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    PacBio平臺(tái)技術(shù)關(guān)鍵DNA聚合酶，該技術(shù)得到的序列讀長(zhǎng)主要跟DNA聚合酶的活性有關(guān)，它主要受激光對(duì)其造成的損傷所影響。熒光基團(tuán)標(biāo)記在核苷酸3'端磷酸上，在DNA合成過(guò)程中，3'端的磷酸鍵隨著DNA鏈的延伸被斷開(kāi)，標(biāo)記物被棄去，減少了DNA合成的空間位阻，維持DNA鏈連續(xù)合成，延長(zhǎng)了測(cè)序讀長(zhǎng)。ZMW(零模波導(dǎo)孔)，將反應(yīng)信號(hào)與周?chē)坞x堿基的強(qiáng)大熒光背景進(jìn)行區(qū)分，在一個(gè)反應(yīng)管中有許多這樣的圓形納米小孔，其外徑*有100nm，激光從底部打出后不能穿透小孔進(jìn)入上方溶液區(qū)，能量被限制在一個(gè)小范圍里，使得熒光信號(hào)*來(lái)自這個(gè)小反應(yīng)區(qū)域，孔外其它游離核苷酸單體依然留在黑暗中，從而實(shí)現(xiàn)將背景熒光降到比較低。PacBio平臺(tái)技術(shù)優(yōu)勢(shì)1.近乎完美的一致性和準(zhǔn)確性三代測(cè)序單堿基錯(cuò)誤率雖然很高，但是這種單堿基的錯(cuò)誤是隨機(jī)發(fā)生的，因此，對(duì)同一段序列測(cè)序覆蓋多次就能夠進(jìn)行糾錯(cuò)，一般覆蓋到10X以上的深度就能達(dá)到。2.不存在測(cè)序的偏好性因?yàn)镾MRT技術(shù)在樣本制備時(shí)無(wú)需PCR擴(kuò)增，對(duì)于某些具有極端的堿基組成的核酸區(qū)域，三代測(cè)序也是無(wú)偏好性的，同時(shí)也不受回文序列的影響。3.序列準(zhǔn)確比對(duì)二代測(cè)序得到的序列由于長(zhǎng)度不夠，在進(jìn)行比對(duì)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)很多錯(cuò)誤匹配，從而造成假陽(yáng)性SNP位點(diǎn)。 邁杰多平臺(tái)的研究?jī)?yōu)勢(shì)以及多組學(xué)數(shù)據(jù)的挖掘能力，促進(jìn)產(chǎn)學(xué)研醫(yī)結(jié)合，加速項(xiàng)目成果轉(zhuǎn)化，創(chuàng)新科技產(chǎn)品研發(fā)。山西專(zhuān)注邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)值得推薦

  上述任一所述復(fù)合擴(kuò)增體系還可包括進(jìn)行pcr擴(kuò)增反應(yīng)所需的試劑。所述“進(jìn)行pcr擴(kuò)增反應(yīng)所需的試劑”不包括pcr擴(kuò)增反應(yīng)所需的引物。上述任一所述復(fù)合擴(kuò)增體系可為20μl，由10μl2×mastermix、上述任一所述引物組合和模板組成。2×mastermix具體可為德國(guó)qiagen公司的產(chǎn)品。所述模板具體可為濃度為1ng/μl的標(biāo)準(zhǔn)品2800m的水溶液或樣品的基因組dna。所述樣品可為人口腔拭子。所述標(biāo)準(zhǔn)品2800m具體可為promega公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為dd7251。含有上述任一所述引物組合的試劑盒也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍；所述試劑盒的用途可為(h1)-(h5)中的至少一種：(h1)str分型；(h2)y-str分型；(h3)個(gè)體識(shí)別；(h4)親權(quán)鑒定；(h5)種族推斷。本發(fā)明還保護(hù)上述任一所述復(fù)合擴(kuò)增體系或上述任一所述試劑盒的制備方法；該制備方法包括將上述任一所述引物組合中的各條引物單獨(dú)包裝的步驟。本發(fā)明還保護(hù)上述任一所述引物組合或上述任一所述復(fù)合擴(kuò)增體系在制備試劑盒中的應(yīng)用；所述試劑盒的用途可為(h1)-(h5)中的至少一種：。吉林Claudin18.2邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)豐富邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)為創(chuàng)新藥企開(kāi)展全球多中心臨床試驗(yàn)研究，提供中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及伴隨診斷開(kāi)發(fā)服務(wù)。

