免疫組化。染色 免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評(píng)估預(yù)后，所以在做免疫組化過(guò)程中的質(zhì)控問(wèn)題處理尤其重要［1］。隨著免疫組化試劑新種類(lèi)不斷出現(xiàn)及方法的改進(jìn)，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡(jiǎn)便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的技術(shù)，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)......免疫組化可以輔助病理診斷、指導(dǎo)診斷、評(píng)估預(yù)后，所以在做免疫組化過(guò)程中的質(zhì)控問(wèn)題處理尤其重要，隨著免疫組化試劑新種類(lèi)不斷出現(xiàn)及方法的改進(jìn)，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標(biāo)記更加簡(jiǎn)便、快捷，更加規(guī)范化。免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化染色技術(shù)是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)性很強(qiáng)的技術(shù)，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，都可以直接影響免疫組化結(jié)果。免疫組化病理實(shí)驗(yàn)切片 染色等找融享生物 。安徽特殊染色免疫組化檢測(cè)哪里有
（1）ABC復(fù)合物的制備：（2）ABC法反應(yīng)原理6．SP或SAP法（過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉卵白素或過(guò)氧化物酶標(biāo)記的堿性磷酸酶染色）Streptavidin/peroxidaseorstrepta-vidin/alkalinephosphatase）※該法是ABC法基礎(chǔ)上的進(jìn)一步改良，使卵白素與鏈霉（而非生物素）結(jié)合，而后再結(jié)合PO。它有4個(gè)亞基可與生物素結(jié)合，靈敏特異，背景低，成本低?，F(xiàn)在還有plus盒。優(yōu)點(diǎn)是：更簡(jiǎn)便，放大倍數(shù)↑，等電點(diǎn)中性更適合組織。分子量小，穿透力↑。7．蛋白A—金法（Protein—Agoldmethod）~多用于電鏡8．雙重組化染色法應(yīng)用雙重免疫組織化學(xué)可在同一張切片，同一細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)內(nèi)同時(shí)顯示兩種不同的抗原。9．免疫金—銀染色法（Immunogold—silverstainingIGSS）固定——見(jiàn)前述注意事項(xiàng)：1．固定劑的選擇：因組織而不同，注意質(zhì)量和性能。2．固定方式的選擇：①浸漬固定（參考文獻(xiàn)）②灌注固定（+后固定）③蒸汽固定免疫組化染色步驟（以ABC法為例）1．切片脫蠟入水，入PBS洗三次/15分鐘。2．封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。用新配置的（在PAS或—HCL緩沖液）室溫，30分鐘。3．水洗，入PBS，洗三次，每次5分鐘。4．減少非特異性著色用稀釋20倍的正常血清（產(chǎn)生二次抗體動(dòng)物血清?。?，室溫，30分鐘。北京免疫組化實(shí)驗(yàn)公司哪里有比較好的免疫組化服務(wù)融享生物。
免疫組化技術(shù)是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結(jié)合的特點(diǎn)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑通過(guò)借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一門(mén)組化技術(shù)。在病理診斷、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究工作中免疫組化技術(shù)已成為非常重要的手段。免疫組化顯色是一種酶促反應(yīng)，它通過(guò)連結(jié)在抗原抗體復(fù)合物上的過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶與底物DAB發(fā)生反應(yīng)，生成有色的復(fù)合物沉淀在組織細(xì)胞中的抗原部位。由于標(biāo)本組織來(lái)源不同，細(xì)胞分化不一，抗原含量不等，顯色反應(yīng)所需時(shí)間不可能完全一致。整個(gè)免疫組化過(guò)程步驟較多，每步應(yīng)按操作要求嚴(yán)格操作，脫蠟一定要充分。每步PBS沖洗時(shí)間、次數(shù)一定不能省略，因PBS液內(nèi)含有鹽，
拍照
有條件的話比較好立即拍照，若不能及時(shí)拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序;應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查;防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡;檢查時(shí)間每次以1~2h為宜，超過(guò)90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱或褪色;激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射，會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象;所以較多不得超過(guò)2~3h;熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開(kāi)始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再啟用時(shí)，須待燈光充分冷卻后才能點(diǎn)燃。天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開(kāi)啟15-30分鐘后;標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā);使用的玻片等載體，都必須厚度均勻，無(wú)明顯的自發(fā)熒光，如果使用油鏡，還必須保證鏡油為無(wú)熒光鏡油;電源比較好裝穩(wěn)壓器，否則電壓不穩(wěn)不只會(huì)降低汞燈的壽命，也會(huì)影響鏡檢的效果。
上海融享生物做免疫組化，HE染色，免疫熒光。
經(jīng)驗(yàn)總結(jié)編輯
做過(guò)病理實(shí)驗(yàn)的人都知道，實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把它做好，還是需要花上很長(zhǎng)一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。我從事病理實(shí)驗(yàn)已有6年多了，在這段時(shí)間里，我做過(guò)許許多多病理相關(guān)實(shí)驗(yàn)，剛開(kāi)始啥也不懂，一味按照網(wǎng)上操作流程來(lái)做，但做的結(jié)果往往并不是十分理想，較好終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的瀏覽和學(xué)習(xí)，從一些在論壇內(nèi)學(xué)習(xí)、請(qǐng)教，并結(jié)合實(shí)踐操作，我經(jīng)歷了初級(jí)——查找資料和摸索方法；中級(jí)——問(wèn)題求助和不斷總結(jié)；高級(jí)——難題解答和經(jīng)驗(yàn)分享這三個(gè)階段，也學(xué)到了不少知識(shí)，積累了很多寶貴經(jīng)驗(yàn)，與大家一起分享下。
關(guān)于掉片
HE、Masson、番紅O、Nissl、Mallory等染色方法很少有掉片現(xiàn)象；免疫組化和細(xì)胞凋亡檢測(cè)我們采用專(zhuān)門(mén)購(gòu)買(mǎi)的防脫片，由于整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程比較長(zhǎng)，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生掉片是很正常的現(xiàn)象。對(duì)于容易掉片的組織，如：骨組織、腦組織、皮膚組織等掉片有時(shí)候是不可避免的。
病理實(shí)驗(yàn) 免疫熒光,HE染色，病理切片，蠟塊包埋等服務(wù)實(shí)驗(yàn)找上海融享生物更專(zhuān)業(yè)。江西IHC免疫組化技術(shù)
免疫組化找上海融享生物科技有限公司。安徽特殊染色免疫組化檢測(cè)哪里有
DAB顯色
背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時(shí)間不是固定的，主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間，到出現(xiàn)特異性染色較強(qiáng)而本底著色較淺時(shí)即可沖洗；DAB顯色時(shí)間很短（如幾秒或幾十秒）就出現(xiàn)很深的棕褐色，這很可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)高或抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間；此外，若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深，還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全，需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間；DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)（如超過(guò)十幾分鐘）才出現(xiàn)陽(yáng)性染色，一方面可能說(shuō)明你的抗體濃度過(guò)低或孵育時(shí)間過(guò)短（比較好一抗4℃過(guò)夜）；另一方面就是封閉時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。
安徽特殊染色免疫組化檢測(cè)哪里有