湖北一體化PD-L1抗體檢測試劑鄭重承諾

    本發(fā)明涉及一種抗體，與包括大于80％的hexin巖藻糖基化的糖基化的參照抗體相比，該種抗體實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的t細(xì)胞活化。此外，與非糖基化的參照抗體相比，該種抗體實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的t細(xì)胞活化，和其中所述t細(xì)胞活化是通過特征在于與fcγriiia的結(jié)合增強(qiáng)的抗體實(shí)現(xiàn)的。所述抗體是糖基化的，但是基本上缺少hexin巖藻糖基化。背景技術(shù)：免疫檢查點(diǎn)蛋白阻斷程序性死亡配體1(pd-l1)，也稱為分化簇274(cd274)或b7同源物1(b7-h1)，是一種在人類中由cd274基因編碼的蛋白質(zhì)并且是指免疫檢查點(diǎn)蛋白質(zhì)。pd-l1在比如t細(xì)胞和b細(xì)胞、樹突細(xì)胞(dc)、巨噬細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞和源自骨髓的肥大細(xì)胞的免疫細(xì)胞上組成性地表達(dá)(yamazaki等，2002,)。根據(jù)keir等(2008),，pd-l1還可以在各種非造血細(xì)胞上表達(dá)，如角膜、肺、血管上皮、肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胰島、胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞等等。此外，許多類型的細(xì)胞活化后在這些細(xì)胞上均能實(shí)現(xiàn)pd-l1的上調(diào)。在組織自身免疫疾病、同種異體移植和其它疾病狀態(tài)中，pd-l1在抑制免疫系統(tǒng)方面發(fā)揮了重要作用。pd-l1與程序性死亡-1受體(pd-1)(cd279)結(jié)合，后者提供調(diào)節(jié)t細(xì)胞活化的重要負(fù)共刺激信號。pd-1可以在所有類型的免疫細(xì)胞上表達(dá)。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)設(shè)有病原體檢測平臺Qiastat-Dx進(jìn)行呼吸道及胃腸道病原體檢測。湖北一體化PD-L1抗體檢測試劑鄭重承諾

    在所有測試的ai細(xì)胞系存在下觀察到通過pdl-gexfuc-和pm-pdl-gexfuc-的增強(qiáng)的活化。這在實(shí)施例20中描述。圖21：pdl-gexcdr突變體顯示了與未突變的對應(yīng)物相當(dāng)?shù)慕Y(jié)合和阻斷能力。a)采用表達(dá)pd-l1的du-145細(xì)胞和流式細(xì)胞術(shù)分析，在結(jié)合pd-l1的vh結(jié)構(gòu)域的cdr中具有不同的突變的巖藻糖減少的pdl-gex，比如：-pdl-gexfuc-cdrmuta()-pdl-gexfuc-cdrmutb()-pdl-gexfuc-cdrmutc()-pdl-gexfuc-cdrmutd()-pdl-gexfuc-cdrmute()-pdl-gexfuc-cdrmutf()-pdl-gexfuc-cdrmutg()-pdl-gexfuc-cdrmuth()-pdl-gexfuc-cdrmuti()也顯示了與未突變的pdl-gexfuc-相當(dāng)?shù)慕Y(jié)合pd-l1的能力。b)采用pd-l1/pd1阻斷elisa，巖藻糖減少的pdl-gex的cdr突變體(參見a)也顯示了與未突變的pdl-gexfuc-相當(dāng)?shù)淖钄嗄芰?。這在實(shí)施例21中描述。圖22：pm-pdl-gexcdr突變體顯示了與未突變的對應(yīng)物相當(dāng)?shù)慕Y(jié)合和阻斷能力。a)采用pd-l1抗原elisa，在結(jié)合pd-l1的scfv區(qū)的vh結(jié)構(gòu)域的cdr中具有不同的突變的巖藻糖減少的pm-pdl-gex，比如pm-pdl-gexfuc-cdrmuta()或pm-pdl-gexfuc-cdrmutb()，顯示與未突變的pm-pdl-gexfuc-相當(dāng)?shù)慕Y(jié)合pd-l1的能力。b)采用pd-l1/pd1阻斷elisa。湖北一體化PD-L1抗體檢測試劑鄭重承諾邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)擁有3D HISTECH Pannoramic MIDI數(shù)字化病理掃描儀及91360遠(yuǎn)程病理系統(tǒng)。

