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    GC-MS（氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀）GC-MS簡(jiǎn)介GC-MS是氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的簡(jiǎn)稱，是將氣相色譜儀與質(zhì)譜儀通過適當(dāng)接口相結(jié)合，借助計(jì)算機(jī)技術(shù)，進(jìn)行聯(lián)用的分析技術(shù)。GC為氣相色譜，流動(dòng)相為惰性氣體，多為氦氣，由進(jìn)樣口、色譜柱和檢測(cè)器三部分構(gòu)成；MS為質(zhì)譜，由離子源、濾質(zhì)器、檢測(cè)器三部分構(gòu)成，廣泛應(yīng)用于純物質(zhì)鑒定。GC-MS因其具有GC的高分辨率和MS的高靈敏度，被廣泛應(yīng)用于復(fù)雜組分的分離與鑒定，是生物樣品中藥物代謝中定性與定量的主要工具。應(yīng)用領(lǐng)域代謝組學(xué)分析藥物分析結(jié)構(gòu)鑒定生物組織蛋白分析物質(zhì)組分鑒定檢測(cè)示例技術(shù)流程送樣須知血清、血漿≥尿液≥動(dòng)物組織≥250mg樣本寄送地址：天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)第十三大街37號(hào)逸夫樓225，降老師（收）（具體樣本保存與運(yùn)輸條件請(qǐng)與我們聯(lián)系）我們的優(yōu)勢(shì)1、提供各種實(shí)驗(yàn)材料和儀器，滿足項(xiàng)目課題實(shí)驗(yàn)需要。2、專業(yè)的操作人員。3、高規(guī)格實(shí)驗(yàn)室。4、數(shù)據(jù)結(jié)果交付周期快。5、完善的服務(wù)體系，全程跟進(jìn)，確保滿意。咨詢與訂購(gòu)感謝您選擇我們的服務(wù)，如果您有任何問題，請(qǐng)聯(lián)系我們，我們將竭誠(chéng)為您解答和服務(wù)?？头娫挘壕W(wǎng)站：郵箱：market@QQ：一、測(cè)序策略：提取樣品的基因組DNA，檢測(cè)基因組DNA的完整性和濃度。邁杰多平臺(tái)的研究?jī)?yōu)勢(shì)以及多組學(xué)數(shù)據(jù)的挖掘能力，促進(jìn)產(chǎn)學(xué)研醫(yī)結(jié)合，加速項(xiàng)目成果轉(zhuǎn)化，創(chuàng)新科技產(chǎn)品研發(fā)。湖北多靶點(diǎn)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)服務(wù)至上

    圖7IHC檢測(cè)FGF-19過表達(dá)（左：正常膽囊組織(陽性對(duì)照)；右：肝細(xì)胞*組織(弱陽性)）??方案4：RNAscope法評(píng)估FGFR1/2/3/4的mRNA表達(dá)水平此外，RNAscope在細(xì)胞原位評(píng)估m(xù)RNAs水平方面，能夠更直接精細(xì)地確定基因的擴(kuò)增狀況。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)在數(shù)字病理平臺(tái)上已經(jīng)建立了檢測(cè)FGFR過表達(dá)的RNAscope的方法，可以原位檢測(cè)FGFR1-4mRNAs表達(dá)水平，為FGFR抑制劑的生物標(biāo)志物檢測(cè)和研究提供了更多可能（圖8）。圖8RNAscope檢測(cè)肺*總FGFR1/2/3/4的mRNA表達(dá)水平除以上示范，邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)還可提供其他類型（如PD/PK生物標(biāo)志物）解決方案并已有相關(guān)經(jīng)驗(yàn)（表7）。References:[1]HelstenT,ElkinS,ArthurE,[J].ClinicalCancerResearchAnOfficialJournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch,2016,22(1):259.[2]TurnerN,.[J].NatureReviewsCancer,2010,10(2):116-129.[3]PetersKG,MarieJ,WilsonE,[J].Nature,1992,358(6388):678-681.[4]KangS,ElfS,DongS,.[J].MolecularandCellularBiology,2009,29(8):2105-2117.[5]BabinaIS,[J].NatureReviewsCancer,2017,17(5):318.[6]NataliaPor?bska,Marta,.[J].JournalofClinicalMedicine。 北京Claudin18.2邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)誠(chéng)信合作邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)--伴隨診斷整體解決方案提供者,檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)全涵蓋.

