fetalbovineserumfbs)購于內(nèi)蒙古金源康生物工程有限公司；青霉素、鏈霉素購于上海生工生物工程股份有限公司；膠原蛋白水解酶(collagenase)購于美國sigma--aldrich。本公開實(shí)施例中使用的**類細(xì)胞培養(yǎng)液為自主配置，包括：dmem/f12培養(yǎng)基和1％的glutamax(gibco，35050061)、10mm的hepes(gibco，15630080)、10nm的gastrin(sigma，g9145)、10mm的nicotinamide(sigma，n06365)、500ng/ml的a83-01(tocris，2939)、100ng/ml的noggin...

于18-20℃、800×g/min的條件下離心20min，取中間的白膜層置新的離心管中，隨即加入三倍體積的pbs清洗兩遍后，獲得pbmcs；將pbmcs置于含有100ng/mlcd3、1000iu/mlil-2、1ng/mlil-1α的1640培養(yǎng)基中，擴(kuò)增至細(xì)胞數(shù)量×107個(gè)/ml，獲得足夠數(shù)量的免疫細(xì)胞。在6cm平皿中接種×107個(gè)/ml的免疫細(xì)胞和**類***細(xì)胞，其中，免疫細(xì)胞：**類***細(xì)胞＝3：1，加入**類***培養(yǎng)液4ml，放入培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)；使用10moi溶瘤病毒(將新城疫病毒ndv溶瘤病毒作為待測(cè)溶瘤病毒，將腺病毒prostatak溶瘤病毒作為參比溶瘤病毒)...

單純皰疹病毒1型）的γ，γ***機(jī)制，γ，病毒不能在正常細(xì)胞中復(fù)制；而*細(xì)胞中這一機(jī)制缺失，γ*細(xì)胞中的復(fù)制。目前處于III期臨床的JX594(Pexa-Vec)敲除了牛痘病毒（vacciniaviruses）的TK（胸苷激酶，thymidinekinase）基因，而病毒的復(fù)制與細(xì)胞中TK水平有關(guān)，所以敲除了TK的JX594*能在TK活性高的*細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，不能在正常細(xì)胞中復(fù)制（正常細(xì)胞TK活性低）。CG0070是在腺病毒主管復(fù)制的基因E1A前加了E2F-1啟動(dòng)子，E2F-1受視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤抑制蛋白（Rb）的調(diào)控，而Rb在膀胱*中缺失，Rb的缺失***E2F-1的轉(zhuǎn)錄活性，使得E1A...

本檢測(cè)方法建立了一種快速從溶瘤病毒復(fù)制能力、溶瘤能力及誘導(dǎo)宿主抗**免疫作用等三個(gè)方面評(píng)價(jià)溶瘤病毒對(duì)不同患者**溶瘤有效性的方法，可用于臨床前期藥物有效性測(cè)試及臨床入組病人的篩選。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本公開提供一種利用類***檢測(cè)溶瘤病毒有效性的方法，該方法包括：a、將溶瘤病毒與**類***混合培養(yǎng)12-96h，得到***培養(yǎng)物，檢測(cè)所述***培養(yǎng)物中的溶瘤病毒的復(fù)制水平；b、將所述溶瘤病毒與**類***混合培養(yǎng)12-96h，得到第二培養(yǎng)物，檢測(cè)所述第二培養(yǎng)物中溶瘤病毒對(duì)**細(xì)胞的殺傷率；c、將所述溶瘤病毒、免疫細(xì)胞和**類***混合培養(yǎng)2-8h，得到第三培養(yǎng)物，檢測(cè)所述第三培養(yǎng)物中的細(xì)...

