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    使MSI檢測(cè)的靈敏性、特異性和檢測(cè)的便利度都有了明顯進(jìn)步。3．錯(cuò)配修復(fù)蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)與PCR-MSI檢測(cè)的優(yōu)缺點(diǎn)：文獻(xiàn)報(bào)道錯(cuò)配修復(fù)蛋白免疫組織化學(xué)檢測(cè)與PCR-MSI檢測(cè)結(jié)果的符合率非常高，達(dá)％，因此采用任何一種方法作為MSI-Hliu的篩查方法均可接受。相比之下，免疫組織化學(xué)法：(1)簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、快捷、穩(wěn)定，符合病理科日常工作流程，多數(shù)基層病理科均可開展；(2)所需組織量少，活檢標(biāo)本亦可檢測(cè)，且檢測(cè)結(jié)果與切除標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果一致；(3)可直接提示發(fā)生缺陷的錯(cuò)配修復(fù)蛋白類型，對(duì)于后續(xù)進(jìn)行錯(cuò)配修復(fù)基因胚系突變檢測(cè)以確診Lynch綜合征有明確的指向性；(4)少數(shù)MSH6胚系突變病例的liu由于錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的功能冗余作用可不表現(xiàn)為MSI，但免疫組織化學(xué)可檢出蛋白表達(dá)缺失，因而可彌補(bǔ)PCR-MSI檢測(cè)方法的局限性。PCR-MSI檢測(cè)雖然相對(duì)復(fù)雜，費(fèi)用相對(duì)較高，但優(yōu)點(diǎn)是直接反映liu的MSI狀態(tài)，而且對(duì)于少數(shù)錯(cuò)義突變導(dǎo)致蛋白功能異常但并不影響蛋白的轉(zhuǎn)錄和抗原性時(shí)，免疫組織化學(xué)檢測(cè)可出現(xiàn)假陽(yáng)性，而PCR-MSI檢測(cè)正好可以彌補(bǔ)。四、***檢測(cè)MSI結(jié)直腸ai的必要性及推薦檢測(cè)流程區(qū)分MSI結(jié)直腸ai的臨床意義包括以下三個(gè)方面。1．提示預(yù)后：臨床研究發(fā)現(xiàn)，在Ⅱ期結(jié)直腸ai中。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)同時(shí)擁有符合GMP和ISO 13485的要求的GMP生產(chǎn)車間及倉(cāng)儲(chǔ)，可以充分滿足客戶的需求。河南推薦dMMR抗體檢測(cè)試劑服務(wù)至上

    篩選出分泌特定單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株abm58060-20a2-pu。將此細(xì)胞株轉(zhuǎn)入t-75培養(yǎng)瓶中擴(kuò)增至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期保種或進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例3腹水誘生法制備單克隆抗體一、腹水制備對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞用無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌并懸起，計(jì)數(shù)～5×105，1ml。懸浮的細(xì)胞腹腔注射事先用石蠟油致敏的小鼠。7天后開始收集腹水。取出的腹水于4℃離心4000rpm，10min。小心吸出中間的腹水收集于離心管中，4℃或-20℃保存。二、單克隆抗體的純化用hitraprproteinaff(ge公司)親和層析法按說(shuō)明書從腹水中純化抗體。sds-page膠鑒定純度，bradford法測(cè)定濃度。純化的抗體保存于-20℃。實(shí)施例4單克隆抗體特性鑒定一、亞型鑒定用100mmpbs()稀釋包被羊抗鼠igg(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)至μg/ml,每孔加100μl，4℃，過(guò)夜。傾空液體，用含％tween的pbs(pbs-t)洗3次，每孔加入200μl封閉液(含2％bsa和3％蔗糖的pbs)，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。每孔加入，37℃孵育1h。傾空液體用pbs-t清洗3次。用封閉液1：1000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(κ,λ)抗體或1：2000稀釋hrp標(biāo)記的羊抗鼠(igm，igg1，igg2b，igg2b，igg3，iga)抗體，37℃孵育1h。傾空液體，用pbs-t清洗3次。廣西作用dMMR抗體檢測(cè)試劑口碑推薦邁杰與大學(xué)，研究院所，醫(yī)院的科研人員進(jìn)行科研轉(zhuǎn)化研究合作,包括基礎(chǔ)科學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究等。