    ***代測(cè)序技術(shù)常見問題及解決方法樣品測(cè)序無信號(hào)此時(shí)測(cè)序完全失敗，**可能的原因是待測(cè)樣品出現(xiàn)了降解或引物失效，從而導(dǎo)致測(cè)序引物與待測(cè)樣品無法結(jié)合。此時(shí)探索造成測(cè)序失敗的具體原因并無實(shí)際意義，**快速、簡(jiǎn)便的辦法是重新提供質(zhì)量合格的引物和樣品再次進(jìn)行測(cè)序。樣品測(cè)序信號(hào)差此種情況可能是引物或模板的質(zhì)量不高或是引物和模板的匹配性不好引起的，但**有可能的原因是待測(cè)樣品濃度偏低。待測(cè)樣品濃度偏低可能是由于PCR效率較低，也可能是PCR與測(cè)序間隔時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致PCR產(chǎn)物降解。建議PCR完成后盡快進(jìn)行測(cè)序，如果PCR產(chǎn)物濃度本身較低，可以使用PCR產(chǎn)物作為模板進(jìn)行二次PCR，也可以對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆后，再進(jìn)行測(cè)序。樣品測(cè)序衰減可能是由于待測(cè)樣品包含特殊的核酸結(jié)構(gòu)，如重復(fù)序列、回文結(jié)構(gòu)、發(fā)卡結(jié)構(gòu)、GC富集區(qū)、AT富集區(qū)等。由于是樣品本身結(jié)構(gòu)問題，因此，無法通過優(yōu)化測(cè)序反應(yīng)解決，應(yīng)從待測(cè)樣品另一端進(jìn)行反向測(cè)序，之后兩端的測(cè)序結(jié)果拼接得到完整序列。樣品測(cè)序中斷此種情況是由于待測(cè)樣品包含特殊高級(jí)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致堿基無法與模板結(jié)合，DNA聚合酶無法繼續(xù)延伸。此情況與樣品測(cè)序衰減解決辦法相同，均為從待測(cè)樣品另一端進(jìn)行反向測(cè)序。

    1、文庫把DNA樣本片段化或篩分成指定長(zhǎng)度的目標(biāo)序列，再加上寡核苷酸接頭（和條形碼DN**段的大小是NGS文庫構(gòu)建的主要因素。片段化可以通過不同的方法，比如PCR擴(kuò)增法。（NGS實(shí)驗(yàn)流程相對(duì)復(fù)雜，在過程中會(huì)應(yīng)用到PCR擴(kuò)增技術(shù)）），用于后續(xù)測(cè)序上機(jī)。2、讀長(zhǎng)被片段化后的DNA鏈長(zhǎng)度，二代測(cè)序通常是100-200bp（bp是雙鏈DNA堿基對(duì)單位）。3、通量一次測(cè)序上機(jī)可以運(yùn)行的樣本（基因）數(shù)量。4、測(cè)序深度一個(gè)基因片段被掃描的次數(shù)，測(cè)序深度深可提高低頻突變檢出率和檢測(cè)準(zhǔn)確率。5、全基因組測(cè)序一種生物的全部基因序列的測(cè)序，人的基因組序列約3G，基因組是一個(gè)細(xì)胞或者生物體所攜帶的全部遺傳信息。作者：心平氣和鏈接：源：知乎著作權(quán)歸作者所有。商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)聯(lián)系作者獲得授權(quán)，非商業(yè)轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明出處。 邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)病理檢測(cè)平臺(tái)配備有Roche/Leica/Dako等多種全自動(dòng)檢測(cè)儀器，有病理醫(yī)生進(jìn)行精確的判讀。

