50歲，結(jié)直腸liu或其他liu家族史陽性、吸煙、超重、有膽囊手術(shù)史、血吸蟲病史等，可考慮用阿司匹林等非甾體***藥和選擇性環(huán)氧合酶－2抑制劑***，但必須注意藥物不良反應(yīng)及使用禁忌證。二級(jí)預(yù)防即結(jié)直腸腺瘤摘除后預(yù)防再發(fā)或惡變。目前，學(xué)術(shù)界比較公認(rèn)的預(yù)防腺瘤切除術(shù)后復(fù)發(fā)的藥物是非甾體***藥和選擇性環(huán)氧合酶－2抑制劑。另外，補(bǔ)充鈣劑和維生素D、高纖維飲食、腸道代謝物如短鏈脂肪酸也被認(rèn)為具有一定的預(yù)防價(jià)值。2011年發(fā)表的《中國結(jié)直腸liu篩查、早診早治和綜合預(yù)防共識(shí)意見(二)》對(duì)于我國結(jié)直腸ai化學(xué)預(yù)防給出了明確的指導(dǎo)意見。由于內(nèi)鏡檢查依從性較差，結(jié)合我國城鄉(xiāng)衛(wèi)生資源分布不均衡的現(xiàn)狀，完全依靠內(nèi)鏡下摘除結(jié)直腸腺瘤預(yù)防結(jié)直腸ai發(fā)生的方案并非完美。上述共識(shí)建議輔助相應(yīng)以藥物或環(huán)境干預(yù)為基礎(chǔ)的一級(jí)預(yù)防。預(yù)防結(jié)直腸腺瘤發(fā)生或再發(fā)是結(jié)直腸ai化學(xué)預(yù)防的**終目的。五、我國結(jié)直腸ai篩查及預(yù)防工作中的問題1.對(duì)結(jié)直腸ai認(rèn)識(shí)不足、人群篩查依從性較差：隨著我國經(jīng)濟(jì)和現(xiàn)代化建設(shè)的深入，我國公民飲食結(jié)構(gòu)及生活方式較30年前發(fā)生了較大改變，結(jié)直腸ai近20年發(fā)病率及病死率不斷攀升。結(jié)直腸ai本身疾病特點(diǎn)鮮明，發(fā)病隱匿、惡變時(shí)間長、早期liu***率高。MLH1抗體試劑 蘇蘇械備20180519號(hào).廣東推薦dMMR抗體檢測(cè)試劑鄭重承諾
每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的檸檬酸緩沖液()進(jìn)行顯色反應(yīng)，10-20min內(nèi)測(cè)定405nm波長下的od值。結(jié)果顯示，本發(fā)明單克隆抗體為igg2b型鼠源單克隆抗體。二、親和常數(shù)測(cè)定包被msh6重組蛋白，包被濃度為2μg/ml,100μl/孔，4℃包被過夜，pbs-t洗3次。每孔加200μl封閉液37℃封閉2h，pbs-t洗3次。實(shí)施例4中純化的單克隆抗體，從1：200開始2倍梯度稀釋，***1孔留空白對(duì)照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp標(biāo)記的羊抗鼠二抗1：20000稀釋，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的檸檬酸-磷酸緩沖液顯色10min，加50μ。用酶標(biāo)儀測(cè)定波長450nm的吸光值。畫出od值對(duì)應(yīng)抗體稀釋倍數(shù)的曲線，找出≥1/2“平臺(tái)od值”對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)a。利用下列公式計(jì)算出親和常數(shù)為×109。三、單抗反應(yīng)特異性和應(yīng)用效果選擇msh6重組蛋白，用免疫印跡的方法檢測(cè)本發(fā)明單克隆抗體的識(shí)別特異性，免疫印跡實(shí)驗(yàn)過程如下：每種蛋白上樣約5-10ng，進(jìn)行12％聚丙烯酰胺凝膠電泳。按常規(guī)方法在bio-rad電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中將凝膠蛋白帶轉(zhuǎn)移到pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于含5％脫脂奶粉的tbs-t封閉液中4℃過夜。加入單克隆抗體msh6。浙江專業(yè)dMMR抗體檢測(cè)試劑鄭重承諾邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)擁有全技術(shù)平臺(tái)及豐富的伴隨診斷開發(fā)經(jīng)驗(yàn)，為藥企合作伙伴提供一體化開發(fā)服務(wù)。
