20 世紀末，Vogelstein等提出數(shù)字PCR(digital PCR，dPCR) 的概念，通過將一個樣本分成幾十到幾萬份，分配到不同的反應(yīng)單元，每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子( DNA 模板) ，在每個反應(yīng)單元中分別對目標分子進行PCR擴增，擴增結(jié)束后對各個反應(yīng)單元的熒光信號進行統(tǒng)計學(xué)分析。與 qPCR 不同的是，數(shù)字PCR不依賴于CT值，因此不受擴增效率影響，擴增結(jié)束后通過直接計數(shù)或泊松分布公式來計算每個反應(yīng)單元的平均濃度(含量)，能夠?qū)⒄`差控制在5%以內(nèi)，數(shù)字PCR 可以不需要對照標準樣品和標準曲線來實現(xiàn)***定量分析。開發(fā)多靶點檢測的多重數(shù)字PCR檢測，可以通過多種熒光染料或標記技術(shù)來實現(xiàn)。北京準確數(shù)字PCR售后分析
拷貝數(shù)變異(CNV)研究：數(shù)字PCR直接讀取陽性信號，通過泊松分布校正得到目標基因的***拷貝數(shù)，為拷貝數(shù)變異的研究提供了***的檢測精度。采用數(shù)字PCR能夠有效對二代測序（NGS）和微陣列比較基因組雜交（aCGH）等實驗結(jié)果進行驗證，并具有檢測周期短、成本低、樣本通量高等特點。低豐度DNA模板分子的精確定量：由于絕大部分微液滴中只含單個或不含模板分子，使得低豐度DNA模板分子的擴增不受高豐度模板分子擴增的競爭抑制：與此同時，樣品中可能存在的抑制劑也在分配到微液滴的過程中進行了相對稀釋，作用于單個微液滴內(nèi)模板擴增的抑制劑數(shù)量大幅降低，從而提高PCR擴增對抑制劑的耐受程度，因此可應(yīng)用于諸多臨床樣品（如血液、尿液、糞便、痰液、胸腹水、腦脊液等）中痕量核酸標記物的檢測。一般而言，定量PCR的檢測靈敏度約在1%，NGS的靈敏度可達到1%，而數(shù)字PCR的檢測下限可輕松實現(xiàn)0.01%。北京數(shù)字PCR數(shù)字PCR口碑推薦微反應(yīng)單元體積越均一穩(wěn)定、數(shù)量相對越多，定量的整體精度就越高。
***代PCR技術(shù)是常規(guī)PCR技術(shù)，對目的基因擴增后進行凝膠電泳，將擴增條帶與已知濃度的標準品比較，得到定性結(jié)果，但在產(chǎn)物分析時需要開蓋操作，容易引起交叉污染，導(dǎo)致假陽性。第二代PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR反應(yīng)進程，通過相關(guān)數(shù)據(jù)分析方法對目的基因進行定量分析的技術(shù)。數(shù)字PCR是第三代PCR技術(shù)，是一種采用微流控或微滴化的方法將稀釋后的待測樣品核酸溶液分散至微反應(yīng)器或微滴中再在相同條件下進行單分子PCR，檢測每一個微反應(yīng)器或微滴中熒光信號通過直接計數(shù)或泊松分布修正得到原始濃度或含量的核酸分子***定量技術(shù)。目前大致可分為三類：微反應(yīng)室/孔板數(shù)字PCR、大規(guī)模集成微流控芯片數(shù)字PCR、液滴數(shù)字PCR。
微流控芯片技術(shù)的發(fā)展為我們提供了一個實現(xiàn)低成本、小體積和高通量平行PCR分析的理想平臺。2000年，Unger等采用多層軟刻蝕 ( multilayer soft lithography，MSL) 技術(shù)在聚二甲基硅氧烷( polydimethylsiloxane，PDMS) 微流控芯片上設(shè)計并加工高密度微泵微閥結(jié)構(gòu)(如圖2b所示) ，他們將這種芯片稱為IFC( integrated fluidic circuit)。IFC 利用PDMS材料具有高彈性的特點，通過多層軟刻蝕技術(shù)在芯片上加工交織的液體和氣體通道結(jié)構(gòu)，可以快速并準確地將流體分成若干個**的單元，進行多步平行反應(yīng)。2006 年Ottesen等將IFC芯片用于數(shù)字PCR分析，通過精細控制微泵微閥的開啟和關(guān)閉，一步操作即可將一個樣本平均分配到 1176個反應(yīng)單元中，每個反應(yīng)單元的體積只有6. 25 nl，成功代替了傳統(tǒng)點樣儀和384孔板。他們同時進行了6個樣本7 056個單元的平行數(shù)字PCR分析。此外， Hansen及其同事采用 MSL技術(shù)加工了具有10^6個結(jié)構(gòu)單元的數(shù)字PCR 芯片，每個反應(yīng)單元的體積降低至10 pl，芯片密度達到 440000 /cm2。與微反應(yīng)室數(shù)字PCR系統(tǒng)相比，IFC的特點是通量更高，每個反應(yīng)單元的體積更小，加樣更快。**近，Men等在2mm×2mm區(qū)域內(nèi)加工了82000個 fl 級反應(yīng)單元，進行數(shù)字PCR分析?？梢杂脕頇z測外泌體micRNA。
*****的實時監(jiān)控：已有數(shù)篇文章報道了使用數(shù)字PCR技術(shù)對患者***過程中的循環(huán)**DNA（ctDNA）進行檢測，實時監(jiān)控疾病進展。在非小細胞肺*、乳腺*和腸*等多種**患者中都取得了令人鼓舞的結(jié)果。與影像學(xué)及其他常規(guī)指標相比，ctDNA突變及豐度改變通常會提前數(shù)月出現(xiàn)，這樣就可以提醒醫(yī)生及時調(diào)整***方案，使患者得到更有效的***。無創(chuàng)產(chǎn)前篩查：唐氏綜合征、地中海貧血或胎兒遺傳性耳聾基因檢測等，目前無創(chuàng)檢測標本來源主要為孕婦血液，檢測胎兒DNA會受到母體DNA的干擾，依靠數(shù)字PCR可提高檢測準確性。對比NGS，數(shù)字PCR技術(shù)可以提高工作效率、降低檢測成本。低豐度DNA模板分子的精確定量。天津數(shù)字PCR怎么樣
微反應(yīng)單元體積大小一致且穩(wěn)定是泊松分布準確計算的前提。北京準確數(shù)字PCR售后分析
微生物（病毒、細菌等）的檢測：疾病預(yù)防控制中心、出入境檢驗檢疫局系統(tǒng)的實驗室可以將基于TaqMan探針法的定量PCR體系無縫地轉(zhuǎn)移到數(shù)字PCR上，從而滿足該類實驗室對于檢測結(jié)果的要求：靈敏度更高、重復(fù)性更好、無需依賴標準曲線的***定量結(jié)果。其他應(yīng)用：數(shù)字PCR還可以用于轉(zhuǎn)基因成分的檢測、移植排斥監(jiān)控、腸道菌群分析以及藥物基因組檢測等領(lǐng)域。隨著數(shù)字PCR熒光通道的增加和多指標檢測的成熟，數(shù)字PCR將會進入更多應(yīng)用領(lǐng)域，有力推動生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、檢驗檢疫、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的快速發(fā)展。北京準確數(shù)字PCR售后分析