天津?qū)I(yè)dMMR抗體檢測試劑共同合作

    msh6全稱為mutshomolog6()，是一種錯(cuò)配修復(fù)基因，定位于2號(hào)染色體的p臂16位上。dna錯(cuò)配修復(fù)對于超時(shí)遺傳信息完整性的維持是非常必要的。微衛(wèi)星重現(xiàn)性的改變是由于dna復(fù)制時(shí)鉸鏈不對位產(chǎn)生滑動(dòng)而導(dǎo)致的結(jié)果，又稱為微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。突變型的錯(cuò)配修復(fù)基因常表達(dá)于高頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(msi-h)患者中，與常染色體的顯性遺傳性疾病相關(guān)，稱為遺傳性非息肉病性結(jié)直腸ai(hnpcc)，也可見于散發(fā)性(msi-h)結(jié)直腸ai患者。錯(cuò)配修復(fù)(mmr)蛋白是一組細(xì)胞核內(nèi)酶，存在于所有的增殖細(xì)胞內(nèi)，參與發(fā)生了dna復(fù)制過程堿基錯(cuò)配的修復(fù)。這些蛋白形成復(fù)合物(異二聚體)結(jié)合于非正常的dna并啟動(dòng)***過程。mmr蛋白的喪失導(dǎo)致增殖細(xì)胞中dna復(fù)制錯(cuò)誤的堆積，特別是位于短重復(fù)核苷酸序列基因組的區(qū)域，這種現(xiàn)象即為所謂的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(msi)，因此，細(xì)胞中的mmr蛋白的缺失與微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定(msi-h)密切相關(guān)，與此相反即是微衛(wèi)星低度不穩(wěn)定(msi-l)和微衛(wèi)星穩(wěn)定(mss)。人類已經(jīng)認(rèn)定的錯(cuò)配修復(fù)功能的基因有九個(gè)，其中五種和臨床關(guān)系密切，因?yàn)樵谶z傳性非息肉病性結(jié)直腸ai(hnpcc，又稱lynch綜合征)中可能發(fā)生突變，其中msh6發(fā)生頻率9％。msh2與msh6形成異二聚體復(fù)合物，當(dāng)msh2缺乏時(shí)，msh6蛋白也同樣缺失。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)希望能和創(chuàng)新型藥企共同探索創(chuàng)新生物標(biāo)志物的臨床應(yīng)用潛力。天津?qū)I(yè)dMMR抗體檢測試劑共同合作

    當(dāng)liu細(xì)胞出現(xiàn)一種或幾種錯(cuò)配修復(fù)蛋白核表達(dá)的丟失，則提示liu為MSI-H。MLH1和MSH2作為錯(cuò)配修復(fù)復(fù)合體的共用亞單位，在發(fā)生功能缺陷時(shí)常同時(shí)伴有其同源錯(cuò)配修復(fù)蛋白的表達(dá)缺失。另外，如前所述，部分Lynch綜合征是由于EpCAM基因胚系突變導(dǎo)致下游MSH2基因功能缺陷所致。Musulen等發(fā)現(xiàn)，在MSH2表達(dá)缺失的liu中檢測出EpCAM蛋白缺失，與EpCAM基因突變的吻合率達(dá)100％，所以推薦將EpCAM免疫組織化學(xué)檢測加入到Lynch綜合征的篩查流程中。日常工作中用于鑒別肺腺ai與惡性間皮瘤的抗體Ber-EP4即是檢測EpCAM的常用克隆之一。免疫組織化學(xué)檢查錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)缺失的作用如下：(1)提示哪個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因發(fā)生了功能缺失(表1)；(2)與MLH1啟動(dòng)子甲基化檢測和／或BRAFV600E突變檢測結(jié)合，區(qū)分散發(fā)性MSI-H結(jié)直腸ai和可疑Lynch綜合征患者；(3)與EpCAM免疫組織化學(xué)檢查結(jié)合，為后續(xù)的Lynch綜合征遺傳學(xué)突變檢測提示方向。目前，4種主要的錯(cuò)配修復(fù)蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均已有穩(wěn)定的商品化抗體，但受組織固定、染色條件、抗體克隆號(hào)不同等因素的影響，可能會(huì)出現(xiàn)假陽性或假陰性結(jié)果。在判讀免疫組織化學(xué)染色結(jié)果時(shí)應(yīng)注意：(1)內(nèi)對照是否陽性；(2)著色部位是否為細(xì)胞核；。河北個(gè)性化dMMR抗體檢測試劑服務(wù)至上邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)--伴隨診斷整體解決方案提供者,檢測技術(shù)平臺(tái)全涵蓋.

