2013年下半年，Life-technologies推出了QuantStudio 3D數(shù)字PCR系統(tǒng)， 這也是目前數(shù)字PCR市場上***型號(hào)的產(chǎn)品。采用高密度的納升流控芯片技術(shù)，樣本均勻分配至20,000個(gè)單獨(dú)的反應(yīng)孔中。在整個(gè)工作流程中，樣本之間保持完全隔離 ，可以有效地防止樣品交叉污染，減少移液過程，簡化操作步驟。同時(shí)芯片式設(shè)計(jì)避免了微滴式系統(tǒng)可能面臨的管路堵塞問題。作為Life-technologies在OpenArray芯片平臺(tái)之外推出的全新的芯片式數(shù)字PCR系統(tǒng)，值得一提的是，這個(gè)全新的系統(tǒng)在設(shè)計(jì)理念上綜合考慮了系統(tǒng)穩(wěn)定性與運(yùn)行成本因素，直接反映了該系統(tǒng)“適合所有分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用的數(shù)字PCR系統(tǒng)”的市場定位。市場想象空間大，國內(nèi)外入局者眾多。浙江數(shù)字PCR數(shù)字PCR怎么樣
使用不合適的引物可能會(huì)引入引物二聚體、非特異性擴(kuò)增等，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在此，小Q建議您在設(shè)計(jì)引物時(shí)需做以下幾個(gè)方面的檢查，***需對(duì)設(shè)計(jì)好的引物進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，以確保引物的特異性！在數(shù)字PCR***定量實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于基因突變檢測、基因表達(dá)差異分析和拷貝數(shù)變異鑒定等對(duì)實(shí)驗(yàn)精細(xì)性要求較高的實(shí)驗(yàn)，需要特異性更高的Assay。QIAGEN基于QIAcuity數(shù)字PCR平臺(tái)開發(fā)并驗(yàn)證了針對(duì)上述常見應(yīng)用的700多組dPCR LNA Assay，所有Assay均經(jīng)過鎖核酸修飾來增強(qiáng)其對(duì)互補(bǔ)序列的親和力和特異性，進(jìn)而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。浙江高精確度數(shù)字PCR經(jīng)驗(yàn)豐富數(shù)字PCR技術(shù)為基因表達(dá)分析提供了高精確的定量分析方法。
肺*的ALK融合基因檢測：ALK融合基因是NSCLC患者另外一個(gè)常規(guī)的伴隨診斷，可以指導(dǎo)ALK-TKI藥物的使用，目前已發(fā)現(xiàn)20種以上EML4-ALK的融合形式，多個(gè)報(bào)道證實(shí)它們中大部分能促進(jìn)**生成。另外ALK還可能與TFG、KIF5B、KLC1、PTPN3、STRN等基因發(fā)生融合，因此ALK融合突變的診斷具有一定難度。目前臨床常規(guī)使用的檢測手段包括免疫組化（Immunohistochemistry，IHC），熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）以及RT-PCR等三種。這三種方法各具優(yōu)缺點(diǎn)：IHC相對(duì)簡單，價(jià)格低廉，但是容易受到主觀判斷的影響；FISH可以檢測各種融合類型，但是操作繁瑣，價(jià)格昂貴；RT-PCR方法的特異性較好，結(jié)果客觀，但是只能針對(duì)已知類型。近期有研究者采用數(shù)字PCR，利用ALK基因3’端的過表達(dá)來鑒定ALK的融合，該方法既具有PCR方法特異性好、結(jié)果客觀的優(yōu)勢，同時(shí)又不受融合類型的限制，可以檢測所有融合型，在與三種傳統(tǒng)方法的對(duì)比過程中展現(xiàn)出了更好的臨床符合率，未來有望成為一種新的常規(guī)檢測手段。