使用肺ai經(jīng)2d培養(yǎng)的a549細(xì)胞系替換步驟2中的肺aizhong劉類***，并以正常胚肺成纖維細(xì)胞系mrc-5作為陰性對(duì)照，放入培養(yǎng)箱中與培養(yǎng)24小時(shí)后，使用(將新城疫病毒ndv溶瘤病毒作為待測(cè)溶瘤病毒，將腺病毒prostatak溶瘤病毒作為參比溶瘤病毒)ganran，檢測(cè)上清液中細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-2和γ-干擾素的濃度，并計(jì)算溶瘤病毒的細(xì)胞因子促表達(dá)能力。檢測(cè)結(jié)果見表3。表1由表1可以看出，ndv溶瘤病毒及prostatak溶瘤病毒在a549細(xì)胞系和肺ai類***中均可以復(fù)制擴(kuò)增，但是ndv溶瘤病毒及prostatak溶瘤病毒在肺ai類***中的復(fù)制水平均弱于其在a549細(xì)胞系中的...

δ24bp)-e1b***抑制人源化小鼠移植瘤的生長為了測(cè)試所述腺病毒的體內(nèi)抑瘤效果，本實(shí)施例在人源化免疫系統(tǒng)的小鼠移植瘤模型中測(cè)試了其抑瘤能力。在人源化免疫系統(tǒng)的小鼠背部雙側(cè)皮下注射人hcc827細(xì)胞，形成移植瘤，但只對(duì)右側(cè)**進(jìn)行重組溶瘤腺病毒給藥，左側(cè)不做任何處理。結(jié)果如圖4所示，測(cè)試組右側(cè)(給藥側(cè))移植瘤在瘤內(nèi)注射重組溶瘤腺病毒rad-ifn-3-sp-e1a(δ24bp)-e1b后體積開始逐步縮小，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)抑瘤率達(dá)到了％，***強(qiáng)于陽性對(duì)照藥吉西他濱(圖4a和b)。而令人意外的是，測(cè)試組左側(cè)(非給藥側(cè))移植瘤在右側(cè)瘤內(nèi)給藥后體積也開始逐步縮小，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)抑瘤率也達(dá)到了％的水...

本公開涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域：，具體涉及一種利用類***檢測(cè)溶瘤病毒有效性的方法。背景技術(shù)：：溶瘤病毒是通過對(duì)天然存在的致病力較弱的病毒進(jìn)行基因改造而形成的特殊病毒。溶瘤病毒能利用zhong劉細(xì)胞中畸變的信號(hào)通路(如抑ai基因的失活或缺陷)而選擇性地ganranzhong劉細(xì)胞，并在zhong劉細(xì)胞內(nèi)大量繁殖從而摧毀zhong劉細(xì)胞，但是其無法ganran正常細(xì)胞。同時(shí)，溶瘤病毒還能激發(fā)免疫反應(yīng)，吸引更多免疫細(xì)胞來繼續(xù)殺死殘余的zhong劉細(xì)胞。溶瘤病毒作為zhong劉療治的生物藥，需要篩選其對(duì)zhong劉患者療治的有效性和安全性。相關(guān)技術(shù)中，利用zhong劉細(xì)胞進(jìn)行2d培養(yǎng)得到的單層細(xì)...

本公開涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域：，具體涉及一種利用類***檢測(cè)溶瘤病毒有效性的方法。背景技術(shù)：：溶瘤病毒是通過對(duì)天然存在的致病力較弱的病毒進(jìn)行基因改造而形成的特殊病毒。溶瘤病毒能利用zhong劉細(xì)胞中畸變的信號(hào)通路(如抑ai基因的失活或缺陷)而選擇性地ganranzhong劉細(xì)胞，并在zhong劉細(xì)胞內(nèi)大量繁殖從而摧毀zhong劉細(xì)胞，但是其無法ganran正常細(xì)胞。同時(shí)，溶瘤病毒還能激發(fā)免疫反應(yīng)，吸引更多免疫細(xì)胞來繼續(xù)殺死殘余的zhong劉細(xì)胞。溶瘤病毒作為zhong劉療治的生物藥，需要篩選其對(duì)zhong劉患者療治的有效性和安全性。相關(guān)技術(shù)中，利用zhong劉細(xì)胞進(jìn)行2d培養(yǎng)得到的單層細(xì)...

