成都熒光染料IR780

    小動物***熒光成像技術(shù)是現(xiàn)***物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的一項重要技術(shù)，因其具有操作簡單、實時直觀、靈敏度高、實驗成本低等特點，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究及藥物開發(fā)等方面。納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，旨在解決傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)面臨的各種醫(yī)學(xué)挑戰(zhàn)，包括生物利用度差，靶向特異性受損，全身和***毒性等。納米材料具有很多與眾不同的優(yōu)點，比如多功能性、大的負載量、靶向性、血液循環(huán)時間長等。納米材料在生物醫(yī)學(xué)中起著關(guān)鍵作用，可以有效攜帶成像探針、***劑或生物材料并傳遞至靶點，如特定的***、組織甚至細胞。光學(xué)成像主要包括生物發(fā)光（ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，ＢＬＩ）和焚光成像（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ，Ｆ１）兩種技術(shù)。前者利用焚光素酶基因（如ＦＬＵＣ，ＲＬＵＣ，ＧＬＵＣ）標記細胞或ＤＮＡ，其表達產(chǎn)物與莖火蟲素類底物反應(yīng)產(chǎn)生熒光。后者包括多種熒光蛋白基因（如ＧＦＰ，ＲＦＰ，ＹＦＰ等）、有機熒光染料、熒光上轉(zhuǎn)換納米粒子、量子點等的應(yīng)用。 Super Fluor 555（效果同Alexa Fluor 555）琥珀酰亞胺酯熒光染料。成都熒光染料IR780

1.DiD，DiO，DiI，DiR和DiS細胞膜染色液制備（1）配置DMSO或EtOH儲存液：儲存液用DMSO或EtOH配置濃度1～5mM。注意：未使用的儲存液保存在-20°C，避免反復(fù)凍融。（2）工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5μM的工作液。注意：工作液的**終濃度是根據(jù)不同細胞和實驗的經(jīng)驗來配制?？梢詮耐扑]濃度的十倍以上尋找比較好條件。

2.懸浮細胞染色（1）懸浮細胞密度為1×106/mL加入到工作液中。（2）在37℃培養(yǎng)細胞2～20分鐘，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同。（3）染色細胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。（4）傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。（5）重復(fù)（3），（4）步驟兩次以上。 湖南成都熒光染料南京星葉生物熒光染料標記蛋白。

常用抗體標記熒光染料的特性及其應(yīng)用

1、FITC:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長525nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)可用于熒光顯微鏡技術(shù)4)熒光強度易受PH值影響，PH值降低時其熒光強度減弱。2、AlexaFluor488:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長519nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀:2)在流式細胞儀的FL1通道檢測;3)具有超乎尋常的光穩(wěn)定性，非常適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）質(zhì)優(yōu)價廉，歡迎咨詢。3、Cy3:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長570nm。1)其標記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細胞儀;2)在流式細胞儀的FL2通道檢測:3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細胞術(shù)，熒光強度低于PE。

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。

注：建議對每只動物模型都需要建立熒光素酶動力學(xué)曲線，從而確定比較高信號檢測時間和信號平臺期。保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對儲存液充氮氣或氬氣（防止氧化），穩(wěn)定性和保存時間更長。 注射方式，動物類型以及體重等都會影響信號的發(fā)射，因此建議每次實驗都要做熒光素酶動力學(xué)曲線，確定比較好信號平臺期和比較好的檢測時間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻來看，鉀鹽的使用率遠高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實驗。兩者功效相同。 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列（效果同Alexa Fluor 系列）。遼寧北京熒光染料

FITC熒光染料標記方法。成都熒光染料IR780

3.粘壁細胞的染色（1）使粘壁的細胞在無菌實驗室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。（4）在37℃培養(yǎng)細胞2～20分鐘，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細胞儀的檢測DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細胞儀檢測。 成都熒光染料IR780