    本發(fā)明的所述ta-muc1抗體可包含fc區(qū)和結(jié)合pd-l1的單鏈fv區(qū)。此外，所述ta-muc1抗體可包含結(jié)合ta-muc1的vh和vl結(jié)構(gòu)域。所述ta-muc1抗體的所述單鏈fv區(qū)可與所述輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域或與所述fc區(qū)的ch3結(jié)構(gòu)域偶聯(lián)。本發(fā)明可提供本發(fā)明的一種抗體，單特異性或雙特異性pd-l1抗體和/或單特異性或雙特異性ta-muc1抗體用在***中。此外，本發(fā)明可提供一種抗體，單特異性或雙特異性pd-l1抗體和/或單特異性或雙特異性ta-muc1抗體用在用于活化t細(xì)胞的方法中。另外，本發(fā)明可涵蓋本發(fā)明的一種抗體，其中推薦地t細(xì)胞的活化用于ai癥疾病、炎性疾病、病毒***性疾病和自身免疫疾病的***。特別地，ai癥疾病可選自黑色素瘤、ai(carcinoma)、淋巴瘤、肉瘤和間皮瘤，包括肺ai、腎ai、膀胱ai、胃腸ai、皮膚ai、乳腺ai、卵巢ai、宮頸ai和前列腺ai。另外，炎性疾病可選自炎癥性腸病(ibd)、盆腔炎(pid)、缺血性卒中(is)、阿爾茨海默病、喘哮、尋常天皰瘡、皮炎/濕疹。病毒***性疾病可選自人免疫缺陷病毒(hiv)、單純皰疹病毒(hsv)、epsteinbarr病毒(ebv)、流感病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒(lcmv)、乙型肝炎病毒(hbv)、丙型肝炎病毒(hcv)。此外，自身免疫疾病選自i型糖尿病(dm)、多發(fā)性硬化癥。

    圖17：在它們的fc部分具有突變的抗-pd-l1抗體的fcγriiia接合增加。通過向較低有效濃度移動(dòng)(shift)可以看出，與未突變的pdl-gexh9d8相比。pm-pdl-gexh9d8mut1和pm-pdl-gexh9d8mut2顯示與fcγriiia增加的結(jié)合。這在實(shí)施例17中描述。圖18：在它們的fc部分具有突變的抗-pd-l1抗體的t細(xì)胞活化增加。與pdl-gexh9d8(未突變的)相比，pm-pdl-gexmut1和pdl-gexmut2顯示增加的t細(xì)胞活化，這證明通過采用去巖藻糖基化的抗-pd-l1抗體(pdl-gexfuc-)或通過采用包含導(dǎo)致增強(qiáng)的fcγriiia結(jié)合的序列突變的抗-pd-l1抗體可以實(shí)現(xiàn)增強(qiáng)的t細(xì)胞活化。這在實(shí)施例18中描述。圖19：通過增殖表現(xiàn)的由于去巖藻糖基化的抗-pd-l1抗體而增強(qiáng)的t細(xì)胞活化。與正常巖藻糖基化的抗-pd-l1抗體(pdl-gexh9d8)相比和與非糖基化的抗-pd-l1(阿特珠單抗)相比，去巖藻糖基化的抗-pd-l1抗體(pdl-gexfuc-)顯示cd8t細(xì)胞增殖增加。這在實(shí)施例19中描述。圖20：在ai細(xì)胞存在下增強(qiáng)的t細(xì)胞活化。在mlr中比較了去巖藻糖基化的抗-pd-l1抗體(pdl-gexfuc-)與去巖藻糖基化的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1抗體(pm-pdl-gexfuc-)在ai細(xì)胞存在下誘導(dǎo)t細(xì)胞活化的能力。然而?！具~杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)】一直以來致力于轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)服務(wù)和伴隨診斷產(chǎn)品開發(fā)及商業(yè)化。

