成都熒光染料Fluor 750

熒光染料標(biāo)記蛋白或肽技術(shù)是一種常見的蛋白質(zhì)體外標(biāo)記技術(shù)。除了GFP等熒光蛋白的融合表達外，目標(biāo)蛋白還可以通過熒光染料標(biāo)記直接進行下游實驗操作，如***跟蹤、細(xì)胞分選等。

FITC熒光標(biāo)記的原理是什么？

熒光標(biāo)記所依賴的化合物稱為熒光材料。熒光材料是指具有共軛雙鍵系統(tǒng)化學(xué)結(jié)構(gòu)的化合物。當(dāng)受到紫外線或藍(lán)紫光的照射時，它可以被刺激為刺激狀態(tài)。當(dāng)激發(fā)狀態(tài)恢復(fù)到基本狀態(tài)時，它會發(fā)出熒光。蛋白質(zhì)熒光標(biāo)記技術(shù)利用熒光材料的共價結(jié)合在目標(biāo)分子的基團上，利用其熒光特性提供研究對象的信息。 Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖?。成都熒光染料Fluor 750

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。成都熒光染料Fluor 750D-熒光素鉀鹽熒光染料。

三、流式細(xì)胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細(xì)胞中加入感興趣的藥物進行干預(yù)，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細(xì)胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細(xì)胞，37℃避光孵育15min或更長時間?！咀⒁狻浚河捎诩?xì)胞種類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據(jù)預(yù)實驗或參考文獻自行調(diào)整。4、用流式細(xì)胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數(shù)生長期A549細(xì)胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細(xì)胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察.

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強度**增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細(xì)胞染色，這類染料在整個細(xì)胞膜上擴散，比較好濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細(xì)胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細(xì)胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在***成像中用來示蹤。D-熒光素鉀鹽南京星葉生物科技有限公司。

管可用于實驗室的熒光團數(shù)量眾多，但這些染料通常屬于以下三組之一：熒光染料:這些是用于在體外標(biāo)記生物相關(guān)分子的小型有機天然或合成熒光分子。該組中的一些熒光染料包括熒光素、溴化乙錠和花青。熒光蛋白:這些是較大的、生物制造的蛋白質(zhì)，由于它們的大分子結(jié)構(gòu)而發(fā)出熒光。GFP、RFP和YFP是屬于該組的一些染料。量子點:這些高熒光合成納米晶體由半導(dǎo)體材料制成。隨著熒光基本特性的廣泛應(yīng)用和該領(lǐng)域的顯著進步，已經(jīng)針對特定應(yīng)用和儀器開發(fā)和優(yōu)化了數(shù)百種活性熒光染料。同樣，多年來，大量復(fù)雜的熒光技術(shù)（例如，F(xiàn)RET、TRF、FP、FRAP、FACS、FCS）也在不斷發(fā)展。熒光染料，由于靈敏度高，操作方便，逐漸取代了放射性同位素作為檢測標(biāo)記，其應(yīng)用于熒光探針，細(xì)胞染色等。甘肅北京熒光染料

生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在體內(nèi)表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。成都熒光染料Fluor 750

SUPERGreenI（10,000×DMSO溶液，電泳級）儲存條件及注意事項4℃避光可保存12個月。本品用DMSO溶解，因DMSO的熔點是18.5℃，使用前請放置到室溫充分溶解。SUPERGreenI核酸染料特點●無毒性：屬花菁類染料，容易生物降解，無致*毒性。●靈敏度高：至少可檢出20pgDNA，高于EB染色法25～100倍。●信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低?！癫僮骱唵危簾o須脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀或可見光透射儀觀察?！襁m用范圍廣：可適用于多種凝膠電泳方法：瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠電泳、脈沖電場凝膠電泳和毛細(xì)管電泳等?！袷褂梅奖悖簩Ψ肿由飳W(xué)中常用的酶（如：Taq酶、反轉(zhuǎn)錄酶、內(nèi)切酶、T4連接酶等）沒有抑制作用?！窠?jīng)濟：價格比銀染便宜。成都熒光染料Fluor 750