IO巨頭布局溶瘤病毒默克公司擁有重磅**免疫檢查點(diǎn)抑制劑Keytruda，與BMS同為全球**免疫療法巨頭。2018年2月21日，Viralytics與默克公司簽署協(xié)議，默克公司擬通過子公司以每股，收購總金額約為（）。Viralytics是一家致力于溶瘤病毒免疫療法的研發(fā)和商業(yè)拓展的生物科技公司，擁有能選擇性***和殺傷**細(xì)胞的溶瘤病毒。其**產(chǎn)品是可靜脈滴注的溶瘤病毒CAVATAK，是一種基于A21型柯薩奇病毒（CVA21）的溶瘤病毒，具有***黑色素瘤、前列腺*、肺*和膀胱*的潛力，其***晚期黑色素瘤的適應(yīng)癥于2005年12月獲得美國FDA“孤兒藥認(rèn)定”。目前該產(chǎn)品正在開展多項(xiàng)...

于18-20℃、800×g/min的條件下離心20min，取中間的白膜層置新的離心管中，隨即加入三倍體積的pbs清洗兩遍后，獲得pbmcs；將pbmcs置于含有100ng/mlcd3、1000iu/mlil-2、1ng/mlil-1α的1640培養(yǎng)基中，擴(kuò)增至細(xì)胞數(shù)量×107個(gè)/ml，獲得足夠數(shù)量的免疫細(xì)胞。在6cm平皿中接種×107個(gè)/ml的免疫細(xì)胞和**類***細(xì)胞，其中，免疫細(xì)胞：**類***細(xì)胞＝3：1，加入**類***培養(yǎng)液4ml，放入培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)；使用10moi溶瘤病毒(將新城疫病毒ndv溶瘤病毒作為待測(cè)溶瘤病毒，將腺病毒prostatak溶瘤病毒作為參比溶瘤病毒)...

溶瘤病毒*****細(xì)胞后誘導(dǎo)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗**免疫作用的能力也越強(qiáng)。本公開的方法通過上述三方面檢測(cè)，能夠***表征溶瘤病毒殺傷**細(xì)胞的有效性。本公開的上述方法采用**類***作為溶瘤病毒有效性檢測(cè)的**細(xì)胞模型，由于**類***能夠較好地反映患者體內(nèi)**組織的生物學(xué)特性，因此，本公開方法的檢測(cè)結(jié)果能較真實(shí)地反映溶瘤病毒在患者體內(nèi)對(duì)**組織溶瘤作用的有效性。根據(jù)本公開，推薦地，步驟a中還包括將**類***進(jìn)行***預(yù)培養(yǎng)的步驟，然后再將***預(yù)培養(yǎng)后的**類***與溶瘤病毒進(jìn)行混合培養(yǎng)；所述***預(yù)培養(yǎng)包括：將**類***與溫敏性水凝膠、**類***培養(yǎng)液混合，培養(yǎng)12-96h，其...

被賦予特殊功能的溶瘤病毒表達(dá)的**特異性免疫***蛋白，能夠激發(fā)全身性抗**免疫反應(yīng)。目前，雖然溶瘤免疫療法單獨(dú)用藥已經(jīng)在臨床上顯示出了抗*活性，但已有研究表明，結(jié)合免疫檢查點(diǎn)抑制等免疫療法或能增強(qiáng)其抗*有效性。Replimune什么來頭？Replimune于2015年在英國成立，總部位于美國，其聯(lián)合創(chuàng)始人兼CEORobertCoffin此前曾是抗*疫苗開發(fā)商BioVex創(chuàng)始人。在BioVex期間，RobertCoffin參與了BioVex所有產(chǎn)品的研發(fā)。此外，Replimune的另外一位聯(lián)合創(chuàng)始人PhilipAstley-Sparke也曾是BioVexCEO。而BioVex正是全球制...

