Recombinant Canine ENPP-3 Protein

pA-MNase（蛋白A-微球菌核酸酶）在以下實驗中特別有用：1.**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**：這是一種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù)，pA-MNase在此技術(shù)中用于在免疫沉淀后切割染色質(zhì)DNA，以分析特定蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合位點。2.**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**：這是一種蛋白質(zhì)-基因組互作研究技術(shù)，pA-MNase在此技術(shù)中用于在目標(biāo)蛋白質(zhì)被抗體識別后，通過核酸酶活性切割附近的DNA，從而釋放與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的DNA片段。CUT&RUN技術(shù)相比傳統(tǒng)的ChIP-Seq具有實驗周期短、信噪比高、可重復(fù)性好以及細胞投入量低的優(yōu)勢，尤其適用于早期胚胎發(fā)育、干細胞、**以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。3.**染色質(zhì)免疫沉淀實驗**：pA-MNase在染色質(zhì)免疫沉淀實驗中用于染色質(zhì)片段化，它在核小體間DNAlinker上進行切割保持了核小體的完整性，并且由于其溫和的酶解條件，消除了超聲功率的可變性和超聲過程中染色質(zhì)乳化所帶來的負面影響。4.**去除核酸污染**：pA-MNase也可用于去除細胞裂解液中的核酸，以減少樣品的粘度，這對于后續(xù)的蛋白質(zhì)分析實驗尤為重要。

BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物學(xué)實驗中都是常用的酶，但它們之間存在一些關(guān)鍵的不同點：1.**來源和熱穩(wěn)定性**：-**TaqDNA聚合酶**來源于嗜熱菌Thermusaquaticus，具有很好的耐熱性，能夠承受PCR的熱變性步驟。-**BstDNA聚合酶**來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillusstearothermophilus），同樣具有較高的熱穩(wěn)定性，適用于等溫擴增，如LAMP技術(shù)，無需PCR熱循環(huán)。2.**酶活性**：-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性，但沒有3'-5'外切酶活性。這意味著它在DNA合成過程中可以校正一些錯誤，但保真性相對較低。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和強鏈置換活性，但缺乏5'-3'外切酶活性。這使得它在等溫擴增中更為有效，尤其是在需要高保真度和快速擴增的應(yīng)用中。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**：-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技術(shù)，適用于各種DNA片段的擴增，包括復(fù)雜模板和長片段的擴增。-**BstDNA聚合酶**特別適用于等溫擴增技術(shù)，如LAMP，這些技術(shù)不需要溫度循環(huán)，適用于快速、低成本的DNA擴增。4.**擴增速度和效率**：-**BstDNA聚合酶**在等溫擴增中顯示出比傳統(tǒng)TaqDNA聚合酶更快的擴增速度和更高的產(chǎn)量，尤其是在優(yōu)化的LAMP反應(yīng)中。

T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在突變體檢測和基因編輯效率評估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應(yīng)用步驟和特點：1.**基因編輯效率評估**：-T7EI用于評估CRISPR-Cas9在給定的導(dǎo)向RNA靶位點上對細胞群體進行基因編輯的效率。-通過PCR擴增圍繞CRISPR導(dǎo)向RNA靶位點的基因組DNA，如果CRISPR-Cas9介導(dǎo)的非同源末端連接（NHEJ）修復(fù)事件引入了突變，變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測**：-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變，則可與野生型DNA片段退火產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。T7EI可以識別該DNA上的不完全配對的DNA位點然后進行雙鏈切割，通過瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶，從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯配DNA，不能識別1bp的插入、缺失或突變。3.**實驗步驟**：-收集細胞并提取基因組DNA，然后使用PCR擴增期望編輯的基因組區(qū)域。擴增子的長度建議為0.5-1kb。-對擴增的DNA進行變性和退火復(fù)性，以產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產(chǎn)物，在37℃孵育15分鐘。