    甲基化分析PacBio測(cè)序的技術(shù)原理可以直接檢測(cè)到發(fā)生甲基化的核苷酸，因此可以在進(jìn)行其它測(cè)序分析的同時(shí)完成DNA甲基化的分析。Nanopore技術(shù)測(cè)序原理將在某一面上含有一對(duì)電極的特殊脂質(zhì)雙分子層置于一個(gè)微孔之上，該雙分子層中含有很多由α溶血素蛋白組成的納米孔，并且每個(gè)納米孔會(huì)結(jié)合一個(gè)核酸外切酶。當(dāng)DNA模板進(jìn)入孔道時(shí)，孔道中的核酸外切酶會(huì)“抓住”DNA分子，順序剪切掉穿過(guò)納米孔道的DNA堿基，每一個(gè)堿基通過(guò)納米孔時(shí)都會(huì)產(chǎn)生一個(gè)阻斷，根據(jù)阻斷電流的變化就能檢測(cè)出相應(yīng)堿基的種類(lèi)，**終得出DNA分子的序列。Nanopore技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)Nanopore技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：可以檢測(cè)結(jié)構(gòu)變異和可變剪切；能直接對(duì)RNA分子進(jìn)行測(cè)序；能對(duì)修飾過(guò)的堿基進(jìn)行測(cè)序；測(cè)序讀長(zhǎng)更長(zhǎng)，可以達(dá)到150kb；測(cè)序數(shù)據(jù)可以做到實(shí)時(shí)監(jiān)控；運(yùn)行速度快。Nanopore技術(shù)的缺點(diǎn)：采用的是水解測(cè)序法，不能進(jìn)行重復(fù)測(cè)序，因而無(wú)法達(dá)到一個(gè)滿意的測(cè)序精確度。Nanopore技術(shù)的應(yīng)用基因組組裝利用其測(cè)序長(zhǎng)的特點(diǎn)，可以填補(bǔ)基因組中大片段的gap。臨床應(yīng)用對(duì)于臨床實(shí)踐，實(shí)時(shí)獲取和分析DNA/RNA序列是一件很重要的事情，對(duì)于傳統(tǒng)的高通量測(cè)序，做到這一點(diǎn)非常困難，但對(duì)于Nanopore技術(shù)平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)獲取序列相對(duì)容易。

    67個(gè)y-str基因座分別為：dys19、dys385a/b、dyf387s1a/b、dys388、dys389-i、dys389-ii、dys390、dys391、dys392、dys393、dyf399s1、dyf404s1a/b、dys437、dys438、dys439、dys443、dys444、dys446、dys447、dys448、dys449、dys456、dys458、dys459a/b、dys460、dys481、dys485、dys504、dys505、dys508、dys510、dys518、dys520、dys522、dys527a/b、dys531、dys533、dys549、dys552、dys557、dys570、dys576、dys587、dys593、dys596、dys612、dys617、dys622、dys626、dys627、dys630、dys635、dys641、dys643、dys644、dys645、dys710、dys720、y-gata-a10、y-gata-h4；其中，dys385a/b、dyf387s1a/b、dyf404s1a/b、dys459a/b、dys527a/b分別包含兩個(gè)分型片段，dyf399s1包含三個(gè)分型片段。二、引物組合的制備1、人工設(shè)計(jì)并合成用于擴(kuò)增每個(gè)基因座的引物(要求擴(kuò)增長(zhǎng)度**好300bp以下)，然后進(jìn)行pcr擴(kuò)增，獲得每個(gè)基因座的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物。2、綜合單個(gè)基因座的擴(kuò)增條件，選擇適宜擴(kuò)增程序，進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增。由于復(fù)合的基因座數(shù)目較多，引物間相互抑制情況復(fù)雜，所以需要一一排除，找出這些基因座，重新設(shè)計(jì)并合成引物。此外，不同基因座的引物之間還會(huì)形成引物二聚體。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)病理檢測(cè)平臺(tái)配備有Roche/Leica/Dako等多種全自動(dòng)檢測(cè)儀器，有病理醫(yī)生進(jìn)行精確的判讀。