    未檢測到由巖藻糖減少的抗-pd-l1。pdl-gex-fuc-)和巖藻糖減少的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1(pm-pdl-gex-fuc-)介導(dǎo)的對b細(xì)胞(a)和單核細(xì)胞(b)的adcc效應(yīng)。相比而言，陽性對照誘導(dǎo)原代b細(xì)胞和daudi細(xì)胞二者的殺傷。對于單核細(xì)胞，作為陽性對照的星形孢菌素(staurosporine)誘導(dǎo)單核細(xì)胞和thp-1對照細(xì)胞的殺傷。這在實(shí)施例6中描述。圖7：測量pd-1/pd-l1阻斷。在基于細(xì)胞的pd-1/pd-l1阻斷生物分析中，巖藻糖減少的和正常巖藻糖基化的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1higg1顯示相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。根據(jù)pd-l1/pd-1阻斷elisa，巖藻糖減少的(pm-pdl-gexfuc-)和正常巖藻糖基化(pm-pdl-gexh9d8)的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1higg1均檢測到pd-1/pd-l1阻斷(break)的相當(dāng)?shù)膭┝恳蕾囆葬尫?參見圖1)。正如所預(yù)期的，納武單抗(nivolumab)作為陽性對照是有效的。這在實(shí)施例7中描述。圖8：mlr中il-2的測量。在同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mlr)中，巖藻糖減少的和正常巖藻糖基化的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1higg1和巖藻糖減少的抗-pd-l1higg1誘導(dǎo)相當(dāng)?shù)膇l-2。a)通過流式細(xì)胞術(shù)分析modc表型的**性實(shí)驗(yàn)。modc表達(dá)共刺激分子cd80和cd86、dc標(biāo)志物cd209和mhcii類表面受體hla-dr。此外，發(fā)現(xiàn)modc表達(dá)cd16。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)可以提供覆蓋肺ai、腸ai、肝ai、胃ai、乳腺ai、前列腺ai等多種實(shí)體瘤的上百項(xiàng)檢測項(xiàng)目。湖北一體化PD-L1抗體檢測試劑鄭重承諾

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)利用數(shù)字PCR進(jìn)行低豐度突變研究等；提供循環(huán)腫l瘤DNA檢測，可檢測EGFR、ERBB2等Biomarker。湖北一體化PD-L1抗體檢測試劑鄭重承諾

    巖藻糖減少的單特異性pdl-gexfuc-和巖藻糖減少的雙特異性pm-pdl-gexfuc-介導(dǎo)對pd-l1陽性腫l瘤細(xì)胞***增強(qiáng)的adcc(圖5d)。這一數(shù)據(jù)表明通過應(yīng)用巖藻糖減少的單特異性pdl-gexfuc-和雙特異性pm-pdl-gexfuc-抗體可以增強(qiáng)針對pd-l1+ai細(xì)胞的adcc。據(jù)報(bào)道，pd-l1不only在腫l瘤細(xì)胞上表達(dá)，還在不同的免疫細(xì)胞如單核細(xì)胞或b細(xì)胞上表達(dá)。由于與它們的正常巖藻糖基化的對應(yīng)物相比。巖藻糖減少的單特異性抗-pd-l1和巖藻糖減少的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1對腫l瘤細(xì)胞顯示***增強(qiáng)的adcc效應(yīng)，可以預(yù)期它們還介導(dǎo)針對pd-l1+免疫細(xì)胞的adcc。由于描述了單核細(xì)胞和b細(xì)胞表達(dá)pd-l1，因此在基于facs的adcc分析中將兩種免疫細(xì)胞群作為潛在的靶細(xì)胞進(jìn)行了分析。令人驚訝地，未檢測到由巖藻糖減少的單特異性抗-pd-l1和巖藻糖減少的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1介導(dǎo)的針對比如b細(xì)胞和單核細(xì)胞的免疫細(xì)胞的adcc效應(yīng)(圖6a和6b)。此外，實(shí)施例8中描述的實(shí)驗(yàn)表明，在同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mlr)中，巖藻糖減少的和正常巖藻糖基化的雙特異性抗-pd-l1/ta-muc1higg1和巖藻糖減少的抗-pd-l1higg1誘導(dǎo)相當(dāng)?shù)膇l-2(圖8b)?；旌狭馨图?xì)胞反應(yīng)(mlr)是一種功能分析。湖北一體化PD-L1抗體檢測試劑鄭重承諾