有些研究證明外泌體miRNA的表達(dá)水平在不同生理?xiàng)l件下是會(huì)變化的。在健康人血清外泌體中，miR-21的水平比那些惡性膠質(zhì)瘤患者更低。在非小細(xì)胞肺*患者血漿囊泡中，let-7f,miR-20b和miR-30e-3p的水平比正常對(duì)照組更低。在良性**和卵巢*中，發(fā)現(xiàn)了八種外泌體miRNA的表達(dá)水平不同，包括miR-21和miR141。以上研究都表明外泌體的來源細(xì)胞有一種分揀機(jī)制來指導(dǎo)特異性的miRNA進(jìn)入外泌體。根據(jù)前人的研究，存在一種類型的miRNA，它們更偏好于被裝入外泌體，如miR-320和miR-150。miR-320家族***分布于正常組織和**分泌的外泌體中。miR-150在HEK293T細(xì)胞株、**患者的外周血、集落刺激因子-1誘導(dǎo)的骨髓來源的巨噬細(xì)胞和結(jié)腸*患者血清中的外泌體中都有高表達(dá)。而且，一些miRNA，如miR-451，在正常細(xì)胞來源的外泌體中高表達(dá)，如HMC-1細(xì)胞株、HEK293T細(xì)胞株和初級(jí)T淋巴細(xì)胞。還有一些miRNA，如miR-214和miR-155，在**細(xì)胞株來源的和**患者外周血的外泌體中含量豐富。 腦脊液抽提外泌體需要提供多少量？江蘇提取試劑盒外泌體報(bào)價(jià)
Microenvironment-inducedPTENlossbyexosomalmicroRNAprimesbrainmetastasisoutgrowth。思路：2.那么到底是腦微環(huán)境中的哪種細(xì)胞，哪種物質(zhì)介導(dǎo)，致使PTEN丟失呢？作者想想腦內(nèi)的**細(xì)胞周圍無非是：星形膠質(zhì)細(xì)胞，**相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)，正常成纖維細(xì)胞，就把這些細(xì)胞分別與**細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)只有與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)后，PTEN的表達(dá)明顯下降。接著作者就把星形膠質(zhì)細(xì)胞給干擾掉，把星形膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)特異性靶向PTEN丟失的microRNA干掉，發(fā)現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移的**細(xì)胞內(nèi)的PTEN沒有丟失，瘤體也變小了。得出第二個(gè)結(jié)論：星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的miR-19a沉默了**細(xì)胞中的PTEN。 天津鑒定外泌體報(bào)價(jià)血漿樣品外泌體怎么制備？
Nature：從血液通過exosomes入手早期確診**。原文標(biāo)題：Glypican-1identifiescancerexosomesanddetectsearlypancreaticcancer。原文摘要：Exosomes are lipid-bilayer-enclosed extracellular vesicles that contain proteins and nucleic acids. They are secreted by all cells and circulate in the blood. Specific detection and isolation of cancer-cell-derived exosomes in the circulation is currently lacking. Using mass spectrometry analyses, we identify a cell surface proteoglycan, glypican-1 (GPC1), specifically enriched on cancer-cell-derived exosomes. GPC1+ circulating exosomes (crExos) were monitored and isolated using flow cytometry from the serum of patients and mice with cancer. GPC1+ crExos were detected in the serum of patients with pancreatic cancer with absolute specificity and sensitivity, distinguishing healthy subjects and patients with a benign pancreatic disease from patients with early- and late-stage pancreatic cancer. Levels of GPC1+ crExos correlate with tumour burden and the survival of pre- and post-surgical patients.