    同時(shí)操作更為簡(jiǎn)單，整個(gè)上機(jī)測(cè)序可在（文庫(kù)構(gòu)建時(shí)間除外）。其劣勢(shì)在于芯片的通量并不高，非常適合小基因組和外顯子驗(yàn)證的測(cè)序。小結(jié)：二代測(cè)序相比一代測(cè)序大幅降低了成本，保持了較高準(zhǔn)確性，并且大幅降低了測(cè)序時(shí)間，將一個(gè)人類(lèi)基因組從3年降為1周以?xún)?nèi)，但在序列讀長(zhǎng)方面比起***代測(cè)序技術(shù)則要短很多，這也給三代測(cè)序提供了發(fā)展空間。三、獨(dú)辟蹊徑補(bǔ)空缺三代測(cè)序：?jiǎn)畏肿訙y(cè)序背景：測(cè)序技術(shù)經(jīng)過(guò)***代、第二代的發(fā)展，讀長(zhǎng)從一代測(cè)序的近1000bp，降到了二代測(cè)序的幾百bp，通量和速度大幅提升，那么第三代測(cè)序的發(fā)展思路在于保持二代測(cè)序的速度和通量?jī)?yōu)勢(shì)同時(shí)，彌補(bǔ)其讀長(zhǎng)較短的劣勢(shì)。三代測(cè)序與前兩代相比，**大的特點(diǎn)就是單分子測(cè)序，測(cè)序過(guò)程無(wú)需進(jìn)行PCR擴(kuò)增。1、Oxfordnanopore納米孔+電流檢測(cè)技術(shù)原理：該技術(shù)設(shè)計(jì)了一種特殊的納米孔，孔內(nèi)共價(jià)結(jié)合有分子接頭，**終得到電信號(hào)而不是光信號(hào)或pH信號(hào)的測(cè)序技術(shù)。當(dāng)DNA堿基通過(guò)納米孔時(shí)，電荷將發(fā)生變化，因而短暫地影響流過(guò)納米孔的電流強(qiáng)度（每種堿基所影響的電流變化幅度是不同的），靈敏的電子設(shè)備檢測(cè)到這些變化從而鑒定所通過(guò)的堿基。優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)：①讀長(zhǎng)很長(zhǎng)，大約在幾十kb，甚至100kb；②錯(cuò)誤率目前相比較高。【邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)】開(kāi)發(fā)的dMMR抗體檢測(cè)試劑,檢測(cè)費(fèi)用低,技術(shù)成熟,臨床易開(kāi)展。湖南全平臺(tái)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)創(chuàng)新服務(wù)

邁杰基于基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)及病理組學(xué)等綜合性轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺(tái)，豐富的伴隨診斷開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)。山西專(zhuān)注邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)值得推薦

    商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。3、LifeTechnologiesSOLID：ABI于2007年底推出SOLID系統(tǒng)，之后不斷升級(jí)至SOLID4。SOLID測(cè)序過(guò)程中以連接反應(yīng)取代聚合反應(yīng)。具體測(cè)序流程為：（1）文庫(kù)制備：將基因組DNA打斷，在其兩頭加上接頭，構(gòu)建成文庫(kù)；（2）乳液PCR／磁珠富集。此過(guò)程與454測(cè)序技術(shù)類(lèi)似；（3）微珠沉積；（4）連接測(cè)序；（5）數(shù)據(jù)分析。454測(cè)序、Solexa、Solid均是邊合成邊測(cè)序原理，454和Solid均有乳液PCR過(guò)程。IonTorrent:2007年454技術(shù)創(chuàng)始人羅森伯格創(chuàng)辦IonTorrent。LifeTechnologies于2010年收購(gòu)了IonTorrent，同年推出個(gè)人化基因組測(cè)序儀PGM。2012年推出IonProton測(cè)序儀。Proton更側(cè)重人基因組、外顯子組、全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。PGM測(cè)序儀的設(shè)計(jì)是基于半導(dǎo)體芯片技術(shù)，在半導(dǎo)體芯片的微孔中固定DNA鏈，隨后依次摻入ACGT。隨著每個(gè)堿基的摻入，釋放出氫離子，在它們穿過(guò)每個(gè)孔底部時(shí)能被檢測(cè)到。不需要激光、照相機(jī)或標(biāo)記?，F(xiàn)有平臺(tái):Solid3,Solid4(100G),IonPGM和IonProton。 山西專(zhuān)注邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)值得推薦