    三、我國(guó)結(jié)直腸ai的篩查策略結(jié)直腸ai篩查策略包括篩查對(duì)象、篩查方法、篩查流程、篩查頻率、篩查間隔和確診后的規(guī)范***及隨訪等。各國(guó)應(yīng)根據(jù)本國(guó)國(guó)情制訂篩查策略并適時(shí)進(jìn)行更新和補(bǔ)充。依據(jù)2011年10月由中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)頒布的《中國(guó)結(jié)直腸liu篩查、早診早治和綜合預(yù)防共識(shí)意見(jiàn)》，我國(guó)結(jié)直腸ai篩查的策略如下：1.人群篩查：我國(guó)結(jié)直腸ai的篩查目標(biāo)人群為50～74歲者。這符合我國(guó)結(jié)直腸ai發(fā)病規(guī)律，從50歲開始明顯上升，75～80歲達(dá)到高峰，然后緩慢下降。國(guó)外相關(guān)研究結(jié)果顯示：不必將76～85歲高齡人群作為篩查目標(biāo)人群。結(jié)合我國(guó)人均壽命、結(jié)直腸ai高發(fā)年齡等國(guó)情，故將人群篩查**高年齡定位在74歲。我國(guó)人口基數(shù)較大，且結(jié)直腸ai發(fā)病率逐年上升，潛在患病人群龐大，在篩查中***應(yīng)用纖維結(jié)腸鏡，其衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)成本勢(shì)必巨大，且纖維結(jié)腸鏡為有創(chuàng)檢查，在普通人群中***應(yīng)用面臨較大的依從性問(wèn)題。故我國(guó)普遍采用初步篩查發(fā)現(xiàn)高危人群，對(duì)于高危人群行全結(jié)腸鏡檢查的序貫式篩查策略。具體的篩查方法包括FOBT、基于高危因素的問(wèn)卷調(diào)查、乙狀結(jié)腸鏡及全結(jié)腸鏡檢查等，篩查周期建議為3年。對(duì)符合以下任意一項(xiàng)者應(yīng)視為高危人群：(1)FOBT陽(yáng)性。(2)ai癥病史。(3)息肉病史。。

    50歲，結(jié)直腸liu或其他liu家族史陽(yáng)性、吸煙、超重、有膽囊手術(shù)史、血吸蟲病史等，可考慮用阿司匹林等非甾體***藥和選擇性環(huán)氧合酶－2抑制劑***，但必須注意藥物不良反應(yīng)及使用禁忌證。二級(jí)預(yù)防即結(jié)直腸腺瘤摘除后預(yù)防再發(fā)或惡變。目前，學(xué)術(shù)界比較公認(rèn)的預(yù)防腺瘤切除術(shù)后復(fù)發(fā)的藥物是非甾體***藥和選擇性環(huán)氧合酶－2抑制劑。另外，補(bǔ)充鈣劑和維生素D、高纖維飲食、腸道代謝物如短鏈脂肪酸也被認(rèn)為具有一定的預(yù)防價(jià)值。2011年發(fā)表的《中國(guó)結(jié)直腸liu篩查、早診早治和綜合預(yù)防共識(shí)意見(jiàn)(二)》對(duì)于我國(guó)結(jié)直腸ai化學(xué)預(yù)防給出了明確的指導(dǎo)意見(jiàn)。由于內(nèi)鏡檢查依從性較差，結(jié)合我國(guó)城鄉(xiāng)衛(wèi)生資源分布不均衡的現(xiàn)狀，完全依靠?jī)?nèi)鏡下摘除結(jié)直腸腺瘤預(yù)防結(jié)直腸ai發(fā)生的方案并非完美。上述共識(shí)建議輔助相應(yīng)以藥物或環(huán)境干預(yù)為基礎(chǔ)的一級(jí)預(yù)防。預(yù)防結(jié)直腸腺瘤發(fā)生或再發(fā)是結(jié)直腸ai化學(xué)預(yù)防的**終目的。五、我國(guó)結(jié)直腸ai篩查及預(yù)防工作中的問(wèn)題1.對(duì)結(jié)直腸ai認(rèn)識(shí)不足、人群篩查依從性較差：隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)和現(xiàn)代化建設(shè)的深入，我國(guó)公民飲食結(jié)構(gòu)及生活方式較30年前發(fā)生了較大改變，結(jié)直腸ai近20年發(fā)病率及病死率不斷攀升。結(jié)直腸ai本身疾病特點(diǎn)鮮明，發(fā)病隱匿、惡變時(shí)間長(zhǎng)、早期liu***率高。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)具體包括全套的Leica組織樣本制備系統(tǒng)，Ventana、Leica、DAKO等全自動(dòng)免疫組化儀。