篩選出分泌特定單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株abm58060-20a2-pu。將此細(xì)胞株轉(zhuǎn)入t-75培養(yǎng)瓶中擴(kuò)增至對(duì)數(shù)生長期保種或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例3腹水誘生法制備單克隆抗體一、腹水制備對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基洗滌并懸起，計(jì)數(shù)～5×105，1ml。懸浮的細(xì)胞腹腔注射事先用石蠟油致敏的小鼠。7天后開始收集腹水。取出的腹水于4℃離心4000rpm，10min。小心吸出中間的腹水收集于離心管中，4℃或-20℃保存。二、單克隆抗體的純化用hitraprproteinaff(ge公司)親和層析法按說明書從腹水中純化抗體。sds-page膠鑒定純度，bradford法測(cè)定濃度。純化的抗體保存于-20℃。實(shí)施例4單克隆抗體特性鑒定一、亞型鑒定用100mmpbs()稀釋包被羊抗鼠igg(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，過夜。傾空液體，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封閉液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。傾空液體用pbs-t清洗3次。用封閉液1：1000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(κ,λ)抗體或1：2000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗體，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。
當(dāng)liu細(xì)胞出現(xiàn)一種或幾種錯(cuò)配修復(fù)蛋白核表達(dá)的丟失，則提示liu為MSI-H。MLH1和MSH2作為錯(cuò)配修復(fù)復(fù)合體的共用亞單位，在發(fā)生功能缺陷時(shí)常同時(shí)伴有其同源錯(cuò)配修復(fù)蛋白的表達(dá)缺失。另外，如前所述，部分Lynch綜合征是由于EpCAM基因胚系突變導(dǎo)致下游MSH2基因功能缺陷所致。Musulen等發(fā)現(xiàn)，在MSH2表達(dá)缺失的liu中檢測(cè)出EpCAM蛋白缺失，與EpCAM基因突變的吻合率達(dá)100％，所以推薦將EpCAM免疫組織化學(xué)檢測(cè)加入到Lynch綜合征的篩查流程中。日常工作中用于鑒別肺腺ai與惡性間皮瘤的抗體Ber-EP4即是檢測(cè)EpCAM的常用克隆之一。免疫組織化學(xué)檢查錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失的作用如下：(1)提示哪個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因發(fā)生了功能缺失(表1)；(2)與MLH1啟動(dòng)子甲基化檢測(cè)和／或BRAFV600E突變檢測(cè)結(jié)合，區(qū)分散發(fā)性MSI-H結(jié)直腸ai和可疑Lynch綜合征患者；(3)與EpCAM免疫組織化學(xué)檢查結(jié)合，為后續(xù)的Lynch綜合征遺傳學(xué)突變檢測(cè)提示方向。目前，4種主要的錯(cuò)配修復(fù)蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均已有穩(wěn)定的商品化抗體，但受組織固定、染色條件、抗體克隆號(hào)不同等因素的影響，可能會(huì)出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。在判讀免疫組織化學(xué)染色結(jié)果時(shí)應(yīng)注意：(1)內(nèi)對(duì)照是否陽性；(2)著色部位是否為細(xì)胞核；。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)已基于客戶需求建立了完整的病理學(xué)檢測(cè)平臺(tái)，可提供一站式病理學(xué)解決方案。
