山西專業(yè)dMMR抗體檢測試劑鄭重承諾

    結(jié)直腸ai是常見的消化道惡性liu，在我國，特別是在現(xiàn)代化發(fā)展迅速的大都市里，結(jié)直腸ai發(fā)病率的上升趨勢更為明顯。染色體不穩(wěn)定(chromosomalinstability，CIN)途徑和微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatelliteinstability，MSI)途徑是結(jié)直腸ai發(fā)生的兩條主要分子途徑。前者占散發(fā)性結(jié)直腸ai的75％，絕大多數(shù)存在APC基因的突變和染色體18q的缺失，并有較高比例的KRAS和p53基因突變，好發(fā)于左半結(jié)腸，組織學(xué)類型以高、中分化為主。后者占散發(fā)性結(jié)直腸ai的15％，多見于右半結(jié)腸，組織學(xué)類型以黏液腺ai和低分化腺ai為常見，而且?guī)缀跛械腖ynch綜合征相關(guān)性結(jié)直腸ai均通過MSI途徑發(fā)生。更為重要的是，MSI結(jié)直腸ai不*在好發(fā)部位、常見組織形態(tài)上與CIN結(jié)直腸ai存在差異，而且在臨床預(yù)后、***、遺傳性liu篩查方案的選擇上也有所不同，因此必須在臨床工作中將其區(qū)分開來。本文主要就MSI結(jié)直腸ai、Lynch綜合征的病理特點、發(fā)生機制、篩查策略及其臨床意義做一論述。一、DNA錯配修復(fù)(mismatchrepair)系統(tǒng)與MSI結(jié)直腸ai錯配修復(fù)系統(tǒng)的功能是糾正DNA復(fù)制過程出現(xiàn)的錯誤，確保復(fù)制過程的“保真性”。錯配修復(fù)蛋白包括MutS和MutL兩大家族，前者包括MSH2／MSH3和MSH6等，后者包括MLH1、MLH3、PMS1和PMS2。方法簡單易行，醫(yī)保覆蓋，適于臨床推廣。山西專業(yè)dMMR抗體檢測試劑鄭重承諾

    可能是由于蛋白的不穩(wěn)定造成的。目前，其用途主要為：聯(lián)合檢測msh2、msh6、pms2、mlh1可用于lynchsyndrome(遺傳性非息肉性結(jié)腸ai)的篩查。技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明人提供了一種抗msh6蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別是。進一步地，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)氨基酸序列分別是。進一步地，所述單克隆抗體特異性識別msh6蛋白。進一步地，所述單克隆抗體由保藏號為cgmcc**7492的雜交瘤細胞系產(chǎn)生。所述細胞株為小鼠雜交瘤細胞系abm58060-20a2-pu，分類命名為：小鼠雜交瘤細胞系，該細胞系已于2019年04月3日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所。進一步地，所述抗msh6蛋白為小鼠igg2b亞型單克隆抗體。發(fā)明人還提供了一種抗msh6蛋白單克隆抗體的制備方法，其免疫小鼠所用的抗原為seqid**所示核苷酸序列編碼，經(jīng)由大腸桿菌重組表達的重組蛋白。發(fā)明人還提供了一株分泌抗msh6蛋白的雜交瘤細胞系，所述細胞株為小鼠雜交瘤細胞系abm58060-20a2-pu，所述細胞系保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為：cgmcc**7492。陜西dMMR抗體檢測試劑服務(wù)至上邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)蛋白免疫產(chǎn)品開發(fā)平臺可提供基于IHC平臺的體外診斷試劑盒以及蛋白抗體原料一站式開發(fā)服務(wù)。

    除非整個家族的結(jié)直腸ai發(fā)病率明顯上升，否則很難發(fā)現(xiàn)單個個體攜帶者。因此，從MSI-H結(jié)直腸ai中篩選出可疑的Lynch綜合征患者，不*有利于患者本人的liu***和預(yù)防篩查策略的制定，而且有利于發(fā)現(xiàn)Lynch綜合征家系，為患者家族成員的liu預(yù)防提供重要信息。與以往以家系調(diào)查和臨床信息為主導(dǎo)的篩查方法比，采用分子檢測等輔助手段對本病進行篩查不*準(zhǔn)確且更高效和可行。研究表明，如果嚴(yán)格按照修訂的Bethesda指南進行MSI檢測，將遺漏％的MSI結(jié)直腸ai和％的Lynch綜合征。因此，E***P工作組(EvaluationofGenomicApplicationsinPracticeandPreventionWorkingGroup)推薦對所有(或<70歲)的新診斷所有(或<70歲)的新診斷結(jié)直腸ai結(jié)直腸ai進行MSI檢測(圖4)。五、小結(jié)與展望MSI結(jié)直腸ai占結(jié)直腸ai的15％，因其具有獨特的發(fā)生機制、預(yù)后、***方案以及與Lynch綜合征的密切關(guān)系而日益得到重視。目前，國際上很多大型醫(yī)院和liu***中心均已開始采取對所有新診斷的結(jié)直腸ai進行MSI和／或免疫組織化學(xué)檢測的策略，有的機構(gòu)甚至開始對所有新診斷的子宮內(nèi)膜ai也進行***檢測。我國結(jié)直腸發(fā)病率持續(xù)上升，但對MSIliu和Lynch綜合征進行篩查的觀念尚待普及。分子機制的研究進展和檢測手段的進步。