該方法中使用的類***能夠更真實(shí)模擬患者體內(nèi)zhong劉異質(zhì)性及藥物反應(yīng)情況，本檢測(cè)方法建立了一種快速從溶瘤病毒復(fù)制能力、溶瘤能力及誘導(dǎo)宿主抗zhong劉免疫作用等三個(gè)方面評(píng)價(jià)溶瘤病毒對(duì)不同患者zhong劉溶瘤有效性的方法，可用于臨床前期藥物有效性測(cè)試及臨床入組病人的篩選。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本公開提供一種利用類***檢測(cè)溶瘤病毒有效性的方法，該方法包括：a、將溶瘤病毒與zhong劉類***混合培養(yǎng)12-96h，得到培養(yǎng)物，檢測(cè)所述培養(yǎng)物中的溶瘤病毒的復(fù)制水平；b、將所述溶瘤病毒與zhong劉類***混合培養(yǎng)12-96h，得到第二培養(yǎng)物，檢測(cè)所述第二培養(yǎng)物中溶瘤病毒對(duì)zhong劉細(xì)胞的殺...

δ24bp)-e1b***抑制人源化小鼠移植瘤的生長為了測(cè)試所述腺病毒的體內(nèi)抑瘤效果，本實(shí)施例在人源化免疫系統(tǒng)的小鼠移植瘤模型中測(cè)試了其抑瘤能力。在人源化免疫系統(tǒng)的小鼠背部雙側(cè)皮下注射人hcc827細(xì)胞，形成移植瘤，但只對(duì)右側(cè)**進(jìn)行重組溶瘤腺病毒給藥，左側(cè)不做任何處理。結(jié)果如圖4所示，測(cè)試組右側(cè)(給藥側(cè))移植瘤在瘤內(nèi)注射重組溶瘤腺病毒rad-ifn-3-sp-e1a(δ24bp)-e1b后體積開始逐步縮小，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)抑瘤率達(dá)到了％，***強(qiáng)于陽性對(duì)照藥吉西他濱(圖4a和b)。而令人意外的是，測(cè)試組左側(cè)(非給藥側(cè))移植瘤在右側(cè)瘤內(nèi)給藥后體積也開始逐步縮小，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)抑瘤率也達(dá)到了％的水...

δ24bp)-e1b基本一致。進(jìn)一步還在肺*細(xì)胞系hcc827中，比較了rad-ifn-3-sp-e1a(δ24bp)-e1b和空載對(duì)照病毒rad-sp-e1a(δ24bp)-e1b的殺傷作用。如圖2d所示,結(jié)果表明rad-ifn-3-sp-e1a(δ24bp)-e1b殺傷肺*細(xì)胞系hcc827的能力***強(qiáng)于空載對(duì)照病毒rad-sp-e1a(δ24bp)-e1b。當(dāng)moi為5時(shí)rad-ifn-3-sp-e1a(δ24bp)-e1b即可幾乎殺傷全部的hcc827細(xì)胞，強(qiáng)于moi為20時(shí)的rad-sp-e1a(δ24bp)-e1b的效果。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明了，溶瘤病毒rad-ifn-3-s...

accgagaagaagtac480agcccttgtgcctgggaggtggtgagagccgagatcatgagatccttttccctgagcaca540aacctgcaggagaggctgagaaggaaggagtga5733573dna人工合成()3atggccctgtccttctccctgctgatggccgtgctggtgctgagctacaagtccatctgc60tccctgggcatgtgcgacctgcctcagacacactccctgggcaataggagagccctgatc120ctgctggcccagatgaggaggatctccccttttagctgcc...

得到待測(cè)病毒液，所述待測(cè)病毒液中含有所述待測(cè)病毒。其中，所述凍融處理的最低溫度為-20--80℃，最高溫度為10-25℃；所述離心的條件包括：離心轉(zhuǎn)速為5000-10000rpm/min，離心時(shí)間為30-60min。推薦地，步驟b中，可以利用cck8試劑盒檢測(cè)所述第二培養(yǎng)物中溶瘤病毒對(duì)**細(xì)胞的殺傷率；步驟c中，可以利用elisa試劑盒檢測(cè)所述第三培養(yǎng)物中的細(xì)胞因子水平。推薦地，步驟c中所述免疫細(xì)胞可以從患者外周血中分離得到。其中，從患者外周血中分離所述免疫細(xì)胞的方法可以是領(lǐng)域內(nèi)的常規(guī)方法，在此不再贅述。根據(jù)本公開，步驟a、步驟b和步驟c中所述的混合培養(yǎng)在**類***培養(yǎng)液中進(jìn)行，所述...

