靶向捕獲高通量測序服務(wù)

單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序中，制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液至關(guān)重要。而懸液制備好后質(zhì)檢結(jié)果的判斷也是大家需要掌握的必備技能。單細(xì)胞懸液質(zhì)檢關(guān)卡究竟是怎樣運(yùn)作的呢？單細(xì)胞懸液質(zhì)控要求：?細(xì)胞濃度：700-1200cells/μl；?細(xì)胞活率>80%（當(dāng)細(xì)胞懸液活率低于70%時(shí)建議進(jìn)行去除死細(xì)胞處理）；細(xì)胞團(tuán)及碎片雜質(zhì)<5%（無細(xì)胞粘連，無明顯的細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)，并保證細(xì)胞的完整性）；?細(xì)胞狀態(tài)：細(xì)胞直徑在7-40um之間（細(xì)胞直徑過大則建議進(jìn)行抽核處理）；?不存在逆轉(zhuǎn)錄抑制劑和非細(xì)胞的核酸分子。DNA樣品請?zhí)峁╇娪灸z圖，濃度>20 ng/μl，總量一般1～2 μg。乙醇沉淀DNA或凍干DNA，可冰袋運(yùn)輸，不超過3天。靶向捕獲高通量測序服務(wù)

長鏈非編碼RNA(lncRNA)測序(只限有參考基因組物種)，項(xiàng)目介紹：長鏈非編碼RNAs（Long non-coding RNAs，LncRNAs）是一類轉(zhuǎn)錄本長度大于200 nt且不編碼蛋白質(zhì)的RNAs（不含rRNA），普遍存在于各種生物體內(nèi)。哺乳動(dòng)物基因組序列中4%~9%的序列產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄本是LncRNA（相應(yīng)的蛋白編碼RNA比例是1%）。近年來研究表明，LncRNA參與了多種重要的調(diào)控過程，如X染色體沉默、基因組印記及染色質(zhì)修飾等。通過LncRNA測序，可以快速獲得與其生物學(xué)過程或者疾病相關(guān)的LncRNA的表達(dá)變化，從而促進(jìn)LncRNA的深入研究。上海市多重PCR高通量測序請合理安排樣品寄送時(shí)間，避免樣本在周六、周日或法定節(jié)假日到達(dá)生工生物。

small RNA測序，項(xiàng)目簡介：Small RNA是一類重要的體內(nèi)調(diào)節(jié)分子，長度在18-30 nt之間，主要包括miRNA、piRNA和siRNA。它的功能主要是誘導(dǎo)基因沉默，參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化，以及個(gè)體發(fā)育、生殖等重要生物學(xué)過程。高通量測序技術(shù)可以對樣本中所有small RNA家族進(jìn)行測序和表達(dá)定量，從而解析miRNA、siRNA、piRNA和其它非編碼RNA以及相應(yīng)靶序列。測序使用Illumina Xten平臺(tái)，測序原始數(shù)據(jù)質(zhì)控后，進(jìn)行Clean reads 長度分布統(tǒng)計(jì)，small RNA注釋，已知 miRNA 注釋，已知piRNA注釋，ncRNA分析，新 miRNA 預(yù)測（有參考基因組），差異基因可視化分析，miRNA 家族分析，差異表達(dá) miRNA 聚類分析，miRNA靶基因預(yù)測，靶基因GO、KEGG富集分析。

對于微生物樣品，請客戶如實(shí)聲明所屬物種；對于可能致病的微生物，生工將拒收。以固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的樣品，需將樣品從培養(yǎng)基上刮取下來，用干冰寄送；以液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的樣品，需離心后棄培養(yǎng)液收集樣品，用RNA組織保存液（例如RNA-Be-Locker A）保存，以干冰或冰袋寄送；沒有RNA組織保存液的情況下，也可用液氮或干冰乙醇速凍，保存于-80°C 冰箱，埋于足量干冰寄送。***樣品送樣量需至少達(dá)到100 mg/樣；細(xì)菌樣品送樣量需至少達(dá)到107（10的7次方）數(shù)量級(jí)，同時(shí)，在與樣本一同寄送的送樣表上，標(biāo)明屬于革蘭氏陽性菌（G+）還是革蘭氏陰性菌（G-）。10xGenomics Chromium X多通道+高捕獲+10x的CellPlex多樣本混樣技術(shù)。

全轉(zhuǎn)錄組測序（Total RNA-Seq），項(xiàng)目介紹：全轉(zhuǎn)錄組是指特定細(xì)胞在特定狀態(tài)下所能轉(zhuǎn)錄出來的所有RNA的總和，包括mRNA和非編碼RNA（non-coding RNA）。針對非編碼RNA的研究主要集中在具有調(diào)控作用的miRNA，lncRNA和circRNA?；诙鷾y序技術(shù)的全轉(zhuǎn)錄組測序研究，同時(shí)分析同一樣本中的mRNA，lncRNA，circRNA和miRNA，并且通過關(guān)聯(lián)分析，使研究內(nèi)容更加系統(tǒng)化，致力于深入挖掘生命現(xiàn)象背后的轉(zhuǎn)錄調(diào)控問題。組織樣品或者總 RNA， 樣品名稱清晰，干冰運(yùn)輸。如果問現(xiàn)在什么技術(shù)是測序?qū)玫膶檭?，那么單?xì)胞測序則是我們不得不提及的技術(shù)了。上海地區(qū)無參轉(zhuǎn)錄組高通量測序產(chǎn)品

寄送RNA樣品請置于1.5 ml離心管中，管上注明樣品名稱、濃度以及制備時(shí)間，管口使用Parafilm封口。靶向捕獲高通量測序服務(wù)

通過顯微鏡使用血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果：明場（細(xì)胞未染色）：主要可以觀察懸液背景質(zhì)量（背景干凈，無雜質(zhì)碎片，無細(xì)胞團(tuán)塊）；臺(tái)盼藍(lán)場（細(xì)胞與臺(tái)盼藍(lán)染色后）：主要可以觀察活性（主要為活細(xì)胞，未染色藍(lán)色的為活細(xì)胞）；通過臺(tái)盼藍(lán)場計(jì)算活率：90%>80%；細(xì)胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來看，血球計(jì)數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)，屬于高質(zhì)量單細(xì)胞懸液。以上就是我們本次的單細(xì)胞懸液質(zhì)檢指南分享啦。靶向捕獲高通量測序服務(wù)

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