黑龍江免疫學(xué)免疫組化機(jī)構(gòu)電話

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-09-15

DAB顯色

背景的深淺和特異性染色的深淺均可以由DAB孵育條件決定。DAB顯色時(shí)間不是固定的,主要由顯微鏡下控制顯色時(shí)間,到出現(xiàn)特異性染色較強(qiáng)而本底著色較淺時(shí)即可沖洗;DAB顯色時(shí)間很短(如幾秒或幾十秒)就出現(xiàn)很深的棕褐色,這很可能說明你的抗體濃度過高或抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng),需要下調(diào)抗體濃度或縮短你的抗體孵育時(shí)間;此外,若很短時(shí)間就出現(xiàn)背景很深,還有可能你前面的封閉非特異性蛋白不全,需要延長(zhǎng)封閉時(shí)間;DAB顯色時(shí)間很長(zhǎng)(如超過十幾分鐘)才出現(xiàn)陽(yáng)性染色,一方面可能說明你的抗體濃度過低或孵育時(shí)間過短(比較好一抗4℃過夜);另一方面就是封閉時(shí)間過長(zhǎng)。


專業(yè)從事免疫實(shí)驗(yàn)的整體方案。黑龍江免疫學(xué)免疫組化機(jī)構(gòu)電話

免疫組織化學(xué)(Immunohisochemistry)檢測(cè)技術(shù)曾被公認(rèn)為病理學(xué)發(fā)展史上的第二個(gè)里程碑,此項(xiàng)技術(shù)發(fā)展到現(xiàn)在,較好充實(shí)了病理學(xué)的內(nèi)容,使病理診斷結(jié)果更精確,將病理學(xué)提高到了形態(tài)和功能相結(jié)合的水平。免疫組織化學(xué)方法的敏感性和特異性直接影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。近兩年來,在本科同志的配合下,筆者已做免疫組化420例,取得了很好的效果,并且明顯的提高了診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性,支持了對(duì)臨床病人的診療?,F(xiàn)提出以下五點(diǎn)供同道借鑒內(nèi)蒙古組織免疫組化機(jī)構(gòu)哪里有免疫組化找上海融享生物科技有限公司。

物質(zhì)所具有的抗原性主要由分布在抗原表面的抗原決定簇決定。固定液的固定對(duì)免疫組化的正確結(jié)果極其重要,此液能使抗原保存良好。抗原修復(fù)的好壞直接影響著免疫組化檢測(cè)結(jié)果的可靠性。在進(jìn)行免疫組化時(shí)并非所有的抗原都要進(jìn)行抗原修復(fù),抗原性保存良好或基本保存者不需要修復(fù)。目前抗原修復(fù)的方法主要有蛋白酶消化法、硼氫化鈉(NaBH4)修復(fù)法和熱修復(fù)法。較常用的是熱修復(fù)法,尤其是細(xì)胞核抗原經(jīng)熱修復(fù)后,其染色效果特別好。熱修復(fù)包括單純加熱、高壓加熱和微波加熱3種,其原理是以熱效應(yīng)來引導(dǎo)抗原決定基重新暴露。熱修復(fù)法影響抗原修復(fù)的關(guān)鍵因素有兩個(gè):一是溫度,至少要達(dá)到100 ℃,時(shí)間3~15 min;二是修復(fù)液的pH值為7.5~8.5。所以我們必須清楚影響抗原的因素及各種抗原修復(fù)的方法,嚴(yán)格按照抗體說明書進(jìn)行抗原修復(fù)。鑒于抗原修復(fù)的方法較多,在實(shí)際工作中,究竟選用何種抗原修復(fù),應(yīng)根據(jù)抗體種類予以選擇,必要時(shí)可以多種方法同時(shí)使用,這樣使其更具有針對(duì)性,標(biāo)記結(jié)果更理想。組化染色結(jié)果有很大影響。

拍照

有條件的話比較好立即拍照,若不能及時(shí)拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和濕度。使用熒光顯微鏡注意嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進(jìn)行操作,不要隨意改變程序;應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查;防止紫外線對(duì)眼睛的損害,在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡;檢查時(shí)間每次以1~2h為宜,超過90min,超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降,熒光減弱;標(biāo)本受紫外線照射3~5min后,熒光也明顯減弱或褪色;激發(fā)光長(zhǎng)時(shí)間的照射,會(huì)發(fā)生熒光的衰減和淬滅現(xiàn)象;所以較多不得超過2~3h;熒光顯微鏡光源壽命有限,標(biāo)本應(yīng)集中檢查,以節(jié)省時(shí)間,保護(hù)光源。天熱時(shí),應(yīng)加電扇散熱降溫,新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再啟用時(shí),須待燈光充分冷卻后才能點(diǎn)燃。天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。關(guān)閉汞燈至少在開啟15-30分鐘后;標(biāo)本染色后立即觀察,因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存,可延緩熒光減弱時(shí)間,防止封裱劑蒸發(fā);使用的玻片等載體,都必須厚度均勻,無明顯的自發(fā)熒光,如果使用油鏡,還必須保證鏡油為無熒光鏡油;電源比較好裝穩(wěn)壓器,否則電壓不穩(wěn)不只會(huì)降低汞燈的壽命,也會(huì)影響鏡檢的效果。


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減少或消除非特異性染色的方法  組織中非抗原抗體反應(yīng)出現(xiàn)的陽(yáng)性染色稱為非特異性背景染色,較好常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。有效方法是在用首先抗體前加制備第二抗體動(dòng)物之非免疫血清(1:5-1:20)封閉組織上帶電荷基團(tuán)而除去與首先抗體非特異性結(jié)合。必要時(shí)可加入2%-5%牛血清白蛋白,可進(jìn)一步減少非特異性染色。作用時(shí)間為10-20min。也可用除制備首先抗體以外的其它動(dòng)物血清(非免疫的)。有明顯溶血的血清不能用,以免產(chǎn)生非特異性染色。免疫熒光染色時(shí),可用0.01%伊文氏蘭(PBS溶液)稀釋熒光抗體,對(duì)消除背景的非特異性熒光染色有很好的效果。當(dāng)然使用特異性高、效價(jià)高的首先抗體是較好重要的條件。洗滌用的緩沖液中加入0.85%~1%NaCl成為高鹽溶液,充分洗滌切片,能有效的減少非特異性結(jié)合而減少背景染色。高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序找融享生物。山西動(dòng)物實(shí)驗(yàn)免疫組化檢查機(jī)構(gòu)

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免疫熒光方法

是較好早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用較廣。2)免疫酶標(biāo)方法

免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來的技術(shù)?;驹硎窍纫悦笜?biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是較好常用的技術(shù)。該方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是:定位準(zhǔn)確,對(duì)比度好,染色標(biāo)本可長(zhǎng)期保存,適合于光、電鏡研究等。免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,其特異性和靈敏度都在不斷提高,使用也越來越方便。在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測(cè)系統(tǒng)等。


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