T5核酸外切酶在基因克隆中的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在以下幾個方面：1.**高效性**：T5核酸外切酶依賴性組裝（TEDA）方法在常規(guī)克隆中的效率與使用專有DNA聚合酶的商業(yè)In-Fusion方法相似，但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA連接酶的Gibson方法。2.**低成本**：TEDA方法每個反應(yīng)使用0.04U的T5核酸外切酶，價格為0.25美分，具有很高的成本效益。3.**簡單性**：TEDA方法的反應(yīng)混合物非常簡單，易于操作，這使得它在預(yù)算有限的實驗室中尤其有用。4.**靈活性**：TEDA方法能夠組裝多個DNA片段，并在多個位點同時進行定點誘變，提供了一種靈活的克隆和突變方法。5.**陽性克隆率**：使用T5核酸外切酶的無縫克隆技術(shù)可以確保100%的陽性克隆率，這提高了實驗的成功率。6.**協(xié)同作用**：在無縫克隆中，T5核酸外切酶與Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA連接酶協(xié)同作用，通過切割、填補和連接三個步驟，高效地完成DNA片段的連接。7.**減少污染**：T5核酸外切酶可以降解堿裂解提取質(zhì)粒中的變性DNA，減少超螺旋DNA的污染，提高DNA克隆和轉(zhuǎn)染效率。這些優(yōu)勢使得T5核酸外切酶成為基因克隆中一個非常有價值的工具，尤其是在需要高效、低成本和操作簡便的實驗環(huán)境中。在這個過程中，E1使用ATP的能量，在自身的活性位點的半胱氨酸殘基與泛素C末端的甘氨酸殘基形成硫酯鍵。

Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌（Thermophilic Geobacillus sp）DNA聚合酶I衍生的酶，缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息：來源和特性：Bst Plus DNA Polymerase 具有更強的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性，適合用于抗污染的等溫擴增反應(yīng)，如LAMP和CPA等。應(yīng)用：主要應(yīng)用于等溫DNA擴增，包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）和其他等溫擴增技術(shù)。規(guī)格：活性定義：1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分：包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油，pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式：提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)，貨號14402ES，以及凍干粉形式的產(chǎn)品，貨號14405ES，不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性：Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度，低至5copies目的基因可測，且在飛克（fg）級別的模板量下也能快速達到閾值。在37°C下，該酶可以保持相對穩(wěn)定的效應(yīng)長達5天，并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲存條件：建議在-25℃至-15℃下儲存，以保持產(chǎn)品活性，并避免反復(fù)凍融。Pfu DNA Polymerase在基因克隆中的應(yīng)用：Pfu DNA Polymerase常用于基因克隆，確保DNA片段的高精度復(fù)制。Recombinant Cynomolgus NKp46/NCR1/CD335 Protein,His Tag

泛素分子可以通過其內(nèi)部的賴氨酸殘基（如Lys48）與其他泛素分子形成多聚泛素鏈。Recombinant Canine ENPP-3 Protein,His Tag

核酸內(nèi)切酶VIII（EndonucleaseVIII）和核酸內(nèi)切酶III（EndonucleaseIII）都是DNA修復(fù)酶，但它們之間存在一些關(guān)鍵的區(qū)別：1.**活性類型**：-**核酸內(nèi)切酶VIII**：具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。N-糖基化酶活性可以釋放受損的嘧啶堿基，如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇，產(chǎn)生一個脫嘌呤(Apurinic,AP)位點；AP裂解酶活性可以切割A(yù)P位點的3'和5'端，產(chǎn)生一個具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。-**核酸內(nèi)切酶III**：主要具有β裂解酶(β-lyase)活性，能夠切割DNA磷二酯骨架在AP位點處，但不具備δ裂解酶(δ-lyase)活性。2.**識別和切除的受損堿基**：-**核酸內(nèi)切酶VIII**：可以識別并切除包括尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內(nèi)酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲在內(nèi)的多種受損堿基。-**核酸內(nèi)切酶III**：主要識別和切除氧化性損傷的嘌呤堿基，如8-氧鳥嘌呤。3.**裂解酶活性**：-**核酸內(nèi)切酶VIII**：具有β和δ裂解酶活性，而**核酸內(nèi)切酶III**具有β裂解酶活性。這些區(qū)別決定了它們在DNA損傷修復(fù)中的作用和應(yīng)用范圍。