些細(xì)胞(如PBMC)如果在冰上放置一段時間,它們就開始形成團(tuán)塊。這些團(tuán)塊很難解離,增加了堵塞的風(fēng)險,而且每個團(tuán)塊被當(dāng)成單細(xì)胞計數(shù),又降低了細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性。此外,有些細(xì)胞更加粘稠,形成團(tuán)塊的速度更快。對于這些細(xì)胞,必須盡量減少制備和使用之間的時間差。上海10X Genomics單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)分析培訓(xùn)班

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