Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在PCR產(chǎn)物的克隆中主要應(yīng)用在以下幾個(gè)方面:1.**單鏈DNA的生成**:-Lambda核酸外切酶可以用于從雙鏈DNA中生成單鏈DNA。由于該酶沿5'→3'方向逐步切去5'單核苷酸,底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,因此可以用來(lái)消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,從而生成單鏈DNA,這對(duì)于某些克隆技術(shù)來(lái)說(shuō)是必要的步驟。2.**PCR產(chǎn)物的克隆**:-在克隆過(guò)程中,有時(shí)需要將PCR產(chǎn)物的5'端磷酸化,以便與載體連接。Lambda核酸外切酶可以消化非磷酸化的DNA,從而在一定程度上幫助準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物。3.**減少自身環(huán)化和非特異性連接**:-在連接反應(yīng)中,為了減少質(zhì)粒載體的自身環(huán)化,可以使用堿性磷酸酶處理質(zhì)粒DNA以去除5'磷酸基團(tuán)。而Lambda核酸外切酶可以消化5'端磷酸化的DNA,因此在某些情況下,它可以輔助減少PCR產(chǎn)物的自身環(huán)化,尤其是在PCR產(chǎn)物和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)中。4.**提高克隆效率**:-通過(guò)消化PCR產(chǎn)物中的一條鏈,Lambda核酸外切酶可以幫助減少PCR產(chǎn)物的非特異性連接,從而提高克隆的效率和準(zhǔn)確性。綜上所述,Lambda核酸外切酶在PCR產(chǎn)物的克隆中主要通過(guò)生成單鏈DNA、準(zhǔn)備適合克隆的PCR產(chǎn)物、減少自身環(huán)化和非特異性連接以及提高克隆效率等方面發(fā)揮作用。T4 DNA 聚合酶相對(duì)不耐熱,在 70℃加熱 10 分鐘可使 T4 DNA 聚合酶失活,因此在實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中需要注意溫度。Recombinant Human CDH16/Cadherin 16 Protein,His Tag
一、產(chǎn)品特點(diǎn)Taq PCR Master Mix (2×) (With Dye)是一種預(yù)混型的PCR反應(yīng)體系,其濃度為2×,使用時(shí)只需按照1:1的比例與模板和引物混合,即可直接進(jìn)行反應(yīng),極大地簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作流程,減少了人為誤差。同時(shí),該產(chǎn)品含有染料,無(wú)需在PCR反應(yīng)結(jié)束后添加上樣緩沖液,可直接進(jìn)行電泳分析,進(jìn)一步提高了實(shí)驗(yàn)效率。在成分方面,該產(chǎn)品采用了高質(zhì)量的Taq DNA聚合酶,這種酶具有強(qiáng)大的熱穩(wěn)定性和高效的催化活性,能夠在高溫條件下穩(wěn)定地催化DNA合成反應(yīng)。此外,還添加了優(yōu)化的緩沖體系和dNTPs,確保了反應(yīng)的高效性和特異性。這些成分的協(xié)同作用,使得Taq PCR Master Mix (2×) (With Dye)在各種復(fù)雜的模板和引物條件下,均能表現(xiàn)出優(yōu)異的擴(kuò)增效果。二、性能優(yōu)勢(shì)高靈敏度與特異性:Taq PCR Master Mix (2×) (With Dye)能夠精細(xì)地識(shí)別并擴(kuò)增目標(biāo)基因片段,即使在模板濃度較低的情況下,也能實(shí)現(xiàn)高效的擴(kuò)增。其特異性高,可有效避免非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。Recombinant Human CD93/C1q R1 (hFc Tag)來(lái)源于Francisella tularensis:FnCas12a是一種來(lái)源于Francisella tularensis菌株的核酸內(nèi)切酶。
ExoIII(ExonucleaseIII)和Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在DNA末端處理上的主要不同點(diǎn)如下:1.**作用方向**:-**ExoIII**:具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性,它從DNA鏈的3'-OH末端逐步切去單核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**:是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**底物特異性**:-**ExoIII**:適底物是平末端或5'末端突出的DNA,但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點(diǎn)產(chǎn)生單鏈缺口。由于對(duì)單鏈DNA無(wú)活性,因此難以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**:適底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,對(duì)單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**活性差異**:-**ExoIII**:對(duì)具有3'-突出末端(至少有4個(gè)堿基,且具有3'-末端C殘基)的DNA、單鏈DNA、硫代磷酸酯連接的核苷酸無(wú)活性。-**Lambda核酸外切酶**:對(duì)5'-OH端的切割速度比5'-P端慢約20倍;對(duì)單鏈DNA的酶切速度比雙鏈DNA慢約100倍。4.**應(yīng)用場(chǎng)景**:-**ExoIII**:可以用于生產(chǎn)特定方向的單鏈DNA,將線性化DNA設(shè)計(jì)成為一端為不切割末端(3'突出端),另一端則設(shè)計(jì)為易切割末端(平端或5'突出端)。
