作用dMMR抗體檢測試劑推薦咨詢

    篩選出分泌特定單克隆抗體的雜交瘤細胞株abm58060-20a2-pu。將此細胞株轉(zhuǎn)入t-75培養(yǎng)瓶中擴增至對數(shù)生長期保種或進行后續(xù)實驗。實施例3腹水誘生法制備單克隆抗體一、腹水制備對數(shù)生長期細胞用無血清培養(yǎng)基洗滌并懸起，計數(shù)～5×105，1ml。懸浮的細胞腹腔注射事先用石蠟油致敏的小鼠。7天后開始收集腹水。取出的腹水于4℃離心4000rpm，10min。小心吸出中間的腹水收集于離心管中，4℃或-20℃保存。二、單克隆抗體的純化用hitraprproteinaff(ge公司)親和層析法按說明書從腹水中純化抗體。sds-page膠鑒定純度，bradford法測定濃度。純化的抗體保存于-20℃。實施例4單克隆抗體特性鑒定一、亞型鑒定用100mmpbs()稀釋包被羊抗鼠igg(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，過夜。傾空液體，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封閉液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。傾空液體用pbs-t清洗3次。用封閉液1：1000稀釋hrp標記的羊抗鼠(κ,λ)抗體或1：2000稀釋hrp標記的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗體，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。MLH1抗體試劑 蘇蘇械備20180519號.作用dMMR抗體檢測試劑推薦咨詢

    錯配修復(fù)蛋白（MLH1、PMS2、MSH2、MSH6）在IHC檢測應(yīng)用中的由來【一】認識錯配修復(fù)系統(tǒng)錯配修復(fù)蛋白（MLH1、PMS2、MSH2、MSH6）在IHC檢測應(yīng)用中的由來【二】錯配修復(fù)缺失三、微衛(wèi)星不穩(wěn)定的檢測MSI屬于一種基因水平的變異現(xiàn)象，而背后的根源則是錯配修復(fù)蛋白功能缺失。故無論從蛋白水平檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2等分子，還是在基因水平檢測MSI狀態(tài)均有助于判斷該類病因。現(xiàn)已證明二者的符合性達到。然而由于人們首先在結(jié)直腸ai中認識了微衛(wèi)星不穩(wěn)定現(xiàn)象，并且將結(jié)直腸ai被分為MSI-H（MSI高度不穩(wěn)定）型和MSS（微衛(wèi)星穩(wěn)定型）以區(qū)別其在預(yù)后與***方面的差異。早期的檢測方法為通過對Bat26、Bat25、D5S346、D2S123和D17S250五個微衛(wèi)星位點的檢測，根據(jù)其存在MSI的數(shù)量將結(jié)直腸ai分為MSI-H（具有兩個和兩個以上的位點改變）、MSI-L（只有一個位點發(fā)生改變）和微衛(wèi)星穩(wěn)定型(MSS)。MSI-L型在臨床表現(xiàn)上與MSS**無明顯差別，通常被歸為MSS**。隨后當人們認識到為星星不穩(wěn)定現(xiàn)象源于錯配修復(fù)系統(tǒng)功能缺陷，并且對其機制研究透徹之后逐漸形成通過對錯配修復(fù)蛋白的檢測來確定MSI的方法，即錯配修復(fù)蛋白免疫組織化學(xué)檢測。福建提供dMMR抗體檢測試劑邁杰中心實驗室設(shè)有SLAN 96P、Rotor-Gene Q、ABI 7500、ABI ViiA7、Roche z480等實時熒光定量PCR儀及數(shù)字PCR儀！

MSI和dMMR檢測的臨床應(yīng)用

?實體瘤免疫(PD-1和CTLA-4)患者的選擇

?2017年5月23日，美國FDA批準了默克公司的Keytruda（pembrolizumab）應(yīng)用于高度微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI-H）或錯配修復(fù)缺陷（dMMR）的實體liu患者

?2017年8月1日，F(xiàn)DA批準百時美施貴寶的Opdivo（nivolumab）可應(yīng)用于***氟嘧啶，奧沙利鉑和伊立替康***后疾病進展的MSI-H或dMMR的轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸liu患者

?MSI和dMMR的傳統(tǒng)臨床應(yīng)用

?用于結(jié)直腸liu和子宮內(nèi)膜liu患者林奇綜合征（HNPCC）的篩查（98%美國臨床實驗室）

?用于結(jié)直腸liu患者的預(yù)后指標，MSI-H患者預(yù)后較好（美國臨床實驗室占48%）

?作為結(jié)直腸liu患者輔助化療(5-FU和Irinotecan)的用藥指導(dǎo)