樣本準(zhǔn)備注意事項(xiàng)：●采集的樣本需要符合納入標(biāo)準(zhǔn)：如年齡、肥胖（身高、體重）、血糖血脂血壓、診斷情況等?！窠y(tǒng)一早晨空腹**，盡量避免樣本間的差異影響?！袢鐐€(gè)別樣本發(fā)生溶血，則棄掉?！駱颖揪幪?hào)用油性筆清楚地寫在管壁及管蓋上。●離心管在放入冰箱前，用封口膜密封?！袢绻峁┑氖莾龃婕?xì)胞株，需提供詳盡的復(fù)蘇方法?！窦?xì)胞培養(yǎng)基必須使用去除exosome（de-exosome）的血清或者無血清培養(yǎng)基（例如ThermoFisher的SFM）?！穹蛛x外泌體前的樣品不能加入任何RNA保護(hù)劑（如Trizol）?！穹蛛x好的外泌體如需進(jìn)行電鏡觀察，需要放4°C保存，并且不宜保存太久。●全血建議使用PAXgene管保存，不可凍融，取血后盡早制備血漿或血清，血漿或血清可以-80°C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。●儲(chǔ)存條件以及儲(chǔ)存時(shí)間影響外泌體得率，保存在-80℃冰箱中的樣本，如果儲(chǔ)存時(shí)間過長，外泌體產(chǎn)量也會(huì)***降低?！窀杀\(yùn)輸應(yīng)采用壁厚且質(zhì)量完好的泡沫箱，24小時(shí)到達(dá)的，干冰數(shù)量不得低于5公斤；48小時(shí)到達(dá)的，干冰數(shù)量不得低于8公斤；夏季適當(dāng)增加干冰（倍）。 尿液的外泌體怎么制備？
分離:超速離心法:超速離心法是外泌體分離**常見的技術(shù)之一。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，約有1/2的研究者會(huì)選擇該種方式分離外泌體。該方法由幾個(gè)離心步驟組成，可分步去除細(xì)胞、細(xì)胞碎片和大囊泡，沉淀外泌體。但該種方法用于血漿和血清等粘性生物液體時(shí)效率較低，且重復(fù)離心操作有可能對(duì)外泌體造成損害，從而降低其質(zhì)量。如將超速離心配合蔗糖溶液進(jìn)行梯度密度離心可得到純度更高的外泌體，是公認(rèn)可以得到**高純度的分離方法。但此法對(duì)離心時(shí)間非常敏感，一般需要8-30h，產(chǎn)率較低，同樣不適用于血漿和血清等粘性生物液體中外泌體的分離，因此難以***普及。聚合物沉淀法:第二大主流的外泌體分離技術(shù)就是基于聚合物的沉淀法了，**常見的聚合物是聚乙二醇（PEG）。通常將含有聚合物的沉淀溶液與生物體液混合，4℃溫育，低速離心，沉淀外泌體。目前已有成熟的PEG-base商業(yè)試劑盒，比如圖中的ExoQuick?（SystemBiosciences）。這類試劑盒使用容易和快速，不需要額外的設(shè)備，且隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化效果逐漸提高，因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。沉淀法的主要缺點(diǎn)是分離物中會(huì)有少量的聚合物存在。不過大家不用擔(dān)心，一般來說這些物質(zhì)不會(huì)干擾下游分析。膽汁抽提外泌體需要提供多少量？北京粒徑外泌體多少錢
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體液樣本收集外泌體。1、選擇血清還是血漿？推薦大多數(shù)研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會(huì)產(chǎn)生大量外泌體，含量占血清中外泌體的50%以上，選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān)，這可能是因?yàn)楦嗡嘏c引物和/或酶有競(jìng)爭(zhēng)作用。除了***PCR，肝素可以與外泌體結(jié)合，阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物治療的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達(dá)莫（CTAD），CTAD可以阻止血小板的***并***其釋放外泌體。EDTA可能會(huì)干擾PCR反應(yīng)（盡管其程度小于肝素），但是還是優(yōu)于其他選擇。此外，有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或檸檬酸鹽處理后的血液樣本中外泌體的表觀數(shù)量。使用肝素時(shí)這種影響就不會(huì)發(fā)生，因此建議在測(cè)量外泌體的精確數(shù)量時(shí)選用肝素。但是也有研究表明肝素可以導(dǎo)致體外條件下外泌體的減少?？傊?，目前尚需要更多的研究論證抗凝劑是否及如何對(duì)外泌體的釋放，作用和下游反應(yīng)產(chǎn)生特異性影響。 江蘇提取試劑盒外泌體報(bào)價(jià)