雖然數(shù)字PCR的優(yōu)勢(shì)與臨床應(yīng)用前景已在許多研究中得到確認(rèn)，但想要進(jìn)一步在臨床廣泛應(yīng)用，數(shù)字PCR需要針對(duì)以下幾個(gè)方面進(jìn)行升級(jí)：商用數(shù)字PCR系統(tǒng)需要進(jìn)一步提升樣本檢測(cè)通量以充分滿足COVID-19普篩的需求；需要制定國(guó)家或行業(yè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)；需要產(chǎn)業(yè)界進(jìn)一步降低設(shè)備成本；基于數(shù)字PCR的**檢測(cè)試劑盒需要經(jīng)過(guò)嚴(yán)格多中心評(píng)價(jià)，并獲得NMPA、FDA、CE等監(jiān)管機(jī)構(gòu)的認(rèn)證。隨著科研和產(chǎn)業(yè)的持續(xù)研發(fā)和投入，未來(lái)數(shù)字PCR將在實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院得到更多的應(yīng)用，用于解決科研和臨床問(wèn)題，提供更準(zhǔn)確的診斷結(jié)果。數(shù)字PCR有望成為下一代分子診斷的**技術(shù)。低豐度DNA模板分子的精確定量。山東高精確度數(shù)字PCR經(jīng)驗(yàn)豐富
數(shù)字PCR采用的策略概括起來(lái)非常簡(jiǎn)單，就是“分而治之”（divide and conquer），這種做法非常類似于計(jì)算機(jī)科學(xué)中的“分治算法”，將一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)分配到大量微小的反應(yīng)器中，在每個(gè)反應(yīng)器中包含或不包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的目標(biāo)分子( DNA模板) ，實(shí)現(xiàn)“單分子模板PCR擴(kuò)增”，擴(kuò)增結(jié)束后，通過(guò)陽(yáng)性反應(yīng)器的數(shù)目“數(shù)出”目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。在實(shí)際的數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)中，事實(shí)上是通過(guò)呈現(xiàn)兩種信號(hào)類型的反應(yīng)器比例和數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算出原始樣本中的模板拷貝數(shù)。浙江數(shù)字PCR數(shù)字PCR歡迎咨詢?cè)趃DNA長(zhǎng)度≥20kb或進(jìn)行拷貝數(shù)變異檢測(cè)實(shí)驗(yàn)時(shí)，必須對(duì)樣品進(jìn)行酶切處理。
拷貝數(shù)變異(CNV)研究：數(shù)字PCR直接讀取陽(yáng)性信號(hào)，通過(guò)泊松分布校正得到目標(biāo)基因的***拷貝數(shù)，為拷貝數(shù)變異的研究提供了***的檢測(cè)精度。采用數(shù)字PCR能夠有效對(duì)二代測(cè)序（NGS）和微陣列比較基因組雜交（aCGH）等實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，并具有檢測(cè)周期短、成本低、樣本通量高等特點(diǎn)。低豐度DNA模板分子的精確定量：由于絕大部分微液滴中只含單個(gè)或不含模板分子，使得低豐度DNA模板分子的擴(kuò)增不受高豐度模板分子擴(kuò)增的競(jìng)爭(zhēng)抑制：與此同時(shí)，樣品中可能存在的抑制劑也在分配到微液滴的過(guò)程中進(jìn)行了相對(duì)稀釋，作用于單個(gè)微液滴內(nèi)模板擴(kuò)增的抑制劑數(shù)量大幅降低，從而提高PCR擴(kuò)增對(duì)抑制劑的耐受程度，因此可應(yīng)用于諸多臨床樣品（如血液、尿液、糞便、痰液、胸腹水、腦脊液等）中痕量核酸標(biāo)記物的檢測(cè)。一般而言，定量PCR的檢測(cè)靈敏度約在1%，NGS的靈敏度可達(dá)到1%，而數(shù)字PCR的檢測(cè)下限可輕松實(shí)現(xiàn)0.01%。
