對于同一個樣品,如果一步法恒溫試劑盒檢測結(jié)果為陽性,而PCR檢測為陰性,可能的原因包括: 1. 檢測的支原體種類不同:一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多,例如可以涵蓋27種支原體,而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進(jìn)行檢測。因此,如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內(nèi),就可能出現(xiàn)一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。 2. 靈敏度的差異:PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體,而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數(shù),例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測的靈敏度閾值,PCR檢測可能無法檢...
一步法快速支原體檢測的原理主要基于等溫擴增技術(shù),這是一種在恒定溫度下進(jìn)行的核酸擴增方法。以下是具體的步驟和原理: 1. 等溫擴增技術(shù):一步法快速支原體檢測試劑盒利用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification,環(huán)介導(dǎo)等溫擴增)技術(shù)或類似的等溫擴增技術(shù)。這些技術(shù)允許在恒定溫度下進(jìn)行DNA的快速擴增,通常在60-65°C之間。 2. 特異性引物:該方法使用設(shè)計好的特異性引物,這些引物靶向支原體DNA的保守區(qū)域。引物的設(shè)計確保了擴增過程的特異性,從而減少非目標(biāo)序列的擴增。 3. 快速擴增:在適宜的條件下,等溫擴增技術(shù)可以在15...
細(xì)胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測的原因主要有以下幾點: 1. 支原體污染率高:常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計在15-35%之間。 2. 影響實驗結(jié)果:支原體污染會嚴(yán)重干擾實驗結(jié)果的可信度,影響培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)和生理特征。 3. 難以用光學(xué)顯微鏡檢測:支原體是極小的細(xì)菌,其細(xì)胞膜周圍沒有細(xì)胞壁,無法用光學(xué)顯微鏡檢測到。 4. 難以消滅:支原體能夠迅速滲透整個實驗室,一旦污染很難徹底消滅。 5. 影響產(chǎn)品質(zhì)量:支原體污染會影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量,監(jiān)管機構(gòu)推薦檢測所有細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中是否存在支原體。 6. 保證實驗準(zhǔn)確性:定期進(jìn)行支原體檢測和去除,確保無支原體存在...
方法 靈敏度 優(yōu)勢 劣勢 培養(yǎng)法 ☆☆☆ ü 便捷 ü 便宜 ü 金標(biāo)準(zhǔn) ü 費勞力 ü 耗時長 ...
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面: 1. 高污染發(fā)生率:支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高,據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。 3. 隱匿性強:支原體污染具有很高的隱匿性,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢測試劑盒。 3. 影響實驗結(jié)果:支原體污染會改變細(xì)胞的生理性質(zhì),影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染,會改變細(xì)胞DNA、RNA及蛋白表達(dá),導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定。 4. 難以通過肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn):支原體污染無法通過肉眼檢查細(xì)胞來發(fā)現(xiàn),也不能通過向培養(yǎng)基中加入抗*素控制。 5. 對細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性...
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點: 1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu):支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物,這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對支原體無效。 2. 微小體積:支原體體積小,能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜,例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。 3. 隱匿性:支原體污染初期很難被察覺,它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見,因此細(xì)胞被支原體污染后,前期很難被發(fā)現(xiàn)。 4. 傳播途徑多樣:支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。 5. 污染源 :支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚,以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。...
支原體檢測的應(yīng)用場景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域: 1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實驗室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實驗結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要??蒲兄谐S玫葴財U增的方法簡單便捷。 2. 生物制品生產(chǎn):在生物制品的生產(chǎn)過程中,如疫苗、生物藥物等,需要確保產(chǎn)品無支原體污染,以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。 支原體污染和黑膠蟲污染有什么區(qū)別?廣州細(xì)胞支原體預(yù)防價格 支原體污染后的細(xì)胞是否應(yīng)該直接丟棄還是嘗試重新培養(yǎng),這取...
支原體去除的實驗步驟通常包括以下幾個階段: 1. 支原體檢測:在進(jìn)行去除之前,首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實現(xiàn),如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。 2. 選擇合適的去除試劑:一旦確認(rèn)存在支原體污染,需要選擇一種有效的去除試劑。 3. 去除試劑的添加:根據(jù)去除試劑的說明書,將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。通常,這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中。 4. 孵育:添加去除試劑后,將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時間和條件(如溫度、CO2濃度)應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整。 5. 監(jiān)測去除效果:在孵育...
支原體污染的來源主要包括以下幾個方面: 1. 實驗室環(huán)境中可能存在支原體污染源,如空氣中的塵埃、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等。 2. 實驗操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體,造成細(xì)胞培養(yǎng)的污染。 3. 培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)材料如果受到支原體污染,也會導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染。 4. 細(xì)胞交叉污染,即使用已受污染的細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)時,可能會污染其他細(xì)胞。 5. 實驗器材帶來的污染,如未徹底消毒滅菌的實驗器材。 6. 人體是某些支原體的正常菌群,因此操作人員的疏失也可能成為污染源。 7. 細(xì)胞庫管理不善,造成實驗室間的相互污染。 8. 細(xì)胞培養(yǎng)...
LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法(Loop-mediated isothermal amplification),在支原體檢測中的應(yīng)用具有以下特點和應(yīng)用場景: 1. 日常監(jiān)測:由于LAMP法的快速和簡便性,它適用于生物實驗室的日常監(jiān)測,可以及時檢測出支原體的存在,確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。 2. 疾病診斷:LAMP法已被成功應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中,并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用。 3. 臨床應(yīng)用:LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性,可以用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體。 4. 多病原體檢...
支原體檢測實驗設(shè)計和實驗方法需要考慮以下幾個關(guān)鍵點: 1. 選擇合適的檢測方法:根據(jù)實驗室條件和需求,選擇適合的支原體檢測方法,如培養(yǎng)法、PCR法、ELISA法、DNA熒光染色法等。 2. 樣本的采集與處理:確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規(guī)范,避免交叉污染。 3. 實驗操作的標(biāo)準(zhǔn)化:制定詳細(xì)的實驗操作流程,包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時間點等,以保證實驗的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。 4. 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基:根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基,如支原體肉湯培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等,并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。 5. 設(shè)置對照組:實驗中應(yīng)包括陽性對照和陰性對...
支原體檢測的應(yīng)用場景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域: 1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實驗室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實驗結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要??蒲兄谐S玫葴財U增的方法簡單便捷。 2. 生物制品生產(chǎn):在生物制品的生產(chǎn)過程中,如疫苗、生物藥物等,需要確保產(chǎn)品無支原體污染,以保證其安全性和有效性。監(jiān)管機構(gòu)要求在生產(chǎn)的關(guān)鍵階段進(jìn)行支原體檢測。通常采用qPCR的方式進(jìn)行。 細(xì)胞培養(yǎng)中支原體為什么難以徹底消滅?溫州細(xì)胞支原體預(yù)防試劑現(xiàn)貨 支原體去除后對細(xì)胞檢測的影響主要取決于去除方法和去...
需要定期檢測支原體污染的客戶主要包括以下幾類: 1. 生物醫(yī)藥企業(yè):生產(chǎn)涉及細(xì)胞培養(yǎng)的生物制品的公司,包括疫苗、生物藥物、基因產(chǎn)品等。 2. 細(xì)胞公司:進(jìn)行細(xì)胞產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)的企業(yè),需要確保所用細(xì)胞的安全性和有效性。 3. 科研機構(gòu):從事細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳學(xué)等研究的學(xué)術(shù)機構(gòu),需要保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。 4. 臨床單位:使用細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行的醫(yī)院或診所,需要確保用細(xì)胞的質(zhì)量。 5. 細(xì)胞庫:保存和供應(yīng)細(xì)胞株的細(xì)胞庫,需要對細(xì)胞資源進(jìn)行定期檢測以保證其無污染。 6. 生物技術(shù)公司:提供生物技術(shù)服務(wù)的公司,如細(xì)胞培養(yǎng)、基因編輯等,需要確保服...
目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動物、昆蟲和植物中,其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實驗室中的傳播來源多種多樣,主要來源包括實驗室人員、胎牛血清(FBS)或新生牛血清(NBS)、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外,來自其他實驗室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑;非無菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液;實驗室人員;培養(yǎng)箱;液氮;空氣顆粒和氣溶膠;抗*素的過度使用;細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封;以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。支原體檢測實驗的設(shè)計?溫州支原體預(yù)防試劑多少錢 支原體去除試劑使用后,對支原體的檢測可能會有影響。一些支原體去除試劑通...
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中,qPCR法的原理主要包括以下幾個步驟: 1. DNA提?。菏紫葟拇郎y樣本中提取DNA,這可能包括細(xì)胞培養(yǎng)上清液或組織樣本中的支原體DNA。 2. 設(shè)計特異性引物:針對支原體的保守DNA序列,如16S rRNA基因,設(shè)計特異性的DNA引物。 3. 熒光標(biāo)記探針:使用熒光標(biāo)記的探針,該探針與目標(biāo)DNA序列互補,能夠在PCR擴增過程中與擴增的DNA結(jié)合。 4. Ct值確定:Ct值...
檢測新鮮培養(yǎng)基是否有支原體污染,可以采用以下五種方案: 1. 培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)且可靠的方法,通過將培養(yǎng)基接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上,觀察是否有支原體生長。這種方法較為耗時,但成本較低。 2. 熒光染色法:使用特定的熒光染料(如Hoechst 33258)對細(xì)胞進(jìn)行染色,然后在熒光顯微鏡下觀察。如果存在支原體污染,可以看到細(xì)胞表面或細(xì)胞間隙中支原體DNA的熒光染色。 3. PCR法:通過設(shè)計針對支原體特定序列的引物,利用PCR技術(shù)特異性擴增目標(biāo)DNA。PCR產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,如果出現(xiàn)條帶則表明存在支原體污染。 4. 電鏡觀察法:使...