    每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的檸檬酸緩沖液()進(jìn)行顯色反應(yīng)，10-20min內(nèi)測(cè)定405nm波長(zhǎng)下的od值。結(jié)果顯示，本發(fā)明單克隆抗體為igg2b型鼠源單克隆抗體。二、親和常數(shù)測(cè)定包被msh6重組蛋白，包被濃度為2μg/ml,100μl/孔，4℃包被過(guò)夜，pbs-t洗3次。每孔加200μl封閉液37℃封閉2h，pbs-t洗3次。實(shí)施例4中純化的單克隆抗體，從1：200開始2倍梯度稀釋，***1孔留空白對(duì)照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp標(biāo)記的羊抗鼠二抗1：20000稀釋，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的檸檬酸-磷酸緩沖液顯色10min，加50μ。用酶標(biāo)儀測(cè)定波長(zhǎng)450nm的吸光值。畫出od值對(duì)應(yīng)抗體稀釋倍數(shù)的曲線，找出≥1/2“平臺(tái)od值”對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)a。利用下列公式計(jì)算出親和常數(shù)為×109。三、單抗反應(yīng)特異性和應(yīng)用效果選擇msh6重組蛋白，用免疫印跡的方法檢測(cè)本發(fā)明單克隆抗體的識(shí)別特異性，免疫印跡實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：每種蛋白上樣約5-10ng，進(jìn)行12％聚丙烯酰胺凝膠電泳。按常規(guī)方法在bio-rad電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中將凝膠蛋白帶轉(zhuǎn)移到pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于含5％脫脂奶粉的tbs-t封閉液中4℃過(guò)夜。加入單克隆抗體msh6。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)擁有全技術(shù)平臺(tái)及豐富的伴隨診斷開發(fā)經(jīng)驗(yàn)，為藥企合作伙伴提供一體化開發(fā)服務(wù)。廣東標(biāo)準(zhǔn)dMMR抗體檢測(cè)試劑推薦咨詢

邁杰基于基因組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)及病理組學(xué)等綜合性轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)平臺(tái)，豐富的伴隨診斷開發(fā)經(jīng)驗(yàn)。河南推薦dMMR抗體檢測(cè)試劑服務(wù)至上

    免疫組織化學(xué)的方法具有方便、快捷、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)并且對(duì)Lynch綜合征的確診具有指向性，因此被***接收，目前已幾乎替代前者。上述MSI的傳統(tǒng)檢測(cè)方法不能用于對(duì)Lynch綜合征的確診，而免疫組織化學(xué)方法因直接檢測(cè)相關(guān)蛋白對(duì)Lynch綜合征具有***的指向性。為了提高對(duì)Lynch綜合征的指向性，有學(xué)者建議將EpCAM列入錯(cuò)配修復(fù)蛋白檢測(cè)行列。然而對(duì)Lynch綜合征的確診必需依賴于對(duì)MLH1、MSH2、MSH6、PMS2以及EpCAM基因進(jìn)行突變或缺失的檢查結(jié)果。四、錯(cuò)配修復(fù)蛋白染色錯(cuò)配修復(fù)蛋白染色結(jié)果判斷應(yīng)注意以下幾點(diǎn):1）著色部位是否為核；2）內(nèi)對(duì)照（上皮細(xì)胞：正常腸上皮特別是腺體基底部細(xì)胞；間質(zhì)細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等）是否陽(yáng)性；3）**細(xì)胞的細(xì)胞核是否為陽(yáng)性（通常任何**細(xì)胞表達(dá)即判斷為該錯(cuò)配修復(fù)蛋白陽(yáng)性）錯(cuò)配修復(fù)蛋白結(jié)果解讀:一種或多種錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失提示為MSI-H**。通常MLH1功能缺陷會(huì)合并PMS2表達(dá)缺失，而MSH2缺陷則常合并MSH6表達(dá)缺失，反之不然。河南推薦dMMR抗體檢測(cè)試劑服務(wù)至上