吉林轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時(shí)具有高穩(wěn)定性。正因?yàn)槿绱?，它們能夠成功地穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞，并與自然發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)途徑結(jié)合，具有將特定顆粒帶到預(yù)定目標(biāo)位置的***準(zhǔn)確性。由于納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和保護(hù)化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲(chǔ)存在核內(nèi)體中，因此納米顆粒作為細(xì)胞過(guò)程成像的工具，作為將藥物攜帶到細(xì)胞內(nèi)的各種系統(tǒng)的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過(guò)官能團(tuán)和非共價(jià)鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結(jié)合的特性類(lèi)似于體內(nèi)DNA和抑制蛋白之間的自然結(jié)合。在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸外源DNA的效率受到兩個(gè)主要因素的限制:內(nèi)吞作用，穿過(guò)細(xì)胞膜的方式，或適當(dāng)?shù)募?xì)胞受體***和內(nèi)體屏障的破壞。研究表明，在細(xì)胞內(nèi)，與熒光標(biāo)記物連接的納米顆粒聚集在靠近細(xì)胞核的溶酶體中，但它們不會(huì)穿過(guò)核膜。事實(shí)上，這并沒(méi)有干擾特定基因結(jié)構(gòu)編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)，這證明了納米顆粒可以參與內(nèi)體途徑，并可以通過(guò)細(xì)胞質(zhì)將DNA運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞核。不同種類(lèi)的化學(xué)物質(zhì)有不同的納米粒子，它們具有不同的性狀、化學(xué)性質(zhì)、物理性質(zhì)和結(jié)構(gòu)。納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。吉林轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染

脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過(guò)在腎細(xì)胞中添加魚(yú)精蛋白，設(shè)法提高了固體脂質(zhì)納米顆粒的轉(zhuǎn)染效率，但與不添加魚(yú)精蛋白的對(duì)照組相比，相同的多功能單元，DNA/魚(yú)精蛋白/SLN(固體脂質(zhì)納米顆粒)，降低了HEK 293細(xì)胞系(人胚胎腎細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率。這給了我們希望，通過(guò)加入必要的配體的可能性，使用納米顆粒的轉(zhuǎn)染可能會(huì)調(diào)整到給定的細(xì)胞類(lèi)型。Bahrami et al.經(jīng)表明，不同種類(lèi)的納米顆粒以不同的方式與細(xì)胞膜結(jié)合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀，也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進(jìn)入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實(shí)驗(yàn)表明，納米顆粒的大小對(duì)COS-1(非洲綠猴腎細(xì)胞)和HEK 293細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時(shí)，轉(zhuǎn)染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中，小顆粒和大顆粒的細(xì)胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的，這表明使用納米顆粒進(jìn)行基因傳遞的效率受到許多因素的影響，它們的使用應(yīng)該根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型和應(yīng)用條件進(jìn)行具體調(diào)整。此外，用作納米顆粒分散劑的不同物質(zhì)，如十六種不同類(lèi)型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白，對(duì)其在溶液中的團(tuán)聚有***影響。遼寧貼壁細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。

質(zhì)子泵抑制劑可以通過(guò)基于從一個(gè)供體蛋白到受體蛋白的能量轉(zhuǎn)移的物理測(cè)量來(lái)評(píng)估，也可以通過(guò)化學(xué)測(cè)量來(lái)評(píng)估，在化學(xué)測(cè)量中，表達(dá)的蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的相互作用活性可以在刺激時(shí)通過(guò)適當(dāng)?shù)膱?bào)告系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)。后一種基于熒光素酶的方法被稱為生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)，它是熒光共振能量轉(zhuǎn)移研究質(zhì)子泵抑制劑的替代方法。多個(gè)質(zhì)粒的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于轉(zhuǎn)染，其中包括將編碼Cas9蛋白和引導(dǎo)RNA的質(zhì)粒遞送到宿主細(xì)胞，使用CRISPR/Cas9基因組工程系統(tǒng)進(jìn)行基因組編輯。除了使用多個(gè)質(zhì)粒外，雙鏈載體是另一種將不同基因傳遞到宿主細(xì)胞的方法。雙鏈載體是一種能夠表達(dá)兩種不同基因的載體，通過(guò)一個(gè)內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)連接，只有一個(gè)啟動(dòng)子。

Severinoetal.進(jìn)行的研究也指出了陽(yáng)離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實(shí)現(xiàn)了人動(dòng)力蛋白的表達(dá)，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細(xì)胞毒性，并導(dǎo)致活細(xì)胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復(fù)合物和由魚(yú)精蛋白、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細(xì)胞系上的轉(zhuǎn)染效率:CHO(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)、HEK293(人胚胎腎細(xì)胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)和A17(小鼠*細(xì)胞)。魚(yú)精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細(xì)胞系中更有效地實(shí)現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達(dá)，即使不同細(xì)胞系對(duì)轉(zhuǎn)染的敏感性不同。陽(yáng)離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚合物作為納米載體，成功地將hESC(人類(lèi)胚胎干細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率提高了四倍，同時(shí)保持較低的細(xì)胞毒性。這給我們帶來(lái)了希望，納米顆粒能夠與具有所需官能團(tuán)的其他化合物的必要添加一起形成***有效的核酸遞送平臺(tái)。不同種類(lèi)的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。

在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過(guò)不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長(zhǎng)。這些結(jié)果來(lái)源于使用表達(dá)促炎細(xì)胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長(zhǎng)抑制似乎是由CpG基序引起的，因?yàn)檫@些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長(zhǎng)的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一個(gè)恰當(dāng)?shù)睦邮荌L-12的能力，在響應(yīng)含CpG基序時(shí)產(chǎn)生，引發(fā)抗血管生成反應(yīng)。其他細(xì)胞因子，如IFN-g(自身為CpG誘導(dǎo)的細(xì)胞因子)誘導(dǎo)的細(xì)胞因子，即IP10和Mig，也能夠具有抗血管生成特性。但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響細(xì)胞、不對(duì)細(xì)胞造成損害的技術(shù)也至關(guān)重要。福建南京轉(zhuǎn)染試劑

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個(gè)因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類(lèi)型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。吉林轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染

基于病毒的轉(zhuǎn)染，或者更具體地稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細(xì)胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒，如慢病毒，通常用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。相比之下，腺病毒、腺相關(guān)病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的病毒載體。與非病毒轉(zhuǎn)染相比，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)被***認(rèn)為是一種轉(zhuǎn)染難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(如原代細(xì)胞)的高效方法。一般來(lái)說(shuō)，逆轉(zhuǎn)錄病毒只能用于轉(zhuǎn)染分裂細(xì)胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉(zhuǎn)染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。然而，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)與較高的細(xì)胞毒性相關(guān)，并可能造成病毒***的風(fēng)險(xiǎn)。病毒載體通常包含一個(gè)病毒包膜，它包圍并保護(hù)病毒。表面蛋白可能存在于某些類(lèi)型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進(jìn)與宿主細(xì)胞的接觸和通信。病毒遺傳物質(zhì)被包裹在衣殼中，進(jìn)入宿主細(xì)胞后，衣殼將被打開(kāi)。與腺病毒、aav和皰疹病毒的基因組不同，這些病毒的基因組是單獨(dú)維持的，逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組被整合到宿主基因組中。通常，腺病毒和皰疹病毒攜帶雙鏈DNA, AAV攜帶單鏈DNA，而逆轉(zhuǎn)錄病毒攜帶RNA。吉林轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染