BstDNA聚合酶對(duì)dUTP的耐受性對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有以下影響:1.**防止交叉污染**:BstDNA聚合酶具有較高的dUTP耐受性,這意味著它可以在反應(yīng)體系中添加dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng)的情況下工作,有效防止LAMP產(chǎn)物的交叉污染,確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。2.**保持靈敏度和擴(kuò)增效率**:即使在引入dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng),使用dUTP替換dTTP的情況下,BstDNA聚合酶的靈敏度及擴(kuò)增效率不受影響。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,在反應(yīng)體系中添加dUTP對(duì)BstDNA聚合酶的擴(kuò)增靈敏度和效率沒(méi)有負(fù)面影響。3.**提高實(shí)驗(yàn)的可靠性**:由于BstDNA聚合酶能夠在高濃度的dUTP存在下保持活性,這使得它在進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增時(shí)更加可靠,尤其是在需要防止DNA污染的實(shí)驗(yàn)中。4.**兼容dUTP/UDG系統(tǒng)**:BstDNA聚合酶對(duì)dUTP的耐受性好,高度兼容dUTP/UDG系統(tǒng),這對(duì)于避免交叉污染和提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。綜上所述,BstDNA聚合酶的高dUTP耐受性為等溫?cái)U(kuò)增實(shí)驗(yàn)提供了一個(gè)重要的優(yōu)勢(shì),即在保持高靈敏度和擴(kuò)增效率的同時(shí),能夠有效防止交叉污染,從而提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。FnCas12a不僅可用于體外dsDNA的特異剪切,也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè),如HOLMES核酸快檢技術(shù)。
產(chǎn)品特點(diǎn)高靈敏度與特異性SYBRGreen是一種熒光染料,能夠特異性地結(jié)合到雙鏈DNA的小溝區(qū)域。在qPCR過(guò)程中,隨著DNA鏈的延伸,SYBRGreen的熒光信號(hào)不斷增強(qiáng),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的實(shí)時(shí)定量。這種染料的結(jié)合特異性極高,確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。即使在低濃度的模板條件下,也能檢測(cè)到目標(biāo)基因的存在,靈敏度可達(dá)單拷貝水平。2×預(yù)混體系,操作簡(jiǎn)便該產(chǎn)品采用2×預(yù)混體系,預(yù)先將Taq酶、dNTPs、MgCl?等關(guān)鍵組分混合均勻,實(shí)驗(yàn)人員需加入引物和模板即可進(jìn)行反應(yīng)。這種預(yù)混體系簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作步驟,減少了人為誤差,同時(shí)保證了反應(yīng)體系的均一性和穩(wěn)定性。無(wú)論是初學(xué)者還是經(jīng)驗(yàn)豐富的研究人員,都能輕松上手,快速開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。低ROX參比染料,減少背景干擾ROX染料作為qPCR反應(yīng)中的參比染料,用于校正孔間熒光信號(hào)的差異。然而,過(guò)高的ROX濃度可能會(huì)引入背景熒光,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。SYBRGreenqPCRMix(2×,LowROX)采用了低濃度的ROX染料,有效降低了背景干擾,提高了熒光信號(hào)的信噪比,使得定量結(jié)果更加精確可靠。Tn5 轉(zhuǎn)座酶可用于多種生物體,包括許多革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌以及酵母等。Recombinant Biotinylated Human Siglec-10 Protein,His-Avi Tag
SpCas9-NLS的N端和C端都融合了SV40 T抗原的核定位信號(hào),這使得Cas9蛋白與gRNA形成的復(fù)合物。Recombinant Human CDH16/Cadherin 16 Protein,His Tag
高純度與穩(wěn)定性dATP Solution (100 mM)采用高純度的鈉鹽形式,純度達(dá)到99%以上,通過(guò)HPLC檢測(cè)確保其質(zhì)量。這種高純度的dATP溶液能夠有效避免雜質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)的干擾,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。此外,該產(chǎn)品在-20℃下保存時(shí),有效期可達(dá)2年,且避免反復(fù)凍融后仍能保持穩(wěn)定。廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景dATP Solution (100 mM)適用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),包括但不限于PCR、real-time PCR、RT-PCR、cDNA合成、引物延伸反應(yīng)、DNA測(cè)序和DNA標(biāo)記等。其100 mM的濃度設(shè)計(jì)能夠滿足大多數(shù)實(shí)驗(yàn)需求,同時(shí)避免了因濃度過(guò)低而導(dǎo)致的反應(yīng)效率低下問(wèn)題。無(wú)核酸酶污染在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,核酸酶污染可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。dATP Solution (100 mM)經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢測(cè),確保無(wú)DNase和RNase污染,從而保證實(shí)驗(yàn)樣本的完整性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。即用型設(shè)計(jì)該產(chǎn)品以即用型溶液形式提供,無(wú)需額外處理即可直接用于實(shí)驗(yàn)。這種設(shè)計(jì)簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作流程,節(jié)省了研究人員的時(shí)間和精力。此外,其pH值經(jīng)過(guò)精確調(diào)節(jié),通常在7.0至7.5之間,確保在各種反應(yīng)條件下都能保持好活性。Recombinant Human CDH16/Cadherin 16 Protein,His Tag