支原體預(yù)防的主要成分通常是指用于預(yù)防支原體污染的抗*素或化學(xué)試劑。在細(xì)胞培養(yǎng)中,預(yù)防支原體污染的措施包括在培養(yǎng)基中添加抗*素,以及采取其他預(yù)防措施來保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的清潔和無菌操作。以下是一些用于預(yù)防支原體污染的主要成分:
1. 四環(huán)素類抗*素:這類抗*素對(duì)支原體具有抑制作用,常用于治*和預(yù)防支原體感*。
2. 大環(huán)內(nèi)酯類抗*素:例如羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素等,用于治*肺炎支原體感*。
3. 喹諾酮類藥物:如氧氟沙星、司帕沙星等,也用于治*肺炎支原體感*。
4. 其他抗*素:例如氨基糖苷類、氯霉素等,對(duì)支原體有較小的抑制作用。
細(xì)胞培養(yǎng)為什么建議使用支原體檢測(cè)?細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑廠家
細(xì)胞培養(yǎng)中,需要去除支原體的污染:支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中 普遍的問題之一,細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中,支原體的污染率約為15%-35%。并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響:
01/ 爭(zhēng)奪營養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長和增殖
02/ 改變蛋白質(zhì)、RNA 或 DNA 合成的水平
03/ 改變基因表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)和形態(tài)
04/ 損害膜和細(xì)胞器
05/ 導(dǎo)致突變和染色體變化
06/ 時(shí)間、金錢和有價(jià)值的細(xì)胞丟失,耽誤研究時(shí)間
07/ 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不可靠性,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性 降低
08/ 生物安全問題
廣州支原體檢測(cè)要多久支原體污染如何預(yù)防?
巢式PCR法和一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒各有優(yōu)缺點(diǎn),具體哪個(gè)更好要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和條件來決定。
1. 巢式PCR法通過兩輪PCR擴(kuò)增來提高檢測(cè)的特異性和靈敏度。它的優(yōu)點(diǎn)是:
2. 特異性強(qiáng),可以減少假陽性結(jié)果。
3. 靈敏度高,可以檢測(cè)到很低數(shù)量的支原體。
4. 通過設(shè)計(jì)多對(duì)引物,可以覆蓋多種支原體種類。
不過巢式PCR法也存在一些缺點(diǎn):
1. 操作復(fù)雜,需要兩輪PCR反應(yīng)。
2. 容易受到PCR抑制物的影響,產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 反應(yīng)后需要開蓋電泳檢測(cè),增加了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
而一步法恒溫支原體檢測(cè)試劑盒采用等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),具有以下優(yōu)點(diǎn):
1. 操作簡(jiǎn)便,只需一次反應(yīng)即可完成檢測(cè)。
2. 靈敏度和特異性也很高,可檢出10個(gè)拷貝以上的支原體污染。
3. 反應(yīng)后無需開蓋,減少了污染的風(fēng)險(xiǎn)。
但一步法試劑盒的缺點(diǎn)是:
1. 靈敏度雖高,但可能略低于巢式PCR法。
2. 價(jià)格可能比巢式PCR試劑盒要高。
支原體污染和黑膠蟲污染是兩種不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)污染,它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別:
支原體污染:在相差顯微鏡下,支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。
黑膠蟲污染:在高倍鏡下,被黑膠蟲污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清,邊界不清晰,有粗糙感。
污染的影響:
支原體污染:可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢,甚至從培養(yǎng)器皿脫落,影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá)。
黑膠蟲污染:與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長,開始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒有什么影響,但當(dāng)數(shù)量多時(shí),細(xì)胞生長會(huì)受到影響直至死亡。
污染的來源:
支原體污染:可能來源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來的污染以及用來制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲污染:可能來源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染,也可能通過培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染。
支原體檢測(cè)方法qPCR法的應(yīng)用。
預(yù)防細(xì)胞培養(yǎng)過程中的支原體污染至關(guān)重要,因?yàn)橐坏┌l(fā)生污染,可能會(huì)嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和細(xì)胞的生長。以下是一些有效的預(yù)防措施:
1. 無菌操作:始終在無菌條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)操作,包括使用無菌的移液器、手套和其他實(shí)驗(yàn)室器材。
2. 個(gè)人防護(hù):穿戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備,如實(shí)驗(yàn)服、手套和口罩,以減少污染的風(fēng)險(xiǎn)。
3. 細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔:保持實(shí)驗(yàn)室和細(xì)胞培養(yǎng)室的清潔,定期進(jìn)行消毒處理。
4. 培養(yǎng)箱的維護(hù):定期清潔和消毒CO2培養(yǎng)箱,避免飛濺和溢出,并維持嚴(yán)格的清潔計(jì)劃。
5. 使用無支原體污染的試劑:使用經(jīng)過檢測(cè)確認(rèn)無支原體污染的培養(yǎng)基、血清和其他添加物。
6. 細(xì)胞的檢測(cè):定期對(duì)細(xì)胞進(jìn)行支原體污染的檢測(cè),尤其是在引入新的細(xì)胞系或傳代細(xì)胞之前。
7. 培養(yǎng)基和試劑的過濾:使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾所有細(xì)胞培養(yǎng)用液體,以阻止支原體的通過。
8. 使用抗*素預(yù)防:雖然抗*素不能作為常規(guī)預(yù)防手段,但在某些情況下,可以考慮使用抗*素作為預(yù)防措施,尤其是在高風(fēng)險(xiǎn)操作中。
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支原體去除和支原體預(yù)防有什么區(qū)別?細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)試劑廠家
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測(cè)和定量DNA序列。在支原體檢測(cè)中,qPCR法的原理主要包括以下幾個(gè)步驟:
1. DNA提取:首先從待測(cè)樣本中提取DNA,這可能包括細(xì)胞培養(yǎng)上清液或組織樣本中的支原體DNA。
2. 設(shè)計(jì)特異性引物:針對(duì)支原體的保守DNA序列,如16S rRNA基因,設(shè)計(jì)特異性的DNA引物。
3. 熒光標(biāo)記探針:使用熒光標(biāo)記的探針,該探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ),能夠在PCR擴(kuò)增過程中與擴(kuò)增的DNA結(jié)合。
4. Ct值確定:Ct值(閾值循環(huán)數(shù))是指在PCR反應(yīng)中,熒光信號(hào)強(qiáng)度超過預(yù)定閾值的循環(huán)次數(shù)。Ct值越低,表示樣本中支原體DNA的量越多。
5. 定量分析:通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或相對(duì)定量法,將Ct值轉(zhuǎn)換為支原體DNA的定量結(jié)果。
qPCR法的優(yōu)勢(shì)在于其高靈敏度和特異性,能夠檢測(cè)到非常低水平的支原體污染,并且可以在短時(shí)間內(nèi)提供結(jié)果,這對(duì)于需要快速檢測(cè)的生物制品生產(chǎn)和細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量控制非常重要
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