武漢熒光染料APC

Hoechst33342是一種可透過細(xì)胞膜并對DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst33342常用于細(xì)胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350nm和460nm?？扇苡谒?.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細(xì)胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機(jī)熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。武漢熒光染料APC

三、流式細(xì)胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細(xì)胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進(jìn)行藥物刺激，在細(xì)胞中加入感興趣的藥物進(jìn)行干預(yù)，繼續(xù)培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細(xì)胞，37℃避光孵育15min或更長時(shí)間?！咀⒁狻浚河捎诩?xì)胞種類和實(shí)驗(yàn)體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時(shí)間可以根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)或參考文獻(xiàn)自行調(diào)整。4、用流式細(xì)胞儀檢測。

四、實(shí)驗(yàn)案例1、取對數(shù)生長期A549細(xì)胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細(xì)胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. 江西熒光染料水溶目前常用標(biāo)記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。

選擇熒光染料時(shí)要考慮那些因素：激發(fā)波長處的消光系數(shù)應(yīng)盡可能高：消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產(chǎn)率應(yīng)該盡可能高：這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度。熒光染料應(yīng)該是光穩(wěn)定的：遺憾的是，比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。光致變色行為：對于STORM實(shí)驗(yàn)，您需要一個(gè)閃爍的熒光團(tuán)。但是，對于分子跟蹤實(shí)驗(yàn)，您***不想要閃爍的熒光團(tuán)?；?死細(xì)胞滲透性。您想要的反應(yīng)側(cè)基（例如HaloTag、抗體等）。當(dāng)您使用多個(gè)熒光探針時(shí)，尤其是當(dāng)您量化共定位時(shí)，請謹(jǐn)慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨(dú)測試所有熒光探針以評估滲透。

與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm，比較大發(fā)射波長為521nm（通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光），熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它，并且在與抗體結(jié)合時(shí)用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價(jià)格低廉且易于使用，使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。

羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細(xì)胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開關(guān)，病毒表面修飾，化學(xué)傳感器，硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來區(qū)分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率，而在每個(gè)氮處具有兩個(gè)烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化，量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點(diǎn)：--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機(jī)溶劑中變?yōu)闊o色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針，必須對其進(jìn)行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團(tuán)的修飾來實(shí)現(xiàn)。與TRITC一樣，羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm（比較大吸收波長）和576nm（比較大發(fā)射）。PI是一種可對DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。武漢熒光染料APC

生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。武漢熒光染料APC

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度**增強(qiáng)，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細(xì)胞染色，這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在***成像中用來示蹤。武漢熒光染料APC