雖然數(shù)字PCR的優(yōu)勢與臨床應(yīng)用前景已在許多研究中得到確認(rèn)，但想要進(jìn)一步在臨床廣泛應(yīng)用，數(shù)字PCR需要針對(duì)以下幾個(gè)方面進(jìn)行升級(jí)：商用數(shù)字PCR系統(tǒng)需要進(jìn)一步提升樣本檢測通量以充分滿足COVID-19普篩的需求；需要制定國家或行業(yè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)；需要產(chǎn)業(yè)界進(jìn)一步降低設(shè)備成本；基于數(shù)字PCR的**檢測試劑盒需要經(jīng)過嚴(yán)格多中心評(píng)價(jià)，并獲得NMPA、FDA、CE等監(jiān)管機(jī)構(gòu)的認(rèn)證。隨著科研和產(chǎn)業(yè)的持續(xù)研發(fā)和投入，未來數(shù)字PCR將在實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院得到更多的應(yīng)用，用于解決科研和臨床問題，提供更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。數(shù)字PCR有望成為下一代分子診斷的**技術(shù)。轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測。
ddPCR主要有Bio-rad公司開發(fā)的QX200系統(tǒng)和Rain Drop系統(tǒng)，QX200可以將體系分割成2萬個(gè)微滴，Rain Drop可以分割成100萬-1 000萬個(gè)微滴。ddPCR原理是通過將一個(gè)待分析的PCR反應(yīng)體系進(jìn)行微滴化處理，利用微滴發(fā)生器制成近20 000個(gè)油包水小微滴從而對(duì)原始體系進(jìn)行分割，樣品中的核酸分子隨機(jī)分配到大量**的微滴中，每個(gè)微滴中含有一個(gè)或不含待檢核酸分子。對(duì)微滴體系進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)以后，分析每個(gè)微滴的熒光信號(hào)，進(jìn)行有或無的判斷，將判斷結(jié)果按照泊松分布的原理，通過讀取靶標(biāo)和內(nèi)參核酸的陽性微滴個(gè)數(shù)以及比例從而得到靶分子的拷貝數(shù)及濃度。與芯片式dPCR相比，操作簡單，可以實(shí)現(xiàn)高通量的檢測，也保證一定程度上的微滴檢測穩(wěn)定性。定量方法不依賴于擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值。江蘇重現(xiàn)性數(shù)字PCR服務(wù)
可以用來驗(yàn)證二代測序(NGS)。浙江數(shù)字PCR數(shù)字PCR怎么樣
乳腺*的分型：ER，PR和HER2是乳腺***常用的分子標(biāo)志物，在患者在開始***之前必須要明確這幾個(gè)分子標(biāo)志物的具體狀態(tài)。傳統(tǒng)的檢測方法是通過IHC來確定蛋白的表達(dá)情況，而HER2檢測也還可以通過FISH來判斷染色體的擴(kuò)增情況。盡管相應(yīng)的檢測都有明確的指南來加以規(guī)范，但是在臨床實(shí)踐過程之中，有些檢測結(jié)果不可避免的還是會(huì)受到人為操作和判讀的主觀影響，從而導(dǎo)致同一樣本的結(jié)果偏差，為臨床的治療帶來了極大的困惑。有研究者嘗試采用四重?cái)?shù)字PCR方法，對(duì)這幾個(gè)標(biāo)志物同時(shí)進(jìn)行定量檢測。95例石蠟標(biāo)本的對(duì)比分析結(jié)果顯示，HER2，ER和PR與IHC的一致性分別為96.8%，91.5%和85.1%，而ROC曲線下面積則分別為0.991，0.977和0.920，說明該方法與IHC方法有較好的一致性。此外，相比于IHC方法，數(shù)字PCR方法還具有操作和判讀標(biāo)準(zhǔn)化、結(jié)果重復(fù)性好、檢測周期短、標(biāo)本使用量少等優(yōu)勢，未來在臨床將會(huì)有很好的應(yīng)用前景。浙江數(shù)字PCR數(shù)字PCR怎么樣