zhong劉類***培養(yǎng)液的用量為2000-3000μl；將zhong劉類***與溶瘤病毒進(jìn)行混合培養(yǎng)時(shí)，溶瘤病毒的用量為；步驟b中還包括將zhong劉類***進(jìn)行第二預(yù)培養(yǎng)的步驟，然后再將第二預(yù)培養(yǎng)后的zhong劉類***與溶瘤病毒進(jìn)行混合培養(yǎng)；所述第二預(yù)培養(yǎng)包括：將zhong劉類***與溫敏性水凝膠、zhong劉類***培養(yǎng)液混合，培養(yǎng)12-96h，其中，相對(duì)于300-1000個(gè)zhong劉類***中的zhong劉細(xì)胞，溫敏性水凝膠的用量為30-80μl，zhong劉類***培養(yǎng)液的用量為100-150μl；將zhong劉類***與溶瘤病毒進(jìn)行混合培養(yǎng)時(shí)，溶瘤病毒的用量為；步驟c中...

“施與”或者“施用”意指以在藥理學(xué)上可用的方式向?qū)ο筇峁┪镔|(zhì)，例如藥物組合物。向?qū)ο筇峁┑乃幬锝M合物的劑量，是指足以顯示其對(duì)于所施用對(duì)象產(chǎn)生益處的劑量，在本文中也可以被稱為“藥物有效量”或“有效量”。施用的實(shí)際量，以及施用的速率和時(shí)間過程會(huì)取決于所***者的自身情況和嚴(yán)重程度。***的***(例如對(duì)劑量的決定等)**終是全科醫(yī)生及其它醫(yī)生的責(zé)任并依賴其做決定，通常考慮所***的疾病、患者個(gè)體的情況、遞送部位、施用方法以及對(duì)于醫(yī)生來說已知的其它因素。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含108至1012vp的溶瘤病毒，例如1×108、×108、2×108、×108、3×108、×108...

被賦予特殊功能的溶瘤病毒表達(dá)的**特異性免疫***蛋白，能夠激發(fā)全身性抗**免疫反應(yīng)。目前，雖然溶瘤免疫療法單獨(dú)用藥已經(jīng)在臨床上顯示出了抗*活性，但已有研究表明，結(jié)合免疫檢查點(diǎn)抑制等免疫療法或能增強(qiáng)其抗*有效性。Replimune什么來頭？Replimune于2015年在英國成立，總部位于美國，其聯(lián)合創(chuàng)始人兼CEORobertCoffin此前曾是抗*疫苗開發(fā)商BioVex創(chuàng)始人。在BioVex期間，RobertCoffin參與了BioVex所有產(chǎn)品的研發(fā)。此外，Replimune的另外一位聯(lián)合創(chuàng)始人PhilipAstley-Sparke也曾是BioVexCEO。而BioVex正是全球制...

安進(jìn))也公布了一項(xiàng)溶瘤病毒Imlygic(T-VEC)聯(lián)合檢查點(diǎn)抑制劑CTLA-4抗體***黑色素瘤的**新臨床數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，相比較于CTLA-4抗體Yervoy(Ipilimumab)單藥***，該聯(lián)合療法使得患者的總體反應(yīng)率翻了一番。臨床入組患者198例，其中98例患者接受聯(lián)合***，100例患者接受Yervoy(Ipilimumab)單藥***。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，聯(lián)合組患者的總體反應(yīng)率ORR為39%(n=38/98)，而單藥組患者的ORR*為18%(n=18/100)。其中聯(lián)合組中有13例患者完全患者，單藥組中有7例患者完全緩解。免疫聯(lián)合療法實(shí)力新寵現(xiàn)如今，隨著科學(xué)家對(duì)聯(lián)合免疫**...