    上述事實(shí)不斷警醒我國醫(yī)療從業(yè)者及衛(wèi)生決策者，要重視結(jié)直腸ai早期篩查預(yù)防及早診早治的價(jià)值。我國結(jié)直腸ai早診早治工作始于20世紀(jì)70年代，也并未落后于西方國家。但民眾對于結(jié)直腸ai的知曉情況、疾病相關(guān)知識(shí)科普情況，遠(yuǎn)落后于西方國家，這導(dǎo)致大量民眾不愿參與疾病篩查工作?；虺鲇趯ψ陨斫】档男判?，或出于不愿花費(fèi)時(shí)間成本的心理，或單純出于諱疾忌醫(yī)的心態(tài)。這都源于對疾病過程、疾病后果及早期***意義的缺乏認(rèn)知。相關(guān)研究結(jié)果已經(jīng)證明：依從性仍是我國結(jié)直腸ai篩查面臨的主要問題之一。解決這一問題，有賴于從國民學(xué)齡期開始進(jìn)行的衛(wèi)生及健康宣傳教育、醫(yī)療模式**和篩查形式的改進(jìn)，如依托企事業(yè)、學(xué)校進(jìn)行單位健康體檢等。2.當(dāng)前篩查策略存在局限：我國缺乏統(tǒng)一、規(guī)范、大規(guī)模的前瞻性研究論證和總結(jié)當(dāng)前篩查策略及方案的優(yōu)劣。篩查方法方面，F(xiàn)OBT及FIT在靈敏度和特異度方面存在較大局限性。結(jié)腸鏡檢查為當(dāng)前結(jié)直腸ai進(jìn)行人群篩查的金標(biāo)準(zhǔn)，因有侵入性及相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)，普查人群依從性較差，也成為限制篩查工作推廣的主要原因之一。結(jié)直腸ai篩查高危因素量化問卷具有我國特色，雖具備廉價(jià)、方便、易于***開展等優(yōu)勢，但其靈敏度及特異度低，*用于初篩。

    每孔加50μl含％abts(southernbiotech公司)和％h2o2的檸檬酸緩沖液()進(jìn)行顯色反應(yīng)，10-20min內(nèi)測定405nm波長下的od值。結(jié)果顯示，本發(fā)明單克隆抗體為igg2b型鼠源單克隆抗體。二、親和常數(shù)測定包被msh6重組蛋白，包被濃度為2μg/ml,100μl/孔，4℃包被過夜，pbs-t洗3次。每孔加200μl封閉液37℃封閉2h，pbs-t洗3次。實(shí)施例4中純化的單克隆抗體，從1：200開始2倍梯度稀釋，***1孔留空白對照，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。hrp標(biāo)記的羊抗鼠二抗1：20000稀釋，每孔100μl，37℃孵育1h，pbs-t洗3次。每孔加入100μl含％tmb(sigma公司)和％h2o2的檸檬酸-磷酸緩沖液顯色10min，加50μ。用酶標(biāo)儀測定波長450nm的吸光值。畫出od值對應(yīng)抗體稀釋倍數(shù)的曲線，找出≥1/2“平臺(tái)od值”對應(yīng)的稀釋倍數(shù)a。利用下列公式計(jì)算出親和常數(shù)為×109。三、單抗反應(yīng)特異性和應(yīng)用效果選擇msh6重組蛋白，用免疫印跡的方法檢測本發(fā)明單克隆抗體的識(shí)別特異性，免疫印跡實(shí)驗(yàn)過程如下：每種蛋白上樣約5-10ng，進(jìn)行12％聚丙烯酰胺凝膠電泳。按常規(guī)方法在bio-rad電轉(zhuǎn)移系統(tǒng)中將凝膠蛋白帶轉(zhuǎn)移到pvdf膜上(millipore公司)。將膜置于含5％脫脂奶粉的tbs-t封閉液中4℃過夜。加入單克隆抗體msh6。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)致力于解決創(chuàng)新藥物的研發(fā)痛點(diǎn)及患者的用藥痛點(diǎn)，助力精zhun醫(yī)療！