    MSI-H結(jié)直腸ai的比例(22％)高于Ⅲ期結(jié)直腸ai(12％)，而在Ⅳ期liu中*占％，提示MSI-H結(jié)直腸ai發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險較低。特別是在Ⅱ期結(jié)直腸ai患者中，MSI狀態(tài)是提示預(yù)后的**預(yù)測因子，MSI-Hliu預(yù)后好于MSSliu。Ⅱ期結(jié)直腸ai復(fù)發(fā)的高危因素包括：liu組織學(xué)類型為低分化ai、有脈管／神經(jīng)侵犯、淋巴結(jié)檢出數(shù)量不足12個、發(fā)生梗阻或穿孔以及切緣陽性，但如liu為MSI-H型，則低分化不屬高危因素。2．指導(dǎo)***：研究發(fā)現(xiàn)，MSI-H結(jié)直腸ai對5-氟尿嘧啶和順鉑等化療藥物不敏感，而對伊立替康等化療藥物敏感，同時MSI結(jié)直腸ai對放療比較敏感。美國國立綜合ai癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)的結(jié)直腸ai臨床實踐指南明確指出，對MSI-H結(jié)直腸ai不宜采用5-氟尿嘧啶和鉑類為主的***方案。3．Lynch綜合征患者篩查：Lynch綜合征患者較常見同時性或異時性多發(fā)結(jié)直腸ai，如果術(shù)前能明確Lynch綜合征的診斷，外科醫(yī)師有可能采取更為***的切除術(shù)式。Lynch綜合征患者不*發(fā)生結(jié)直腸ai的風(fēng)險增高，而且可以發(fā)生子宮內(nèi)膜ai、卵巢ai、尿路上皮ai等多種腸外惡性liu，有研究表明，阿司匹林能夠預(yù)防Lynch綜合征相關(guān)結(jié)直腸ai及腸外liu的發(fā)生。由于Lynch綜合征與大家熟知的家族性腺瘤**肉病(FAP)不同。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)可以提供覆蓋肺ai、腸ai、肝ai、胃ai、乳腺ai、前列腺ai等多種實體瘤的上百項檢測項目。

    目前較常使用的檢測技術(shù)為聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和免疫組化（IHC）檢測[4]。PCR檢測，目前公認的標志物套餐由BAT25、BAT26、NR21、NR24、NR22或NR27組成。當檢測的微衛(wèi)星標志物中沒有發(fā)現(xiàn)異常，標本定義為微衛(wèi)星穩(wěn)定性（MSS）；如果有一個標志物或低于40%的標志物顯示異常，則標本被認定為低水平微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI-L)；當測試標志物的40%或超過40%異常時，標本被認定為高水平微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI-H）。免疫組化檢測，建議使用PMS2、MSH6、MLH1和MSH2的抗體套餐來檢測MSI現(xiàn)象。判讀標準如下：在對照組織（即liu周圍的正常上皮細胞、liu內(nèi)浸潤的淋巴細胞、間質(zhì)細胞均出現(xiàn)細胞核著色）中----強陽性表達的前提下，只要MMR蛋白在liu細胞出現(xiàn)核著色（），即判定該蛋白為陽性表達；若MMR蛋白在liu細胞未出現(xiàn)核著色現(xiàn)象（—）則視為MMR蛋白缺失[5,6]。當四個錯配修復(fù)蛋白均表達時，可判定為MSS；當四個錯配修復(fù)蛋白中只有一個發(fā)生表達缺失時，可判定為MSI-L；當四個錯配修復(fù)蛋白2個或以上表達缺失時，可判定為MSI-H。已確定4種MMR蛋白對MSI-H的敏感性、特異性均接近100%。4林奇綜合征（Lynch綜合征）的發(fā)病機制和臨床特征林奇綜合征是指因錯配修復(fù)基因。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)利用新一代智能技術(shù)補充傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的檢測模式，賦能醫(yī)療健康建設(shè)，更好地為臨床和患者服務(wù)。甘肅標準dMMR抗體檢測試劑值得推薦

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    MMR）突變而易患結(jié)直腸ai和其他惡性liu的一種常染色體顯性遺傳性疾病，占結(jié)直腸ai的2%~5%。該綜合征曾被命名為遺傳性非腺瘤性結(jié)直腸ai（HNPCC），后因該命忽略了腸外liu的高發(fā)率而棄用。已知MLH1、MSH2、MSH6和PMS2這四種MMR基因與林奇綜合征的發(fā)生密切相關(guān)。大多數(shù)林奇綜合征家（85%~90%）檢測到的是MLH1和MSH2突變，剩余的10%~15%的家族存在MSH6的突變，少數(shù)存在PMS2的突變[7]。同時，已有研究表明：絕大多數(shù)林奇綜合征都具有高水平微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI-H）的現(xiàn)象[8]。林奇綜合征發(fā)病年齡較早，平均年齡為45歲，明顯低于正常人群發(fā)生結(jié)直腸ai的平均年齡（60歲）。林奇綜合征患者的結(jié)腸ai好發(fā)于近端結(jié)腸，70%～85%的liu位于結(jié)腸脾區(qū)附近。這些liu具有特異的組織病理學(xué)特征，比如髓樣生長的ai、粘液腺ai或liu區(qū)過多的淋巴細胞浸潤。林奇綜合征患者在其一生中易發(fā)生多處原發(fā)liu，據(jù)統(tǒng)計有54%～61%的林奇綜合征患者會發(fā)生第二種原發(fā)liu，更有甚者，部分患者會發(fā)生三種或更多的原發(fā)liu[7]。這些liu包括有子宮內(nèi)膜ai、胃ai、卵巢ai、尿路liu、肝膽liu、胰腺ai等。因此，當確診的林奇綜合征患者在發(fā)現(xiàn)***處結(jié)直腸ai時就會被建議進行更大的結(jié)腸次全切除術(shù)或全切術(shù)。作用dMMR抗體檢測試劑推薦咨詢