支原體污染一旦發(fā)生,不僅對細(xì)胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重影響,甚至可能導(dǎo)致實驗結(jié)果失真。而且支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)實驗中相當(dāng)常見。因此,預(yù)防措施是確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境和實驗結(jié)果可靠性的重要手段。 01/ 良好的無菌技術(shù)及實驗操作,保證操作不會引入新的污染 02/ 保持實驗空間的清潔 03/ 確保從可靠的來源獲取細(xì)胞,減少不同細(xì)胞之間的交叉?zhèn)魅? 04/ 防止交叉污染 05/ 減少氣溶膠生成 06/ 謹(jǐn)慎使用抗*素 07/ 定期支原體篩查 08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細(xì)胞 09/ 保持良好的記錄 支原體檢測方法qPCR法的應(yīng)用。細(xì)胞培...
在科研中,支原體檢測是確保細(xì)胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見的支原體檢測方法: 1. 支原體培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)的檢測方法,通過將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中,觀察是否有支原體生長。這是直接的檢測方法,但耗時較長,通常需要數(shù)周時間。 2. DNA染色法:使用熒光染料(如Hoechst或DAPI)染色細(xì)胞核,然后通過熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡便,可以快速得到結(jié)果,但特異性不高,可能會有假陽性。 3. 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法:這是一種分子生物學(xué)技術(shù),通過設(shè)計特異性的引物,擴增支原體DNA,從而檢測支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性,已成為日常...
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面: 1. 高污染發(fā)生率:支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高,據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。 3. 隱匿性強:支原體污染具有很高的隱匿性,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢測試劑盒。 3. 影響實驗結(jié)果:支原體污染會改變細(xì)胞的生理性質(zhì),影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染,會改變細(xì)胞DNA、RNA及蛋白表達(dá),導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定。 4. 難以通過肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn):支原體污染無法通過肉眼檢查細(xì)胞來發(fā)現(xiàn),也不能通過向培養(yǎng)基中加入抗*素控制。 5. 對細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性...
LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法(Loop-mediated isothermal amplification),在支原體檢測中的應(yīng)用具有以下特點和應(yīng)用場景: 1. 日常監(jiān)測:由于LAMP法的快速和簡便性,它適用于生物實驗室的日常監(jiān)測,可以及時檢測出支原體的存在,確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。 2. 疾病診斷:LAMP法已被成功應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測中,并在2009年甲型H1N1流感事件中發(fā)揮了重要作用。 3. 臨床應(yīng)用:LAMP法在臨床樣本的檢測中顯示出了快速、高靈敏度和穩(wěn)定性,可以用于檢測實驗室樣本及臨床樣本中的支原體。 4. 多病原體檢...
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起: 1. 擴增產(chǎn)物污染:PCR擴增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理,極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 2. 引物設(shè)計不當(dāng):引物設(shè)計不夠特異性,可能會與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致非特異性擴增。 3. 試劑質(zhì)量問題:使用的dNTPs、引物、DNA聚合酶等試劑質(zhì)量不佳,可能引起非特異性擴增或假陽性結(jié)果。 4. 操作技術(shù)問題:實驗操作不規(guī)范,如混合樣本、標(biāo)簽錯誤或樣本標(biāo)識不清等,可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 5. PCR反應(yīng)條件設(shè)置不當(dāng):不恰當(dāng)?shù)腜CR反應(yīng)條件,如溫度和時間選擇不當(dāng),可能導(dǎo)致非特異性擴增。 6. DNA...
支原體去除的原理通常涉及以下幾個方面: 1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制劑來抑制支原體的生長和繁殖。例如,含有喹諾酮類、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內(nèi)酯類抗*素的混合制劑,這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。 2. 破壞細(xì)胞膜:支原體去除劑中的抑菌肽(AMPs)成分通過破壞支原體細(xì)胞膜的完整性,導(dǎo)致支原體細(xì)胞死亡。 3. 抑制DNA復(fù)制:支原體去除劑通過抑制支原體DNA回旋酶活性,有效抑制支原體DNA的復(fù)制,從遺傳物質(zhì)著手徹底殺滅支原體。 4. 協(xié)同作用:某些支原體去除劑利用抑菌肽(AMPs)和穿膜肽(CPPs)的協(xié)同作用來除去支原體,穿膜肽能夠幫助抑菌...
細(xì)胞培養(yǎng)中,需要去除支原體的污染:支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中 普遍的問題之一,細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中,支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響: 01/ 爭奪營養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長和增殖 02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平 03/ 改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號傳導(dǎo)和形態(tài) 04/ 損害膜和細(xì)胞器 05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化 06/ 時間、金錢和有價值的細(xì)胞丟失,耽誤研究時間 07/ 實驗結(jié)果的不可靠性,實驗結(jié)果的重復(fù)性 降低 08/ 生物安全問題 支原體檢測實驗的設(shè)計?支原體...