    3)陽性細(xì)胞核是否為liu細(xì)胞(圖2)。通常MLH1功能缺陷會(huì)合并PMS2表達(dá)缺失，而MSH2缺陷則常合并MSH6表達(dá)缺失，反之則不然。如果檢測結(jié)果出現(xiàn)MLH1、MSH2單獨(dú)缺失或MLH1／PMS2、MSH2／MSH6以外的聯(lián)合表達(dá)缺失，解釋結(jié)果時(shí)需格外謹(jǐn)慎。對免疫組織化學(xué)結(jié)果的判讀絕大多數(shù)文獻(xiàn)均采用“任何liu細(xì)胞核表達(dá)即判為該錯(cuò)配修復(fù)蛋白陽性”的標(biāo)準(zhǔn)，但新近有文獻(xiàn)報(bào)道發(fā)現(xiàn)少數(shù)MSI-Hliu表現(xiàn)為MSH6散在或小灶狀表達(dá)(<5％)而MSH2完整表達(dá)(圖2)。出現(xiàn)這一現(xiàn)象的病例有兩種情況，其一為病例同時(shí)存在MLH1和／或PMS2表達(dá)丟失，這是由于MSH6基因編碼區(qū)內(nèi)本身即有一個(gè)含8個(gè)核苷酸的微衛(wèi)星重復(fù)序列，在其他錯(cuò)配修復(fù)蛋白功能缺陷時(shí)可繼發(fā)引起MSH6基因體細(xì)胞突變而出現(xiàn)多數(shù)細(xì)胞失表達(dá)現(xiàn)象；另一種情況見于新輔助***后切除標(biāo)本，此時(shí)其他錯(cuò)配修復(fù)蛋白均完整表達(dá)且術(shù)前活檢標(biāo)本中MSH6也完整表達(dá)，推測該現(xiàn)象可能與新輔助***導(dǎo)致MSH6發(fā)生繼發(fā)突變或liu細(xì)胞在缺氧環(huán)境下下調(diào)了MSH6的表達(dá)有關(guān)。這一現(xiàn)象提示：(1)即使仍有少數(shù)liu細(xì)胞(<5％)表達(dá)錯(cuò)配修復(fù)蛋白，liu仍可表現(xiàn)為MSI-H；(2)對于MSH6免疫組織化學(xué)染色中出現(xiàn)的這種特殊現(xiàn)象需結(jié)合臨床病史和其他錯(cuò)配修復(fù)檢測的結(jié)果判斷。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)利用新一代智能技術(shù)補(bǔ)充傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的檢測模式，賦能醫(yī)療健康建設(shè)，更好地為臨床和患者服務(wù)。青海推薦dMMR抗體檢測試劑

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)圍繞生物標(biāo)志物研究、伴隨診斷開發(fā)，建立了完善的核酸組學(xué)、蛋白組學(xué)、細(xì)胞組學(xué)技術(shù)平臺(tái)。天津?qū)I(yè)dMMR抗體檢測試劑共同合作

    具有上述形態(tài)特點(diǎn)的liu也*有23％為MSI-H。TIL對判斷l(xiāng)iuMSI狀態(tài)較其他形態(tài)指標(biāo)相對特異，但在HE切片上識(shí)別TIL有一定困難，文獻(xiàn)報(bào)道采用CD3免疫組織化學(xué)染色輔助，以每高倍視野(HPF)8個(gè)CD3TIL為臨界值，其特異性和靈敏性分別為75％和67％。三、MSI檢測的主要方法在經(jīng)濟(jì)和有效的輔助檢測手段缺乏的年代，形態(tài)學(xué)指標(biāo)也許對篩選MSI-H結(jié)直腸ai及Lynch綜合征患者有很好的提示作用，但無論從特異性、敏感性還是證據(jù)的直接性、客觀性方面，形態(tài)學(xué)指標(biāo)都與分子檢測指標(biāo)存在差距。在越來越重視客觀證據(jù)的現(xiàn)代醫(yī)療實(shí)踐中，輔助檢測手段被越來越多地應(yīng)用到MSI-H結(jié)直腸ai的篩查中。如前所述，MSI是MSI結(jié)直腸ai的分子特征，錯(cuò)配修復(fù)基因功能缺陷是MSI結(jié)直腸ai發(fā)生的分子基礎(chǔ)，因此檢測liu的MSI狀態(tài)和／或錯(cuò)配修復(fù)缺失狀態(tài)是診斷MSI結(jié)直腸ai**直接的依據(jù)。1．免疫組織化學(xué)檢測錯(cuò)配修復(fù)蛋白：一種或多種錯(cuò)配修復(fù)蛋白的功能缺失可引起MSI-H，因此，檢測錯(cuò)配修復(fù)蛋白缺失情況可間接反應(yīng)liu的MSI狀態(tài)。錯(cuò)配修復(fù)蛋白在正常腸腺上皮細(xì)胞，特別是腺體基底部細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞的胞核中均有表達(dá)，可作為內(nèi)對照。天津?qū)I(yè)dMMR抗體檢測試劑共同合作