    1、Illumina原理：橋式PCR+4色熒光可逆終止+激光掃描成像主要步驟：①DNA文庫制備——超聲打斷加接頭②Flowcell——吸附流動(dòng)DN**段③橋式PCR擴(kuò)增與變性——放大信號(hào)④測(cè)序——測(cè)序堿基轉(zhuǎn)化為光學(xué)信號(hào)優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)：Illumina的這種測(cè)序技術(shù)每次只添加一個(gè)dNTP的特點(diǎn)能夠很好的地解決同聚物長(zhǎng)度的準(zhǔn)確測(cè)量問題，它的主要測(cè)序錯(cuò)誤來源是堿基的替換。而讀長(zhǎng)短（200bp-500bp）也讓其應(yīng)用有所局限。2、Roche454油包水PCR+4種dNTP車輪大戰(zhàn)+檢測(cè)焦磷酸水解發(fā)光主要步驟：①DNA文庫制備——噴霧打斷加接頭②乳液PCR——注水入油**PCR③焦磷酸測(cè)序——磁珠入孔，焦磷酸信號(hào)轉(zhuǎn)化為光學(xué)信號(hào)優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)：454技術(shù)優(yōu)勢(shì)測(cè)序讀長(zhǎng)較長(zhǎng)，平均可達(dá)400bp，缺點(diǎn)是無法準(zhǔn)確測(cè)量類似于PolyA的情況時(shí)，測(cè)序反應(yīng)會(huì)一次加入多個(gè)T，可能導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。也正是由于這一原因，454技術(shù)會(huì)在測(cè)序過程中引入插入和缺失的測(cè)序錯(cuò)誤。3、IonTorrent原理油包水PCR+4種dNTP車輪大戰(zhàn)+微電極PH檢測(cè)主要步驟：①DNA文庫制備——噴霧打斷加接頭②乳液PCR——注水入油**PCR③微電極pH檢測(cè)——磁珠入池記錄pH優(yōu)勢(shì)劣勢(shì)：IonTorrent與454相比，主要差異在測(cè)序中，IonTorrent不需要昂貴的物理成像設(shè)備，成本相對(duì)較低體積較小。邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)為客戶提供生物標(biāo)記物發(fā)現(xiàn)、 靶點(diǎn)驗(yàn)證、伴隨診斷開發(fā)與商業(yè)化、患者用藥指導(dǎo)等一體化解決方案。福建專業(yè)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)來電咨詢

邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)目前已完成約30+靶點(diǎn)的方法學(xué)驗(yàn)證，50+靶點(diǎn)的方法學(xué)建立。湖北多靶點(diǎn)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)服務(wù)至上

    1977年，WalterGilbert和FrederickSanger發(fā)明了***臺(tái)測(cè)序儀，并應(yīng)用其測(cè)定了***個(gè)基因組序列，噬菌體X174，全長(zhǎng)5375個(gè)堿基。由此開始，人類獲得了探索生命遺傳本質(zhì)的能力，生命科學(xué)的研究進(jìn)入了基因組學(xué)的時(shí)代，到至今為止的四十年時(shí)間內(nèi)，測(cè)序技術(shù)已取得了相當(dāng)大的發(fā)展，從***代發(fā)展到了第三代測(cè)序技術(shù)。Sanger所發(fā)明的測(cè)序方法被稱為***代測(cè)序技術(shù)，該技術(shù)直到現(xiàn)在依然被***使用，但是其一次只能獲得一條長(zhǎng)度在700～1000個(gè)堿基的序列，無法滿足現(xiàn)代科學(xué)發(fā)展對(duì)生物基因序列獲取的迫切需求。高通量測(cè)序(High-ThroughputSequencing,HTS)是對(duì)傳統(tǒng)Sanger測(cè)序的**性變革，其解決了一代測(cè)序一次只能測(cè)定一條序列的限制，一次運(yùn)行即可同時(shí)得到幾十萬到幾百萬條核酸分子的序列，因此也被稱為新一代測(cè)序(NextGenerationSequencing,NGS)或第二代測(cè)序。第二代測(cè)序技術(shù)雖然測(cè)序的通量**增加，但是其獲得單條序列長(zhǎng)度很短，想要得到準(zhǔn)確的基因序列信息依賴于較高的測(cè)序覆蓋度和準(zhǔn)確的序列拼接技術(shù)，因此**終得到的結(jié)果中會(huì)存在一定的錯(cuò)誤信息。因此，科研人員又發(fā)明了第三代測(cè)序技術(shù)也稱為單分子測(cè)序技術(shù)，該技術(shù)在保證測(cè)序通量的基礎(chǔ)上，對(duì)單條長(zhǎng)序列進(jìn)行從頭測(cè)序。 湖北多靶點(diǎn)邁杰轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)NGS平臺(tái)服務(wù)至上