QuantaLife 利用油包水微滴生成技術(shù) 開(kāi)發(fā)了微滴式數(shù)字PCR技術(shù)，這也是**早出現(xiàn)的相對(duì)成熟的數(shù)字PCR平臺(tái)，在運(yùn)行成本和實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性方面都基本達(dá)到了商品化的標(biāo)準(zhǔn)。2011年，QuantaLife 公司被Bio-Rad公司收購(gòu)，其微滴式數(shù)字PCR儀產(chǎn)品更名為QX100型號(hào)儀繼續(xù)在市場(chǎng)上銷售，這個(gè)早期型號(hào)為dPCR概念的普及和應(yīng)用領(lǐng)域的拓展發(fā)揮了重要作用。2013年該公司又推出了升級(jí)型號(hào)QX200。2012年，RainDance公司推出Raindrop型號(hào)數(shù)字PCR設(shè)備，這個(gè)設(shè)備將其原有的二代測(cè)序文庫(kù)制備平臺(tái)技術(shù)平移到數(shù)字PCR技術(shù)平臺(tái)，在高壓氣體驅(qū)動(dòng)下，將每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分割成包含100萬(wàn)至1000萬(wàn)個(gè)皮升級(jí)別微滴的反應(yīng)乳液， 該公司的創(chuàng)始人之一Darren Link表示這種超高的微滴數(shù)目可以為用戶“提供更高的檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍，適用于處理更大濃度差異的不同樣品”。微反應(yīng)單元體積大小一致且穩(wěn)定是泊松分布準(zhǔn)確計(jì)算的前提。
*****的實(shí)時(shí)監(jiān)控：已有數(shù)篇文章報(bào)道了使用數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)患者***過(guò)程中的循環(huán)**DNA（ctDNA）進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)時(shí)監(jiān)控疾病進(jìn)展。在非小細(xì)胞肺*、乳腺*和腸*等多種**患者中都取得了令人鼓舞的結(jié)果。與影像學(xué)及其他常規(guī)指標(biāo)相比，ctDNA突變及豐度改變通常會(huì)提前數(shù)月出現(xiàn)，這樣就可以提醒醫(yī)生及時(shí)調(diào)整***方案，使患者得到更有效的***。無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前篩查：唐氏綜合征、地中海貧血或胎兒遺傳性耳聾基因檢測(cè)等，目前無(wú)創(chuàng)檢測(cè)標(biāo)本來(lái)源主要為孕婦血液，檢測(cè)胎兒DNA會(huì)受到母體DNA的干擾，依靠數(shù)字PCR可提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。對(duì)比NGS，數(shù)字PCR技術(shù)可以提高工作效率、降低檢測(cè)成本。PCR 擴(kuò)增和熒光信號(hào)分析。天津準(zhǔn)確數(shù)字PCR經(jīng)驗(yàn)豐富
良好的引物探針設(shè)計(jì)是數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)獲得成功的關(guān)鍵因素之一。山東高精確度數(shù)字PCR經(jīng)驗(yàn)豐富
乳腺*的分型：ER，PR和HER2是乳腺***常用的分子標(biāo)志物，在患者在開(kāi)始***之前必須要明確這幾個(gè)分子標(biāo)志物的具體狀態(tài)。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法是通過(guò)IHC來(lái)確定蛋白的表達(dá)情況，而HER2檢測(cè)也還可以通過(guò)FISH來(lái)判斷染色體的擴(kuò)增情況。盡管相應(yīng)的檢測(cè)都有明確的指南來(lái)加以規(guī)范，但是在臨床實(shí)踐過(guò)程之中，有些檢測(cè)結(jié)果不可避免的還是會(huì)受到人為操作和判讀的主觀影響，從而導(dǎo)致同一樣本的結(jié)果偏差，為臨床的治療帶來(lái)了極大的困惑。有研究者嘗試采用四重?cái)?shù)字PCR方法，對(duì)這幾個(gè)標(biāo)志物同時(shí)進(jìn)行定量檢測(cè)。95例石蠟標(biāo)本的對(duì)比分析結(jié)果顯示，HER2，ER和PR與IHC的一致性分別為96.8%，91.5%和85.1%，而ROC曲線下面積則分別為0.991，0.977和0.920，說(shuō)明該方法與IHC方法有較好的一致性。此外，相比于IHC方法，數(shù)字PCR方法還具有操作和判讀標(biāo)準(zhǔn)化、結(jié)果重復(fù)性好、檢測(cè)周期短、標(biāo)本使用量少等優(yōu)勢(shì)，未來(lái)在臨床將會(huì)有很好的應(yīng)用前景。山東高精確度數(shù)字PCR經(jīng)驗(yàn)豐富