3)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和病毒包裝按照effectenetransfectionreagent轉(zhuǎn)染試劑盒的說明書進(jìn)行，取1μg步驟(2)中經(jīng)過線性化的重組質(zhì)粒pad-ifn-3-sp-e1a(δ24bp)-e1b，將其轉(zhuǎn)染入步驟(1)得到的鋪在6孔板中的hek-293細(xì)胞。約7-10天后細(xì)胞完全病變，此時(shí)收集病毒液，于-80℃中保存?zhèn)溆谩?、重組病毒rad-ifn-3-sp-e1a(δ24bp)-e1b的滴度測(cè)定病毒滴度測(cè)定的原理是依據(jù)免疫細(xì)胞化學(xué)法統(tǒng)計(jì)hexon染色陽性的細(xì)胞數(shù)來判定具有***活性的病毒數(shù)量，根據(jù)腺病毒滴度試劑盒上的說明書對(duì)小擴(kuò)和純化后的腺病毒測(cè)定滴度。5、結(jié)晶紫法檢測(cè)溶瘤病毒的...

GM-CSF），用于刺激**特異性免疫反應(yīng)。Pexa-Vec（JX594）針對(duì)肝*的III期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行公司目前主要溶瘤病毒產(chǎn)品為Pexa-Vec（JX594），另外還有兩款JX900系列產(chǎn)品JX970和JX929處于臨床前開發(fā)階段。JX-594在之前的肝*II期臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)良好的臨床效果：（1）安全性：病人對(duì)兩個(gè)劑量組都耐受，只出現(xiàn)類似流感癥狀的副作用；（2）有一例病人出現(xiàn)完全應(yīng)答（CR），***后**消失；（3）高劑量組患者的平均總生存期（OS）為，高于低劑量組的。JX-594在注冊(cè)的臨床試驗(yàn)有19個(gè)，目前進(jìn)展**快的為與Sorafenib聯(lián)合***肝*的全球范圍內(nèi)的多中心臨...

1、×1011、6×1011、×1011、7×1011、×1011、8×1011、×1011、9×1011、×1011或1×1012vp；以及上述兩點(diǎn)間任意的劑量。在另一個(gè)實(shí)施方案中，單次向所述對(duì)象施用溶瘤病毒的劑量為108至1012vp，例如1×108、×108、2×108、×108、3×108、×108、4×108、×108、5×108、×108、6×108、×108、7×108、×108、8×108、×108、9×108、×108、1×109、×109、2×109、×109、3×109、×109、4×109、×109、5×109、×109、6×109、×109、7×109、×10...

GM-CSF），用于刺激**特異性免疫反應(yīng)。Pexa-Vec（JX594）針對(duì)肝*的III期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行公司目前主要溶瘤病毒產(chǎn)品為Pexa-Vec（JX594），另外還有兩款JX900系列產(chǎn)品JX970和JX929處于臨床前開發(fā)階段。JX-594在之前的肝*II期臨床試驗(yàn)中表現(xiàn)良好的臨床效果：（1）安全性：病人對(duì)兩個(gè)劑量組都耐受，只出現(xiàn)類似流感癥狀的副作用；（2）有一例病人出現(xiàn)完全應(yīng)答（CR），***后**消失；（3）高劑量組患者的平均總生存期（OS）為，高于低劑量組的。JX-594在注冊(cè)的臨床試驗(yàn)有19個(gè)，目前進(jìn)展**快的為與Sorafenib聯(lián)合***肝*的全球范圍內(nèi)的多中心臨...

ndv溶瘤病毒及prostatak溶瘤病毒對(duì)a549細(xì)胞系和肺*類***中的**細(xì)胞均有殺傷作用，但是ndv溶瘤病毒及prostatak溶瘤病毒對(duì)肺*類***中的**細(xì)胞的殺傷能力均弱于其對(duì)a549細(xì)胞系中的**細(xì)胞的殺傷能力，說明肺*類***具有的**微環(huán)境能夠影響溶瘤病毒對(duì)肺*細(xì)胞的殺傷能力。肺*類***中，ndv溶瘤病毒的溶瘤能力弱于prostatak溶瘤病毒；在a549細(xì)胞系中，ndv溶瘤病毒的溶瘤能力明顯優(yōu)于prostatak溶瘤病毒。表3由表3可以看出，ndv溶瘤病毒及prostatak溶瘤病毒在a549細(xì)胞系和肺*類***中均能誘導(dǎo)免疫細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，但是ndv溶瘤病毒...