dMMR（MSH6/MLH1/PMS2/MSH2）抗體檢測(cè)試劑錯(cuò)配修復(fù)〈MismatchRepair,MMR)發(fā)生于DNA復(fù)制、重組及損傷修復(fù)過程，能夠識(shí)別和修復(fù)錯(cuò)誤的插入、缺失和整合。人體內(nèi)常見的4種錯(cuò)配修復(fù)蛋白，即hMLH1、hMSH2、hMSH6、hPMS2協(xié)同發(fā)揮DNA錯(cuò)配修復(fù)功能。MMR系統(tǒng)任何一種蛋白缺失，都會(huì)導(dǎo)致DNA錯(cuò)配修復(fù)功能缺陷(MismatchRepairDeficiency,dMMR)，產(chǎn)生復(fù)制錯(cuò)誤或微衛(wèi)顯不穩(wěn)定(MicrosatelliteInstability,MSI)，進(jìn)而誘導(dǎo)liu發(fā)生。
邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的dMMR抗體檢測(cè)試劑采用免疫組織化學(xué)法（IHC）檢測(cè)liu組織中MLH1、MSH2、MSH6和、PMS2四種蛋白的表達(dá)。
備案號(hào)
PMS2抗體試劑蘇蘇械備20180570號(hào)
MSH6抗體試劑蘇蘇械備20180569號(hào)
MSH2抗體試劑蘇蘇械備20180568號(hào)
MLH1抗體試劑蘇蘇械備20180519號(hào)
產(chǎn)品特點(diǎn)**使用北歐免疫組化質(zhì)控中心NordiQC推薦的IHC抗體組合。精確經(jīng)多平臺(tái)平行驗(yàn)證（MSI-PCR、MSI-NGS)，一致性高，特異性好普適覆蓋多個(gè)主流IHC自動(dòng)染色平臺(tái)，適用范圍廣便捷方法簡單易行，醫(yī)保覆蓋。 邁杰與大學(xué)，研究院所，醫(yī)院的科研人員進(jìn)行科研轉(zhuǎn)化研究合作,包括基礎(chǔ)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究等。遼寧作用dMMR抗體檢測(cè)試劑值得推薦
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RAF***對(duì)多種**的發(fā)生、發(fā)展產(chǎn)生重要影響，RAF突變以BRAF常見，BRAF是RAS-RAF-MAPK信號(hào)通路的重要基因，BRAF突變常見于V600E位點(diǎn)，其在結(jié)腸ai的突變率為。BRAF突變的ai癥患者中右半結(jié)腸ai占95%，在BRAF野生型的ai癥患者中右半結(jié)腸ai患者占48%。研究發(fā)現(xiàn)在右半結(jié)腸aiBRAF突變率為，左半結(jié)腸ai、直腸ai的突變率分別為、。BRAF突變與右半結(jié)腸ai相關(guān)，并且BRAF基因突變和位置有***的線性相關(guān)關(guān)系，隨著**位置由升結(jié)腸移至直腸，BRAF的突變率由40%降至不到。2.預(yù)測(cè)EGFR***作用NicolantonioF等人對(duì)113例Cetuximab耐藥的轉(zhuǎn)移性結(jié)腸ai患者進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)對(duì)這兩種藥物耐受的患者，有30%~40%存在KRAS突變，而野生型的KRAS患者中有14%發(fā)生BRAFV600E突變。BRAF突變者對(duì)這兩種藥存在耐藥，且生存率較其它患者明顯降低。但一項(xiàng)關(guān)于CRYSTAL和OPUS試驗(yàn)的meta分析發(fā)現(xiàn)BRAF突變似乎不影響西妥昔單抗的療效，**是一個(gè)重要的預(yù)后指標(biāo)。3.預(yù)測(cè)預(yù)后無論是早期還是晚期轉(zhuǎn)移CRC，BRAF突變狀態(tài)都是較強(qiáng)的生存預(yù)測(cè)因素，與KRAS基因突變相比，BRAF基因突變常見于尚未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的結(jié)腸ai，以Ⅱ、Ⅲ期CRC患者多見，BRAF突變型CRC的惡性程度高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率和局部晚期發(fā)生率高。廣東推薦dMMR抗體檢測(cè)試劑鄭重承諾