    MSI-H結(jié)直腸ai的比例(22％)高于Ⅲ期結(jié)直腸ai(12％)，而在Ⅳ期liu中*占％，提示MSI-H結(jié)直腸ai發(fā)生轉(zhuǎn)移的風(fēng)險較低。特別是在Ⅱ期結(jié)直腸ai患者中，MSI狀態(tài)是提示預(yù)后的**預(yù)測因子，MSI-Hliu預(yù)后好于MSSliu。Ⅱ期結(jié)直腸ai復(fù)發(fā)的高危因素包括：liu組織學(xué)類型為低分化ai、有脈管／神經(jīng)侵犯、淋巴結(jié)檢出數(shù)量不足12個、發(fā)生梗阻或穿孔以及切緣陽性，但如liu為MSI-H型，則低分化不屬高危因素。2．指導(dǎo)***：研究發(fā)現(xiàn)，MSI-H結(jié)直腸ai對5-氟尿嘧啶和順鉑等化療藥物不敏感，而對伊立替康等化療藥物敏感，同時MSI結(jié)直腸ai對放療比較敏感。美國國立綜合ai癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)的結(jié)直腸ai臨床實踐指南明確指出，對MSI-H結(jié)直腸ai不宜采用5-氟尿嘧啶和鉑類為主的***方案。3．Lynch綜合征患者篩查：Lynch綜合征患者較常見同時性或異時性多發(fā)結(jié)直腸ai，如果術(shù)前能明確Lynch綜合征的診斷，外科醫(yī)師有可能采取更為***的切除術(shù)式。Lynch綜合征患者不*發(fā)生結(jié)直腸ai的風(fēng)險增高，而且可以發(fā)生子宮內(nèi)膜ai、卵巢ai、尿路上皮ai等多種腸外惡性liu，有研究表明，阿司匹林能夠預(yù)防Lynch綜合征相關(guān)結(jié)直腸ai及腸外liu的發(fā)生。由于Lynch綜合征與大家熟知的家族性腺瘤**肉病(FAP)不同。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)設(shè)有病原體檢測平臺Qiastat-Dx進行呼吸道及胃腸道病原體檢測。

    在臨床中，對于Ⅱ期結(jié)腸ai病人，考慮使用5-Fu單藥化療時，主要考慮因素是什么？可能有的醫(yī)生會說，「Soeasy！檢測下MMR啊，看看是dMMR還是pMMR」。來吧，我們看1個病例患者女，51歲，診斷為T3N0M0（伴有普危因素），免疫組化結(jié)果：HER2(1+)，GPC3(-)，MSH2(+)，MSH6(+)，PMS2(+)，MLH1(+)，CK19(-)，CK20(+)，Ki67(60%+)。這名患者該不該用單藥5-Fu進行輔助化療？一拿到免疫組化結(jié)果，很多醫(yī)生的表情是這樣的：大家都知道，MSI-H/dMMR患者不能從單藥5-Fu的***中獲益。但問題是，面對由英文字母、數(shù)字、括號和加減號組成的免疫組化結(jié)果，如何確定是dMMR還是pMMR？到底怎樣算H-MSI，怎樣算L-MSI，怎樣又算MS-S？下面我們就來解決這個問題。MMR基因是DNA錯配修復(fù)基因，它的表達缺失可引起DNA復(fù)制過程中錯配的累積，導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）的發(fā)生，約15%的結(jié)直腸ai是經(jīng)由MSI途徑引發(fā)的。dMMR是MMR表達缺失，pMMR是MMR表達正常。dMMR表現(xiàn)為高頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-H），pMMR表現(xiàn)為低頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI-L）或微衛(wèi)星穩(wěn)定（MS-S）。目前，**常用的篩查結(jié)直腸aiMMR表達有無缺失的方法有2種：免疫組化檢測MMR相關(guān)蛋白的表達，以及PCR檢測多個微衛(wèi)星位點以判斷有否存在MSI。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)具體包括全套的Leica組織樣本制備系統(tǒng)，Ventana、Leica、DAKO等全自動免疫組化儀。河北dMMR抗體檢測試劑誠信合作

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)利用數(shù)字PCR進行低豐度突變研究等；提供循環(huán)腫l瘤DNA檢測，可檢測EGFR、ERBB2等Biomarker。山西專業(yè)dMMR抗體檢測試劑鄭重承諾

    每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的檸檬酸緩沖液()進行顯色反應(yīng)，10-20min內(nèi)測定405nm波長下的od值。結(jié)果顯示，本發(fā)明單克隆抗體為igg2b型鼠源單克隆抗體。二、親和常數(shù)測定包被msh6重組蛋白，包被濃度為2μg/ml,100μl/孔，4℃包被過夜，pbs-t洗3次。每孔加200μl封閉液37℃封閉2h，pbs-t洗3次。實施例4中純化的單克隆抗體，從1：200開始2倍梯度稀釋，***1孔留空白對照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp標(biāo)記的羊抗鼠二抗1：20000稀釋，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的檸檬酸-磷酸緩沖液顯色10min，加50μ。用酶標(biāo)儀測定波長450nm的吸光值。畫出od值對應(yīng)抗體稀釋倍數(shù)的曲線，找出≥1/2“平臺od值”對應(yīng)的稀釋倍數(shù)a。利用下列公式計算出親和常數(shù)為×109。三、單抗反應(yīng)特異性和應(yīng)用效果選擇msh6重組蛋白，用免疫印跡的方法檢測本發(fā)明單克隆抗體的識別特異性，免疫印跡實驗過程如下：每種蛋白上樣約5-10ng，進行12％聚丙烯酰胺凝膠電泳。按常規(guī)方法在bio-rad電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中將凝膠蛋白帶轉(zhuǎn)移到pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于含5％脫脂奶粉的tbs-t封閉液中4℃過夜。加入單克隆抗體msh6。山西專業(yè)dMMR抗體檢測試劑鄭重承諾