將新城疫病毒ndv溶瘤病毒作為待測(cè)溶瘤病毒，將腺病毒prostatak溶瘤病毒作為參比溶瘤病毒)分別ganranzhong劉類***24，48和72小時(shí)；用cck8試劑盒(cellcountingkit8)檢測(cè)細(xì)胞活力，分別在培養(yǎng)的第23、47和71小時(shí)，向每孔加入10μl的cck8溶液，繼續(xù)培養(yǎng)1小時(shí)，用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處吸光度，計(jì)算溶瘤病毒對(duì)zhong劉細(xì)胞的殺傷率(％)。測(cè)試結(jié)果如表2。4、檢測(cè)溶瘤病毒誘導(dǎo)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗zhong劉免疫作用的能力取新抽取的患者外周血，于800×g/min的離心條件下離心10min，取上層血漿滅活后離心并吸取上清，轉(zhuǎn)移至離心管中備用；向血液...

第二培養(yǎng)物中溶瘤病毒對(duì)zhong劉細(xì)胞的殺傷率越高，表明溶瘤病毒ganranzhong劉細(xì)胞后殺傷zhong劉細(xì)胞的能力越強(qiáng)；第三培養(yǎng)物中溶瘤病毒的細(xì)胞因子促表達(dá)能力，反映的是溶瘤病毒ganranzhong劉細(xì)胞后誘導(dǎo)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗zhong劉免疫作用的能力，第三培養(yǎng)物中的白細(xì)胞介素-2和/或γ-干擾素的水平越高，溶瘤病毒的細(xì)胞因子促表達(dá)能力越強(qiáng)，溶瘤病毒ganranzhong劉細(xì)胞后誘導(dǎo)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗zhong劉免疫作用的能力也越強(qiáng)。本公開的方法通過上述三方面檢測(cè)，能夠***表征溶瘤病毒殺傷zhong劉細(xì)胞的有效性。本公開的上述方法采用zhong劉類***作為溶瘤病毒有效性檢...

c2、將所述混合培養(yǎng)液與溶瘤病毒混合培養(yǎng)3-5h，所述溶瘤病毒的用量為1-100moi?？蛇x地，步驟a中，所述檢測(cè)所述培養(yǎng)物中的溶瘤病毒的復(fù)制水平，包括：a1、獲取所述培養(yǎng)物中的溶瘤病毒，得到待測(cè)病毒；a2、將所述待測(cè)病毒與所述溶瘤病毒的宿主細(xì)胞混合培養(yǎng)12-96h，然后檢測(cè)所述待測(cè)病毒在所述宿主細(xì)胞中的病毒滴度；其中，所述待測(cè)病毒在所述宿主細(xì)胞中的病毒滴度越高，所述培養(yǎng)物中的溶瘤病毒的復(fù)制水平越高?？蛇x地，步驟a1中，所述獲取所述培養(yǎng)物中的溶瘤病毒，得到待測(cè)病毒，包括：將所述培養(yǎng)物進(jìn)行凍融處理2-8次，然后進(jìn)行離心并收集上清液，得到待測(cè)病毒液，所述待測(cè)病毒液中含有所述待測(cè)病毒?？蛇x地...

本發(fā)明沒有位于依據(jù)在前發(fā)明的此類公開內(nèi)容之前的權(quán)利。術(shù)語“溶瘤病毒”是指能夠在*癥或者具有過度增殖的細(xì)胞中選擇性復(fù)制，從而減緩其生長或者使其死亡的病毒，同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞沒有影響或影響很小。示例性的溶瘤病毒包括水泡性口炎病毒(vsv)，新城疫病毒(ndv)，單純皰疹病毒(hsv)，呼腸孤病毒，麻疹病毒，逆轉(zhuǎn)錄病毒，流感病毒，辛比斯病毒，痘苗病毒和腺病毒等(參見，例如，kirn等，：781)。(2001)；coffey等，science282：1332(1998)；lorence等，：6017(1994)；和peng等，blood98：2002(2001))?！毙g(shù)語“干擾素”指由多種真核細(xì)胞...