多重擴增高通量測序平臺

來源: 發(fā)布時間:2022-08-29

臺盼藍染色原理:臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不被染色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內(nèi)而使死細胞染成淡藍色。

通過顯微鏡使用血球計數(shù)板質(zhì)檢得到質(zhì)檢結(jié)果:明場(細胞未染色):主要可以觀察懸液背景質(zhì)量(背景干凈,無雜質(zhì)碎片,無細胞團塊);臺盼藍場(細胞與臺盼藍染色后):主要可以觀察活性(主要為活細胞,未染色藍色的為活細胞);通過臺盼藍場計算活率:90%>80%;細胞濃度:710cells/μl;等結(jié)果來看,血球計數(shù)板質(zhì)檢結(jié)果的展示可以看出所有指標(biāo)均符合上機標(biāo)準(zhǔn),屬于高質(zhì)量單細胞懸液。 對于需要進行RNA抽提的部分特殊樣品,可以將組織在液氮中研磨后用TRIzol懸浮后用普通冰袋寄送。多重擴增高通量測序平臺

為什么要用單細胞測序技術(shù)?細胞是生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位,在生物體生長發(fā)育的過程中,因細胞類型、外界環(huán)境以及內(nèi)部調(diào)節(jié)因素的不同,其轉(zhuǎn)錄組信息也不盡相同。由于基因組和表觀遺傳的重編程,以及在細胞分裂和分化過程中出現(xiàn)的誤差造成來自同一細胞系或個體的細胞呈現(xiàn)出不同的基因組、轉(zhuǎn)錄組和表觀基因組[4]。這就是我們上面提到的細胞異質(zhì)性。細胞異質(zhì)性是生物組織和生物系統(tǒng)的普遍特征[5]。但是我們常規(guī)的二代測序檢測的是一個細胞群體的基因組、轉(zhuǎn)錄組的信息,如培養(yǎng)的大量細胞、動植物組織甚至是整個生物體。在過去的20多年中,人們對轉(zhuǎn)錄組的人數(shù)仍然局限在群體水平[6]。這種方法可以為我們提供大量的基因組或轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),卻無法揭示細胞的異質(zhì)性。傳統(tǒng)方法得到的是細胞群的平均基因組,而單細胞測序測量的是細胞群中單個細胞的基因組[7]?,F(xiàn)在也有學(xué)者為了區(qū)分傳統(tǒng)測序和單細胞測序的區(qū)別,將傳統(tǒng)方法稱為批量測序。上海市多重PCR高通量測序技術(shù)寄送 RNA 樣品請置于 1.5 ml 離心管中,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時間,管口使用 Parafilm 封口。

生工人、大、小鼠全基因組測序,項目介紹:人或者大、小鼠全部基因組重測序,研究其突變信息(包括SNP/InDel/CNV/SV),并注釋突變位點信息。該技術(shù)可同時獲取編碼區(qū)及非編碼區(qū)突變信息,被廣泛應(yīng)用于遺傳病、tumour及其它其它疾病研究中。測序平臺:HiSeq XTen平臺進行PE150測序。生工微生物基因組測序,項目介紹:微生物基因組重測序(有參)目前越來越多的微生物基因組被解析出來了。從而使得科研工作者們可以對某些物種微生物進行進行物種進化、種群特征、選擇壓力等研究。利用高通量測序技術(shù),對有參考基因組微生物進行多個體的基因組重測序,精細分析其與參考基因組的SNP、InDel、SV等變異信息。

通過顯微鏡使用血球計數(shù)板質(zhì)檢能觀察到懸液背景質(zhì)量和細胞數(shù)目及活性的評估。讓我們再來回顧一下臺盼藍染色原理:臺盼藍染色原理:臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不被染色。而死細胞的細胞膜透性增高,可使染料進入細胞內(nèi)而使死細胞染成淡藍色。怎樣通過血球計數(shù)板進行質(zhì)檢操作呢?將血球計數(shù)板擦拭干凈,取干凈的蓋玻片蓋在計數(shù)板上;將細胞懸液混勻(或10μl臺盼藍+10μl細胞懸液),吸出10μl懸液至計數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)使細胞核懸液鋪滿蓋玻片和計數(shù)板之間;在顯微鏡下分別對V1/V2/V3/V4四個計數(shù)區(qū)域進行計數(shù);按細胞計數(shù)公式進行計算,計算公式:細胞總數(shù)={(V1+V2+V3+V4)/4}*10000*懸液體積*稀釋倍數(shù),V1/V2/V3/V4為各個計數(shù)區(qū)的細胞數(shù)目,細胞活率=活細胞數(shù)目/總細胞數(shù)目*100%。關(guān)鍵是KBSeq還可以省錢。

微生物基因組重測序(有參):目前越來越多的微生物基因組被解析出來了。從而使得科研工作者們可以對某些物種微生物進行進行物種進化、種群特征、選擇壓力等研究。利用高通量測序技術(shù),對有參考基因組微生物進行多個體的基因組重測序,精細分析其與參考基因組的SNP、InDel、SV等變異信息。微生物基因組從頭測序(無參):對于不斷分離培養(yǎng)微生物的客戶來說,要確定一個菌株是否是新菌株或者新菌種,較快捷的辦法就是,直接進行基因組測序。利用高通量測序技術(shù),對這些基因組進行高深度測序,然后進行基因組組裝,獲得基因組的框架圖或者精細圖甚至是完成圖。從而可以快速解析其基因組結(jié)構(gòu)、基因功能、進化關(guān)系。如果你的樣品是質(zhì)?;蛘呤蔷?,那為什么不試試我們的KBSeq呢?上海市轉(zhuǎn)錄組高通量測序產(chǎn)品

ChIP項目至少要求50ng DNA,以Qubit 2.0檢測為準(zhǔn)。其余具體咨詢生工高通量測序部。多重擴增高通量測序平臺

轉(zhuǎn)錄組測序,項目介紹:RNA-Seq,是基于新一代測序技術(shù)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究方法:首先提取生物樣品的全部轉(zhuǎn)錄的 RNA 并進行 mRNA 富集,然后反轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后進行新一代高通量測序,在此基礎(chǔ)上進行短片段拼接組裝,從而獲得一個個單獨轉(zhuǎn)錄本,進而可以對該生物樣品當(dāng)前狀態(tài)的基因表達狀況有全局了解。對不同階段或部位生物樣品的轉(zhuǎn)錄組進行 比較分析,則可以在轉(zhuǎn)錄層面得到基因表達水平的變化,針對關(guān)鍵基因則可以進行代謝通路(Pathway)的構(gòu)建。多重擴增高通量測序平臺

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